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用于改善脂肪酸含量而开发的铜绿假单孢菌菌株及制备方法

  • 专利名称
    用于改善脂肪酸含量而开发的铜绿假单孢菌菌株及制备方法
  • 发明者
    李辰远, 李善熙, 全恩英
  • 公开日
    2013年5月1日
  • 申请日期
    2011年3月7日
  • 优先权日
    2010年4月22日
  • 申请人
    西江大学校产学协力团
  • 文档编号
    C12N15/52GK103080297SQ201180020363
  • 关键字
  • 权利要求
    1.一种脂肪酸过量表达用铜绿假单孢菌,其特征在于, 利用含有编码化脓性链球菌来源的酰基(酰基载体蛋白质)硫酯酶的核苷酸的表达载体进行转基因2.一种脂肪酸过量表达用铜绿假单孢菌,其特征在于, 利用含有编码铜绿假单孢菌的乙酰辅酶A羧酶羧基转移酶阿尔法亚基的核苷酸与编码化脓性链球菌的酰基(酰基载体蛋白质)硫酯酶的核苷酸的表达载体进行转基因3.一种脂肪酸过量表达用铜绿假单孢菌,其特征在于, 利用含有编码铜绿假单孢菌的丙二酰-辅酶A-[酰基载体蛋白质]转酰酶的核苷酸与编码化脓性链球菌的酰基(酰基载体蛋白质)硫酯酶的核苷酸的表达载体进行转基因4.一种脂肪酸过量表达用铜绿假单孢菌,其特征在于, 利用含有编码铜绿假单孢菌的乙酰辅酶A羧酶羧基转移酶阿尔法亚基的核苷酸及编码丙二酰-辅酶A-[酰基载体蛋白质]转酰酶的核苷酸,含有编码化脓性链球菌的酰基(酰基载体蛋白质)硫酯酶的核苷酸的表达载体进行转基因5.根据权利要求1到4的任意一项所述的脂肪酸过量表达用铜绿假单孢菌,其特征在于, 上述表达载体是具有图2所记载的基因地图的大肠杆菌-绿脓杆菌穿梭载体PUCP196.根据权利要求1到4的任意一项所述的脂肪酸过量表达用铜绿假单孢菌,其特征在于,编码上述酰基-酰基载体蛋白质硫酯酶的核苷酸具有记载为序列编号6的盐基顺序7.根据权利要求2或4所述的脂肪酸过量表达用铜绿假单孢菌,其特征在于, 上述编码乙酰辅酶A羧酶羧基转移酶阿尔法亚基的核苷酸具有记载为序列编号2的盐基顺序8.根据权利要求3或4所述的脂肪酸过量表达用铜绿假单孢菌,其特征在于, 上述编码丙二酰-辅酶A-[酰基载体蛋白质]转酰酶的核苷酸具有记载为序列编号4的盐基顺序9.根据权利要求1到4的任意一项所述的脂肪酸过量表达用铜绿假单孢菌,其特征在于, 上述铜绿假单孢菌是铜绿假单孢菌PA1410.一种脂肪酸过量表达用铜绿假单孢菌的制备方法,包括下列步骤 i)把编码化脓性链球菌的酰基(酰基载体蛋白质)硫酯酶的核苷酸插入表达载体的步骤;及 ii)利用上述步骤i)的表达载体让铜绿假单孢菌转基因的步骤.11.一种脂肪酸过量表达用铜绿假单孢菌的制备方法,包括下列步骤 i)把编码乙酰辅酶A羧酶羧基转移酶阿尔法亚基的核苷酸或编码丙二酰-辅酶A-[酰基载体蛋白质]转酰酶的核苷酸中的一个或两个全部、及编码化脓性链球菌的酰基(酰基载体蛋白质)硫酯酶的核苷酸插入表达载体的步骤;及 ii)利用上述步骤i)的表达载体让铜绿假单孢菌转基因的步骤12.一种脂肪酸生产方法,包括下列步骤 i)培养权利要求1到4的任意一项的铜绿假单孢菌后生物合成脂肪酸的步骤;及ii)获取上述步骤i)中生物合成的脂肪酸的步骤
  • 技术领域
    本发明涉及一种转基因的重组铜绿假单孢菌(Pseudomonas aeruginosa)及其制备方法,尤其是一种以有关脂肪酸生物合成的基因转基因的脂肪酸过量表达用铜绿假单孢菌及其制备方法
  • 背景技术
  • 专利详情
  • 全文pdf
  • 权力要求
  • 说明书
  • 法律状态
专利名称:用于改善脂肪酸含量而开发的铜绿假单孢菌菌株及制备方法使用化石燃料时大量排放地球暖化气体及废弃物,从而为人类带来了严重的环境危机。因此迫切需要开发能够替代基于化石燃料的化学工业,亦即以尽量减少有害于人类的废弃物的生产及能源消耗的生物物质作为原料的新环保生物工艺。生物乙醇、生物柴油、生物气(biogas)、丁醇作为生物能(Bio energy)而受到人们重视,上述的生物能虽然都能作为发电或运输用燃料使用,但因为它们在实际应用与生产方法上的若干缺点而使得作为新再生能源的烃(hydrocarbon)形态的化合物日益受到关注。因此,能够以代谢产物的方式生成长链脂肪酸(long chain fatty acid)的重组菌株也日益受到人们关注。铜绿假单抱菌(Pseudomonas aeruginosa)是绿胺杆菌,1882年由Gessard在绿色的脓汁发现,由于形成绿色而被称为绿脓杆菌。绿脓杆菌广泛存在于自然界,可以从脓、咳痰、粪便、尿、胆汁、子宫分泌物、血、脊髓液等分离。铜绿假单孢菌绿脓杆菌的形态为革兰阴性杆菌,培养时形成类似于荚膜的细胞外多糖粘质层。形成类似于荚膜的细胞外多糖粘质层。它是一种对自然界具有强大适应能力的微生物。该菌生长所需营养条件非常单纯。化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)能够引起肺炎、咽喉炎、急性肾炎、毒性休克症候群之类的疾病。脂肪酸(fatty acid)是具有I个羧基(-C00H)的烃链的羧酸,表示链状I价羧酸(Carboxylic acid)。由于水解脂肪时生成而使用该名称。脂肪酸分子由烃链(hydrocarbonchain)构成,烃在碳的基本架 构上以侧链链接氢并且在一端附着羧基。在生体内部,脂肪酸可由脂肪酸循环(fatty acid cycle)分解或合成。该循环以2个碳为单位合成或分解脂肪酸,因此存在于自然界的脂肪酸几乎大部分以双数碳数形成。本发明涉及一种为了改善脂肪酸含量而开发的铜绿假单孢菌菌株及制备方法,更具体地,本发明涉及一种利用含有编码铜绿假单孢菌(Pseudomonas aeruginosa)的乙酰辅酶A羧酶羧基转移酶阿尔法亚基的核苷酸及/或编码丙二酰-辅酶A-[酰基载体蛋白质]转酰酶转酰酶的核苷酸,及/或编码化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)的酰基(酰基载体蛋白质)硫酯酶的核苷酸的表达载体转基因的铜绿假单孢菌及其制备方法。本发明转基因的铜绿假单孢菌具有较高的遗传稳定性而且脂质或脂肪酸含量非常高,因此适用于脂肪酸的批量生产。
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