专利名称：一种甘草北虫草的培养方法北冬虫夏草([Cordyceps militarise (L. ) Link])是虫寄生嗜低温真菌,是一种天然滋补品和药食同源的中药材，含有虫草多糖、虫草素、核苷类物质、麦角留醇、虫草酸、蛋白质、氨基酸、维生素、S0D、多种微量元素及类胡萝卜素等活性成分，具有补肺益肾、止血化痰的功效，用于久咳虚喘、劳嗽咳血、阳痿遗精、腰膝酸痛。味甘性温、药性平和、温而不燥、补而不滞，是唯一的一种能同时平衡、调节阴阳的中药，比其他种类的补益中药更具广泛的药用价值，且无任何不良反应。甘草能补脾益气，滋咳润肺，缓急解毒，调和诸药。甘草、北虫草常在治疗慢性支气管炎、眩晕症、低血压、鼻炎、感冒、久咳不愈及贫血等药方中配伍应用。中医临床上常将北虫草与各种补益中药配伍使用以达到协同增效的目的，但患者在配伍使用中药时常常因为服用量大，服用不便为由中断使用药物。因此简化中医配伍用药，提高北虫草的利用率是必须解决的问题。
本发明提供了一种甘草北虫草的培养方法；目的是为了简化中医配伍用药，提高北虫草的利用率，增强北虫草的疗效，减少用药量。甘草北虫草的培养方法，按以下步骤进行一、将北虫草菌株玉丰二号接种到PDA固体培养基上，在28°C生化培养箱中暗培养5d，得到活化的菌种；二、将活化好的菌种切成IcmX Icm的菌块接种到300ml的液体种子培养基中，静止培养24h后置于温度为23°C、120r/min的条件下暗培养6d，得到菌悬液，然后加入200ml无菌水，得液体菌种；三、取5ml液体菌种接种到装有甘草固体培养基的培养瓶中，置于温度为22°C、湿度为55% 60%的条件下暗培养10 14d，得菌丝体，然后移至光下并在温度为23°C、湿度为55% 60%、光照强度为180 2201x、每天光照10 12h、昼夜温差为10°C的条件下培养至菌丝体全部由白色转为黄色后，增加湿度到85% 95%，继续培养至子实体长到2cm高，将培养瓶上的通气开关打开，继续培养至子实体生长到4 8cm高、子实体表面出现黄色粉末状物质且顶端出现小刺，进行采收，即完成甘草北虫草的培养；其中步骤三中甘草固体培养基由40g的大米、O. I O. 6g的甘草粉末和60ml的营养液组成，培养瓶的瓶装量为1/4 1/3 ;所述甘草粉末的制备将甘草粉碎后过20目筛；所述营养液每L由20g的蛋白胨、20g的葡萄糖、Ig的ΚΗ2Ρ04、0· 5g的MgSO4 · 7Η20、0· 5g的硫酸锌、200g的土豆液、5mg的维生素B1和余量的水组成；所述土豆液的制备200g去皮马铃薯，切块煮沸30min，纱布过滤后补足至1000ml，pH自然，121°C高压灭菌30min。本发明在北虫草的培养基中添加甘草，并对比例进行优选，对北虫草生长有明显的促进作用。然后，用HPLC法测定北虫草中的活性成分，能较好的提高其质量；同时用HPLC法测定北虫草中是否转入甘草的活性成分，培育出富含甘草活性成分的北虫草，达到增强北虫草药用功能的目的，减少用药量。本发明甘草北虫草的培养方法，根据中医配伍理论，在北虫草的培养基中添加甘草，在北虫草的生长过程中转入甘草的活性成分，以减少服用量，增强北虫草的药用价值。本发明培养的甘草北虫草，能大幅度提高北虫草子实体虫草素和腺苷含量，虫草素可达4. 6732±0. 0204mg/g,腺苷可达I. 2326±0. 0013mg/g，商品价值很高；并且本发明培养的甘草北虫草中甘草苷的含量达O. 1703±0. 0085mg/g,从而起到将甘草有效成分转移至北虫草子实体中的目的，提高北虫草的利用率，增强北虫草的疗效，简化了中医学中北虫草与甘草配伍的方法，并提高了北虫草的营养和药用价值；另外，实施条件容易达到，能在全行业推广。图I为一中对照品的HPLC色谱图，其中曲线I表示甘草苷；图2为
一中甘草培养基培养的北冬虫夏草子实体的HPLC色谱图，其中曲线I表示甘草苷；图3为
一中加入对照品后北冬虫夏草子实体的HPLC色谱图，其中曲线I表示甘草苷；图4为
一中空白对照组北冬虫夏草子实体的HPLC色谱图。

一本实施方式甘草北虫草的培养方法，按以下步骤进行一、将北虫草菌株玉丰二号接种到PDA固体培养基上，在28°C生化培养箱中暗培养5d，得到活化的菌种；二、将活化好的菌种切成IcmX Icm的菌块接种到300ml的液体种子培养基中，静止培养24h后置于温度为23°C、120r/min的条件下暗培养6d，得到菌悬液，然后加入200ml无菌水，得液体菌种；三、取5ml液体菌种接种到装有甘草固体培养基的培养瓶中，置于温度为22°C、湿度为55% 60%的条件下暗培养10 14d，得菌丝体，然后移至光下并在温度为23°C、湿度为55% 60%、光照强度为180 2201x、每天光照10 12h、昼夜温差为10°C的条件下培养至菌丝体全部由白色转为黄色后，增加湿度到85% 95%，继续培养至子实体长到2cm高，将培养瓶上的通气开关打开，继续培养至子实体生长到4 8cm高、子实体表面出现黄色粉末状物质且顶端出现小刺，进行采收，即完成甘草北虫草的培养；其中步骤三中甘草固体培养基由40g的大米、O. I O. 6g的甘草粉末和60ml的营养液组成，培养瓶的瓶装量为1/4 1/3 ;所述甘草粉末的制备将甘草粉碎后过20目筛；所述营养液每L由20g的蛋白胨、20g的葡萄糖、Ig的ΚΗ2Ρ04、0· 5g的MgSO4 · 7Η20、0· 5g的硫酸锌、200g的土豆液、5mg的维生素B1和余量的水组成；所述土豆液的制备200g去皮马铃薯，切块煮沸30min，纱布过滤后补足至1000ml，pH自然，121°C高压灭菌30min。本实施方式的步骤一是在超净工作台中无菌操作。本实施方式步骤一中北虫草菌株玉丰二号，购买自哈尔滨玉丰菌业有限责任公司。本实施方式步骤二中每300ml液体种子培养基中接种I个菌块。、
本实施方式步骤三中暗培养10 14d的过程中，菌丝体长满整个培养基的表面并吃透培养基；且接种后前I周不通风，以后每天通风换气I 2次。本实施方式步骤三中移至光下的培养过程中，如子实体向一边倒，则调整光源方向，或每间隔3天转换培养基方向，以便采光均匀，保证子实体生长到4 8cm高。本实施方式步骤三中采收后，将北虫草置于45°C下烘干至恒重。采收的过程去掉培养瓶的盖，用无菌镊子将子座连同培养基一同取出，再从子座根部剪断，整理平直，备用。I、甘草对北虫草子实体干重的影响将从甘草固体培养基和空白培养基培养上采收的北冬虫夏草子实体整理干净，用滤纸吸干表面水分，于45°C条件烘干至恒重，冷却，分析天平称重得干重，并确定促进子实体生长的最适浓度，结果见表I。表I甘草固体培养基中子实体干重


一种甘草北虫草的培养方法，它涉及一种北虫草的培养方法。它简化中医配伍用药，提高北虫草的利用率，增强北虫草的疗效，减少用药量。方法一、活化菌种；二、制备液体菌种；三、液体菌种接种到甘草固体培养基中暗培养，得菌丝体，然后然后移至光下培养至子实体长到2cm高，通气后继续培养至子实体生长到4～8cm高、子实体表面出现黄色粉末状物质且顶端出现小刺，进行采收即完成。本发明将甘草有效成分转移至北虫草子实体中的目的，提高北虫草的利用率，增强北虫草的疗效，简化了中医学中北虫草与甘草配伍的方法，并提高了北虫草的营养和药用价值；另外，实施条件容易达到，能在全行业推广。