一种用于胃肠道外给药的药物制剂制作方法

柯瓦连科, 阿列克谢, 列奥呢多维奇, 阿列可谢也哇, 刘得谜拉, 叶夫根尼也夫哪

2003年11月5日

2002年4月22日

2002年4月22日

“保利先”科技制药有限公司

A61P37/00GK1452969SQ0212219

药物制剂 胃肠道 用于

1.一种包含活性组分1-去氧-1-N-[甲基-(2-吖啶-9-酮-10-基-乙酸)]铵-D-葡萄糖醇和注射用水溶剂的用于胃肠道外给药的药物制剂，其特征在于所述的制剂中还包含有稳定剂N-甲基葡糖胺，所述各组分的比例(％，w/w)如下1-去氧-1-N-[甲基-(2-吖啶-9-酮-10-基-乙酸)]铵-D-葡萄糖醇 8.5～25.0；N-甲基葡糖胺 0.05～1.00；和注射用水 加100

本发明涉及药物和兽医用药物，即具有广泛生物学活性的胃肠道外给药的药物制剂例如，在1992年3月17日的RU专利号为2031650(A61K31/33)中所公开的标题为“一种抗病毒药物及其制备方法”的用于胃肠道外给药的药物制剂含有溶解在Tris缓冲液中的活性组分N-吖啶乙酸钠和稳定剂Trylon B(乙二铵四乙酸二钠)已知的药物制剂“Neovir”(M.D.Mashkovskiy，Therapeutic Drug，13thed.，Kharkov，Torsing，1997，Vol.2，p.352)含有浓度为12.5％w/w的活性成分N-吖啶乙酸钠和稳定剂枸橼酸已有技术中含有N-吖啶乙酸钠的药物制剂具有干扰素诱导活性然而，由于具有高pH值，它们在用药时引起局部刺激和疼痛，而且它们对光敏感，以单位剂型进行生产和贮存是不稳定的也已知一种用于胃肠道外给药的药物，为含有浓度为22.5％的1-去氧-1-N-[甲基-(2-吖啶-9-酮-10-基-乙酸)]铵-D-葡萄糖醇水溶液，具有广泛的生物学活性(Cycloferon Injection，12.5％Results of and Prospects for its ClinicalUse”，Apollon，St Petersburg，1999)以含有上述组合物的药物制剂作为原型制剂然而，在某些情况下，特别是在系统性慢性疾病的治疗过程中，所述制剂的生物学活性是不够的而且所述制剂不稳定尤其在生产过程的安瓿的分装、密封和加热灭菌阶段及在照明条件下贮存过程中，其活性组分分解形成沉淀，这使得单位剂型失效为实现上述目的，本发明采取以下技术方案 一种用于胃肠道外给药的药物，含有活性组分1-去氧-1-N-[甲基-(2-吖啶-9-酮-10-基-乙酸)]铵-D-葡萄糖醇；溶剂注射用水和本发明稳定剂N-甲基葡糖胺，所述各组分的比例为(％，w/w)1-去氧-1-N-[甲基-(2-吖啶-9-酮-10-基-乙酸)]铵-D-葡萄糖醇 8.5～25.0；N-甲基葡糖胺 0.05～1.00；和注射用水 加至100本发明提供的用于胃肠道外给药的药物制剂包含活性组分1-去氧-1-N-[甲基-(2-吖啶-9-酮-10-基-乙酸)]铵-D-葡萄糖醇，该化合物具有免疫调节活性(EA专利号000382，1998年1月22日，C07H5/06)本发明的发明人首次指出了，游离的N-甲基葡糖胺会对所述药物制剂的生物学活性和理化特性产生影响本发明的优点是在吖啶酮乙酸盐，即1-去氧-1-N-[甲基-(2-吖啶-9-酮-10-基-乙酸)]铵-D-葡萄糖醇溶液中加入游离的N-甲基葡糖胺，可增加活性组分通过细胞膜渗透到细胞中的能力，并促进活性组分与细胞内结构的结合，从而增加了制剂的生物学活性吖啶酮乙酸盐溶液中加入游离的N-甲基葡糖胺也与溶液的自构相关，这使得溶液中形成大量的分子间复合物，增加了单位剂型的光稳定性和热稳定性通过实验测定出所述用于胃肠道外给药的药物制剂的最佳组分比例，该比例有利于增加其生物学活性以及在生产与贮存过程中的光稳定性和热稳定性欲配制100L药物制剂取70L注射用水和22.5kg 1-去氧-1-N-[甲基-(2-吖啶-9-酮-10-基-乙酸)]铵-D-葡萄糖醇，混合将所得混合物搅拌至所述组分完全溶解，然后加入0.5kg N-甲基葡糖胺使pH为7.6，再加入注射用水至100L配好的溶液经“Pall”型除菌滤器过滤，分装到无菌的1ml，2ml或5ml容器中终产物的收率为96.5％5ml容器含有2.5％(w/w)的1-去氧-1-N-[甲基-(2-吖啶-9-酮-10-基-乙酸)]铵-D-葡萄糖醇、0.5％(w/w)N-甲基葡糖胺和77.00％(w/w)水表1-表7为本发明胃肠道外给药的药物制剂的实验结果和临床研究结果表1和表2为在本发明药物制剂的生物学活性研究中得到的最佳药物组成的数据表3、表4和表5为本发明药物制剂的光稳定性和热稳定性实验研究结果表6和表7为本发明药物制剂治疗功效的检验结果实验1在确定本发明制剂所含组分的最佳比例前，测定各组分的容许含量测定活性组分1-去氧-1-N-[甲基-(2-吖啶-9-酮-10-基-乙酸)]铵-D-葡萄糖醇的治疗有效单位剂量的容许含量体重70kg的人，对应的治疗有效单位剂量为434mg～1279mg，相当于每支5ml注射剂中含量为8.5～25.0％(w/w)稳定剂(N-甲基葡糖胺)用于提供生理适宜pH(7.8～8.0)，其容许含量为0.05～1.00％(w/w)通过实验测定包含本发明制剂组分的最佳组分比例实验将70只体重为2.8～3.3kg的Chinchilla兔按每组5只分成14组，用来研究14个组分含量不同的本发明药物制剂的剂量组，其中1-去氧-1-N-[甲基-(2-吖啶-9-酮-10-基-乙酸)]铵-D-葡萄糖醇的含量范围是8.8(w/w)～43.2(w/w)，N-甲基葡糖胺的含量范围是0.05％(w/w)～1.00％(w/w)以经肌肉内给药5ml不产生局部刺激为准，确定活性组分含量的最佳界限(最大耐受剂量)结果见表1当制剂中活性组分的含量为8.5％(w/w)～25.0％(w/w)，N-甲基葡糖胺的含量为0.05％(w/w)～1.00％(w/w)时，本发明药物制剂为澄清黄色液体，经肌肉内给药，不引起局部刺激当活性组分的含量为30％(w/w)时，在给药部位观察到疼痛反应和皮肤红斑在不同含量的稳定剂存在下，当活性组分的含量增加到34.2％(w/w)时，所述制剂呈含有活性组分结晶的黄色糖浆，给药部位观察到长时间的疼痛反应和肿胀因此，用于实现本发明目的的非胃肠道外给药的药物制剂的最佳组分比例如下(％，/w)1-去氧-1-N-[甲基-(2-吖啶-9-酮-10-基-乙酸)]铵-D-葡萄糖醇 8.5～25.0；N-甲基葡糖胺 0.05～1.00；和注射用水 加至100表1 实验2和3对本发明制剂的生物利用度和生物学活性进行了研究实验2通过活性组分1-去氧-1-N-[甲基-(2-吖啶-9-酮-10-基-乙酸)]铵-D-葡萄糖醇渗透到细胞中的速度评价本发明药物制剂的生物利用度，所述细胞是人外周血淋巴细胞的B细胞亚群和T细胞亚群细胞通过填充合成纤维的无菌柱，B淋巴细胞被吸附，用浓度为1.0％乙二胺四乙酸二钠(EDTA)溶液将其洗脱下来，分离淋巴细胞亚群细胞分别与1∶1000稀释的原形制剂溶液和1∶1000稀释的本发明制剂溶液共同培养用荧光光显微镜，通过紫外光激发特征性荧光来测定活性组分通过细胞膜渗透到细胞中的速度淋巴细胞的显微研究表明，原型制剂活性组分的细胞渗透能力差，检测到的细胞荧光微弱，且细胞核无荧光用0.1％EDTA溶液洗涤细胞，荧光不复存在，提示活性组分与细胞结构呈弱结合检测与本发明制剂一起培养的淋巴细胞，观察到明亮的蓝-绿色荧光，细胞核发光最明显用1％EDTA溶液洗涤细胞两次，荧光不消失上述发现提示，N-甲基葡糖胺可增加活性组分的细胞渗透能力和随后与细胞核结合的能力，从而提高了本发明药物制剂的生物利用度实验3与原型制剂比较，通过反映细胞活性的总核糖核酸(RNA)生成动力学来评价本发明药物制剂的生物学活性培养标准I-397单核细胞作为试验系统细胞在含有RPMI1640和20％胎牛血清的培养基中生长，至细胞终浓度为2×107细胞/ml然后转移到96孔板培养，培养条件为37℃5％CO2，7天后改变培养基在不同含量的稳定剂存在下，细胞与原型制剂或本发明制剂一起培养，于2、4、6和8小时后取细胞等分试样，并从所述细胞中分离出总RNA(Chomczynski P.，Sachi N.，“One-step method for RNA isolation from cells andtissues”，Analytical Biochemistry，1987，162卷，2期，156-159页)用分光光度法测定培养溶液在260nm波长处的光密度，确定总RNA的量表2列出的研究结果表明，当将单核细胞与原型制剂一起培养时，总RNA含量增加，在8小时后达到最大值，该值为基线值的1.8倍将细胞与含量为0.05％(w/w)～3.0％(w/w)的稳定剂一起培养，测定的总RNA动力学如下当稳定剂含量为0.05％(w/w)～1.0％(w/w)时，总RNA含量急剧增加，8小时后达到最大值，该值为基线值的9.2～10.4倍当N-甲基葡糖胺的含量从1.0％(w/w)增至3.0％(w/w)时，总RNA含量变化不明显细胞在含量不同的N-甲基葡糖胺条件下培养12小时，总RNA含量变化不明显因此，总RNA动力学显示，本发明制剂的生物学活性比原型制剂的生物学活性强表2 实验4和5研究了本发明制剂的单位剂型的稳定性实验4将原型制剂与本发明制剂分别置于10ml石英池中，用具有与太阳光类似光谱特征的300Wt的水银灯照射6小时，比较二者的光稳定性通过观察颜色变化和沉淀形成，以及通过在225nm下由分光光度法测定离心除去沉淀后活性组分和分解产物的特征光密度最大值确定活性组分和分解产物的量，来评估本发明制剂的光稳定性接受照射2小时而不出现混浊也不损失活性组分的制剂是光稳定的该实验结果见表3 表3 原型制剂稳定1小时，其活性组分的浓度降低6.2％活性组分含量为8.5％(w/w)～25.0％(w/w)，稳定剂含量为0.05％(w/w)的本发明药物制剂稳定2小时当N-甲基葡糖胺含量为1.0％(w/w)时，本发明制剂稳定6小时，其活性组分含量不变测定积分参数、溶液的重量渗克分子浓度和相对粘度，评价N-甲基葡糖胺对本发明制剂理化性质的影响向终溶液中加入一种物质引起浓度增加，通常与其粘度和重量渗克分子浓度增加有关表4 表4列出的实验数据表明，当本发明制剂中的N-甲基葡糖胺浓度增加时，重量渗克分子浓度降低N-甲基葡糖胺含量为0.05％(w/w)时，重量渗克分子浓度降低18mmol/L，N-甲基葡糖胺含量为0.10％(w/w)时，重量渗克分子浓度降低300mmol/LN-甲基葡糖胺含量为0.05％(w/w)时，本发明制剂的相对粘度降低4.5％，N-甲基葡糖胺含量为1.0％(w/w)时，相对粘度降低6.9％因此，当N-甲基葡糖胺含量从0.05％(w/w)增加到1.0％(w/w)时，观察到本发明制剂的光稳定性增加，同时其重量渗克分子浓度和粘度降低，这种现象的解释是，溶液构成中形成了大量分子间复合物实验5本实验研究了N-甲基葡糖胺在工业灭菌条件下对本发明制剂热稳定性的影响和在随后的贮存过程中对本发明制剂稳定性的影响本发明用于胃肠道外给药的药物制剂的活性组分1-去氧-1-N-[甲基-(2-吖啶-9-酮-10-基-乙酸)]铵-D-葡萄糖醇是热不稳定的化合物用工业方法灭菌安瓿时，吖啶酮乙酸发生部分分解，导致形成污染物N-甲基吖啶酮在安瓿贮存、特别是在低温条件下贮存期间，水不溶性N-甲基吖啶酮结晶此种情况下使用该制剂产生疼痛性休克、浸润形成和结节性脉管炎等副作用，因此不宜用作胃肠道外给药为了评价热稳定性和贮存稳定性，使用两组5ml玻璃安瓿一组装有原型制剂溶液，另一组装有活性组分的含量为22.5％(w/w)，稳定剂含量为0.05％(w/w)～1.0％(w/w)的本发明制剂溶液将两组包含所述溶液的安瓿在高温灭菌器内采用开放式蒸汽灭菌(120℃，30min)灭菌后，通过HPLC方法用Millichrome-1色谱仪测定污染物N-甲基吖啶酮的含量然后，将安瓿在0℃和30℃下于暗处贮存4年该安瓿每个月在反射光下检查一次，测定N-甲基吖啶酮的出现时间以无沉淀出现的时间段为贮存期表5 表5列出的研究结果表明，对装有原型制剂的安瓿灭菌，造成活性组分热分解，并导致形成浓度为0.24％(w/w)的N-甲基吖啶酮装有本发明制剂的安瓿灭菌后，N-甲基吖啶酮的形成降低66.6％在0℃下贮存，原型制剂中N-甲基吖啶酮在第25个月出现沉淀，而本发明制剂，在第37个月出现沉淀在30℃下贮存，原型制剂中N-甲基吖啶酮在第29个月出现沉淀，而本发明制剂，在第38个月出现沉淀当N-甲基吖啶酮的含量从0.1％(w/w)增加到1.0％(w/w)时，本发明制剂的贮存期为48个月因此，上述研究表明，用N-甲基葡糖胺作稳定剂增加了制剂的热稳定性，延长了其贮存期经实验确定最佳组分比例的本发明非胃肠道用药物制剂，在生产和贮存期间是光稳定和热稳定的通过对患有慢性系统性疾病牛皮癣的患者进行治疗，评价本发明制剂的治疗功效41名患有恶化型牛皮癣的男性患者，年龄在18～58岁，疾病史为2～20年，将他们分成2组，即实验组和对照组进行治疗所有患者出现丘疹和斑块以及明显的浸润和脱屑牛皮癣病灶主要局限在躯干、四肢和头皮所述治疗包括在第1、2、4、6、8和10天各自肌肉内注射一次4ml模型制剂(20名患者，对照)或本发明制剂(21名患者)，其中本发明制剂包含与模型制剂相同浓度的(22.5％，w/w)活性组分1-去氧-1-N-[甲基-(2-吖啶-9-酮-10-基)]铵-D-葡萄糖醇和浓度为0.5％(w/w)的稳定剂由治疗第10天的临床参数，到下一次恶化为止的时间(平均缓解期)和免疫学参数(血清中细胞因子的含量)来评价治疗功效治疗结果显示于表6和表7中表6 在对照组(原型制剂)，牛皮癣病灶消退并且65％的患者不再发痒，50％的患者停止脱屑平均缓解周期为128天测定了12名对照组患者的免疫学参数，证实其临床状况有所改善对照组中，促炎细胞因子IL-1、TNF-α和粒细胞-巨噬细胞菌落刺激因子TGF-1β分别降低1.4、1.38和2.38倍抗炎性细胞因IL-10的水平增加1.29倍实验组中(本发明制剂)，新的皮肤损害中止并且100％的患者不再发痒，90.4％的患者牛皮癣损害消退平均缓解周期为187天，比对照组有所增加测定19名患者的免疫学参数，证实其临床状况有所改善细胞因子状态的分析(表7)显示，本发明制剂的治疗作用与促炎细胞因子IL-1、TNF-α和TGF-1β分别降低1.9、2.7和2.1倍有关抗炎性细胞因子IL-10的水平增加1.87倍因此，实验组治疗结果优于对照组应用本发明制剂可促进所述疾病临床迹象的明显改善并增加平均缓解周期，这表明对牛皮癣的治疗功效增加本发明非胃肠道用药物制剂的特征在于其单位剂型在生产和贮存过程中提高了生物学活性和稳定性表7 注意*与对照相比具有显著性差异(p＜0.05)