胰岛分离装置制造方法 [0002] 胰岛pancreaticislets(langerhans)是胰的内分泌部分，是许多大小不等和形 状不定的细胞团，散布在胰的各处，可控制碳水化合物的代谢；如胰岛素分泌不足则患糖尿 病。胰岛素是促进合成代谢、调节血糖稳定的主要激素。 [0003] 现有分离技术主要应用机械分离法，持续应用机械力量和消化液流动的冲击力来 冲击胰腺达到消化的目的。这种分离方法快速彻底，但是分离后的胰岛容易破碎，不适合哺 乳动物的胰岛分离，比如成年猪和人的胰岛分离。 实用新型内容 [0004] 基于此，有必要提供一种分离纯度高，成本低且操作简便的胰岛分离装置。 [0005] -种胰岛分离装置，包括前置箱、消化系统、收液箱及两个蠕动泵； [0006] 所述消化系统具有消化罐，所述消化罐的内部具有第一滤网层及第二滤网层，所 述消化罐具有双层空心壁，所述双层空心壁的外壁具有进水口和出水口，所述消化罐的底 部具有入口及出口； [0007] 所述前置箱、蠕动泵及消化罐的入口依次连通，所述消化罐的出口、蠕动泵及收液 箱依次连通； [0008] 所述第一滤网层的网孔尺寸为600-1000μπι，所述第二滤网层的网孔尺寸为 200-600μm〇
[0009] 在其中一个实施例中，所述消化罐的底部具有出口，所述出口连接有T-型连接管 的一个管口，所述Τ-型连接管的另两个管口分别连接有所述蠕动泵，且所述管口与所述蠕 动泵之间设有阀门。
[0010] 在其中一个实施例中，所述消化罐的罐底部呈漏斗状。
[0011] 在其中一个实施例中，所述漏斗状的罐底部中间设有所述出口。
[0012] 在其中一个实施例中，所述消化罐的顶部匹配有顶盖。
[0013] 在其中一个实施例中，所述顶盖的边缘具有突出边，所述突出边将所述双层空心 壁覆盖。
[0014] 在其中一个实施例中，所述双层空心壁的外壁具有两个进水口和两个出水口。
[0015] 在其中一个实施例中，所述两个进水口设于所述消化罐的一侧上端和下端，所述 两个出水口设于所述消化罐的相对一侧的上端和下端，使得所述两个进水口与两个出水口 处于消化罐主轴的两端。
[0016] 在其中一个实施例中，所述第一滤网层的网孔尺寸为750-850μm，所述第二滤网 层的网孔尺寸为350-450μm。
[0017] 在其中一个实施例中，所述双层空心壁之间的厚度为4_8cm。
[0018] 本实用新型涉及的胰岛分离装置，通过前置箱、消化系统、收液箱及两个蠕动泵的 相互配合使用，且通过具有第一滤网层及第二滤网层的消化罐，达到胰腺消化的目的；本实 用新型分离的胰岛纯度高，分离效果好，成本低，可以连续操作消化分离，直到消化完全，且 操作简便。
[0019] 本实用新型涉及的胰岛分离装置，所述消化罐的底部具有出口，所述出口连接有 T-型连接管的一个管口，所述τ-型连接管的另两个管口分别连接有所述蠕动泵，且所述管 口与所述蠕动泵之间设有阀门，通过T-型连接管的设计，可减少所述消化罐的开口，减少 缝隙，避免消化液及收集液的遗漏，且通过T-型连接管的设计，便于控制消化罐的液体进 入。
[0020] 本实用新型涉及的胰岛分离装置，所述消化罐的罐底部呈漏斗状，便于收集液的 集中和流出收集。
[0021] 本实用新型涉及的胰岛分离装置，所述漏斗状的罐底部中间设有所述出口，在中 间部位，即将所述出口设于漏斗的最低端，便于所有收集液的排出，不需要人工再去收集， 利用收集液的重力自动收集，节约时间和人力。
[0022] 本实用新型涉及的胰岛分离装置，所述消化罐的顶部匹配有顶盖，在消化罐倒置， 混合内部消化液与胰腺以加快消化过程的时候，避免消化液的溢出。
[0023] 本实用新型涉及的胰岛分离装置，所述顶盖的边缘具有突出边，所述突出边将所 述双层空心壁覆盖，在消化罐倒置，混合内部消化液与胰腺以加快消化过程的时候，避免所 述双层空心壁内的温水溢出。
[0024] 本实用新型涉及的胰岛分离装置，所述双层空心壁的外壁具有两个进水口和两个 出水口，增加进水量和出水量，便于保持水的温度恒定。
[0025] 本实用新型涉及的胰岛分离装置，所述两个进水口设于所述消化罐的一侧上端和 下端，所述两个出水口设于所述消化罐的相对一侧的上端和下端，使得所述两个进水口与 两个出水口处于消化罐主轴的两端，便于保持水的温度恒定。
[0026] 本实用新型涉及的胰岛分离装置，所述第一滤网层的网孔尺寸为750-850μm，所 述第二滤网层的网孔尺寸为350-450μm，使得较大的颗粒和物质被分离。
[0027] 本实用新型涉及的胰岛分离装置，所述双层空心壁之间的厚度为4-8cm，所述双 层空心壁之间有一定的厚度便于该壁内的水的温度的维持，也进一步的维持消化罐内的温 度。




[0028] 图1为本实用新型实施例1主视图；
[0029] 图2为本实用新型实施例1消化系统主视图；
[0030] 图3为本实用新型实施例1消化系统侧视视图。
[0031] 附图标记说明
[0032] 10、前置箱；20、消化系统；30、消化罐；32、进水口；34、出水口；36、出口；38、双层 空心壁；40、T-型连接管；50、蠕动泵；60、收液箱；70、硅胶管；72、夹子；80、第一滤网层； 82、第二滤网层。


[0033] 以下将结合实施例及附图对本实用新型做进一步的说明。
[0034] 实施例1
[0035] 本实施例提供了 一种胰岛分离装置。
[0036] 一种胰岛分离装置，参见图1-图3,包括前置箱10、消化系统20、收液箱60、Τ_型 连接管40及两个蠕动泵50 ;所述Τ-型连接管40具有三个管口，分别为第一管口、第二管 口及第三管口，呈Τ型，其规格为NalgeneBaxterCat#T5342-3,Τ-型连接管40的尺寸规格 如下：外径2. 5cm，内径2cm，三个臂长均为3cm;所述消化系统20具有消化罐30,所述消化 罐30呈圆筒状，其规格如下：消化罐30内径12cm，外径18cm，高度6cm;所述消化罐30的 内部具有第一滤网层80及第二滤网层82,所述第一滤网层80的网孔大小尺寸为800μm， 所述第二滤网层82的网孔大小尺寸为400μm。
[0037] 所述消化罐30具有双层空心壁38,所述双层空心壁38之间的间隔厚度为4_8cm， 所述双层空心壁38的内壁厚度为2cm，外壁厚度为3cm，所述双层空心壁38的外壁具有两 个进水口 32和两个出水口 34,两个进水口 32和两个出水口 34均连接有管道，所述两个进 水口 32和两个出水口 34处的管道的规格相同，如下所示：内径均为2cm，外径均有2. 5cm， 长度4cm;所述两个进水口 32设于所述消化罐30的一侧上端和下端，所述两个出水口 34设 于所述消化罐30的相对一侧的上端和下端，使得所述两个进水口 32与两个出水口 34处于 消化罐30直径的两端点处，所述两个进水口 32均连接于水泵；
[0038] 所述消化罐30的罐底部呈漏斗状，所述漏斗状的罐底部中间设有所述出口 36， 所述出口 36通过硅胶管70连接于所述T-型连接管40的第三管口，所述T-型连接管40 的第一管口、第二管口分别通过硅胶管70连接有所述蠕动泵50,所述硅胶管70的外径为 2. 5cm，内径为2cm，长度为60-80cm;且所述管口与所述蠕动泵50之间设有夹子72,或者可 设有阀门取代夹子72 ;所述前置箱10、蠕动泵50及T-型连接管40的第一管口依次连通， 所述T-型连接管40的第二管口、蠕动泵50及收液箱60依次连通；所述消化罐30的顶部 匹配有顶盖，所述顶盖的外径为12cm，厚度为2cm，所述顶盖的边缘具有突出边，所述突出 边的宽度为5cm，所述突出边将所述双层空心壁38覆盖。
[0039] 本实用新型的T-型连接管40可以换成Y-型连接管，其规格为3/16inNalgene BaxterCat#T5343~2 〇
[0040] 实施例2
[0041] 本实施例提供了一种胰岛分离方法。
[0042] 一、胰腺消化试剂
[0043] A.化学试剂
[0044] 1)HanksBalancedSaltSolution(HBSS即Hank平衡盐溶液缓冲液）Sigma公司
[0045] 2)胶原酶VSigma公司
[0046] 3)Dithizone(DTZ)染色剂（胰岛染色）（铅试剂，中文别名：二苯硫代偶氮羰酰 肼或者双硫腙）Sigma公司
[0047] 4)HEPESSigma公司
[0048] 5)CMRL1066细胞培养液Sigma公司
[0049] 6)UniversityofWisconsinSolution(UW液）施贵宝公司
[0050] 7)DNaselM酶Sigma公司
[0051] 8)Ficoll离心液Sigma公司
[0052] B.液体配置
[0053] 1)消化液配置
[0054] a.lOOOmlHBSS放入烧瓶里；
[0055] b.水浴箱里将HBSS调整温度至28_32°C;
[0056] c.加入 100_200mgDNaseI酶；
[0057] d.加入1500mg的胶原酶V，充分搅拌；
[0058] e.用0. 2μm的滤网过滤消化液，即得胶原酶消化液,备用。
[0059] 2)离心液配置
[0060] a.称取Ficoll;
[0061] b.用HBSS溶解Ficoll;
[0062] (：.配置1.1，1.09，1.06的？丨(3〇11梯度离心液备用，其中1.06、1.09及1.10的梯 度离心液是用蔗糖和HANKS液配制的密度分别为1. 06mg/ml、l. 09mg/ml及1. 10mg/ml的液 体。
[0063] 二、胰腺准备
[0064] A.器械及设备
[0065] 1.组织剪
[0066] 2.血管钳
[0067] 3. 18G静脉导管
[0068] 4.丝线
[0069]5.冷却托盘
[0070] 6.冰盒
[0071] 7.离心管
[0072] 8.光学显微镜
[0073] 9.加样吸管
[0074] 10.冰盒
[0075] B.胰腺插管和灌注
[0076] 1)用组织剪、血管钳去除胰腺周围脂肪
[0077] a.胰腺用HBSS冲净后放入冷却托盘；
[0078] b.用组织剪、血管钳将胰腺周围脂肪组织剪去。
[0079] 2)胰管插管
[0080] a.找出胰管
[0081] b.插入18G的导管
[0082] c. 3. 0丝线固定导管
[0083] 3)称量膜腺重量
[0084] 灌注胰腺
[0085] a.每克胰腺灌注消化液1. 5-2ml
[0086] b.如有漏渗，夹闭。
[0087] 三、胰腺消化
[0088] A.消化
[0089] 1.胰腺的前处理：选取具有双层空心壁38消化罐30,且所述消化灌的底部具有两 层滤网，修整胰腺，往胰腺的胰管内灌注消化液后放入所述消化灌中，旋紧顶盖，所述消化 液为胶原酶消化液，以下步骤所用消化液均为胶原酶消化液；
[0090] 2.加消化液：通过连接于T-型连接管40的第一管口的蠕动泵50,将前置箱10内 的消化液泵入至步骤（1)的消化灌中，并密封所述消化灌，所述消化液的加入量为覆盖所 述胰腺；
[0091] 3.注水：从消化灌的进水口 32注入热水，使得整个消化罐30的夹层里充满热水， 温度通过进热水的温度和速度将消化罐30内的温度调整至37°C，并控制在37±0. 5°C;
[0092] 4.消化5分钟后开始晃动消化罐30,每分钟3-5次/分，消化过程中，可以将消化 罐30倒转过来，即将漏斗状的罐底部朝上，消化罐30顶部在下；
[0093] 5.记录消化时间，连续消化10-30分钟；
[0094] 6.收集或观察胰岛时，将消化罐30置于正常状态即漏斗状的底部朝下，消化液体 经过第一滤网层（网孔大小为800μπι)和第二滤网层（网孔大小为400μπι)流出，可以收 集或观察胰岛；
[0095] Β.检样
[0096] 1.观察胰岛
[0097] Α.取消化罐30内的消化液少许；
[0098] b.加入DTZ染色液（约50μL);
[0099] c.光学显微镜下观察胰岛，当游离胰岛> 60 %时，停止消化，若未达到60%，则继 续消化。
[0100] 2.胰岛定量
[0101] a.收集2ml消化液；
[0102] b.提取50μ1消化液并加入DTZ染色液；
[0103] c.光学显微镜下观察胰岛并计数；
[0104] d.计算光学显微镜下所观察的胰岛直径并折算成IEQ。
[0105] IEQ:Isletequivalents,胰岛当量，根据胰岛的直径大小计算胰岛当量
[0106] IEQ计算方法：
[0107]