一种可搭式精子上泳分离装置制造方法[0002]上泳法和密度梯度法是优化分离哺乳动物活动精子最常用的方法。传统的上泳法是将待分离的精液置于试管最底层，在精液上层覆盖一层分离培养液，然后将其置于37°C环境孵育一段时间后，活力好的精子借助尾部鞭毛动力泳动到精液上层的培养液中，吸取上层培养液，离心后收集管底精子沉淀团即为优化后的高活力精子。传统上泳分离的缺点在于:(1)制备分离层对操作要求较高，很容易将精液一培养液分离层搅乱，从而影响最终的分离效果，操作者之间由于技术熟练程度不同，可导致同一份精液标本最终的分离效果呈现明显差异；(2)精液一培养液分离层不明显，吸取、收集培养液时容易破坏该分离层导致收集到下层精液而不是上层培养液；(3)精子泳动至上层培养液中后，精子的浓度较小，需要以离心的方式进行洗涤浓缩，而离心的过程不仅费时，更严重的是离心过程可导致精子受到活性氧类物质(ROS)攻击、双链DNA断裂以及鞭毛结构被机械损伤而影响精子的运动能力。实用新型内容[0003]本实用新型要解决的技术问题是提供一种便于添加和收集培养液且无需浓缩的可搭式精子上泳分离装置。[0004]为了解决上述技术问题，本实用新型提供了一种可搭式精子上泳分离装置，包括上下两端贯通的圆筒形的主件、底盖和设于所述主件内的分离层；[0005]所述主件上端内壁设有内螺纹、下端外壁直径略小且设有与该内螺纹适配的外螺纹，所述底盖设有内螺纹并与所述主件下端的外螺纹螺纹连接；[0006]所述分离层上下两端贯通，底部边缘与主件内壁密封地连成一体。[0007]作为优选方式，所述分离层从下至上逐渐收窄。
[0008]作为优选方式，所述分离层由圆台状、棱台状、圆柱状或多棱柱状且上下两端贯通的分离通道以及密封环构成，所述分离通道底部边缘通过密封环与主件内壁密封地连成一体。
[0009]作为优选方式，多个所述主件通过下端的外螺纹与另一个主件的上端的内螺纹依次螺纹连接，所述底盖与最下层的主件的下端的外螺纹螺纹连接。
[0010]本实用新型包括设于主体内的分离层，该分离层上下两端贯通，底部边缘与主体内壁密封地连成一体，分离层与其上方的主体内壁构成用于盛装培养液的上腔，分离层与其下方的主体内壁和底盖构成盛装待分离精液的下腔，与现有技术相比，其优点在于:
[0011]1、由于主体内设置了分离层，在盛装精液的下腔和盛装培养液的上腔之间形成精液与培养液的分离层，使精液一培养液分离层的建立非常容易，操作简单方便，对操作人员的技术要求大大降低，避免现有技术中因人员不同导致的操作差异。[0012]2、分离层的开口是精液与培养液的接触部位，培养液液面覆盖该开口后，活动精子可实现从精液层到培养液层的穿越的同时，保证了精液一培养液分离层的稳定性，避免因微小的晃动而搅乱分离层。
[0013]3、通过选择不同体积的分离层，从而选择不同容积的上腔，有利于控制培养液的回收体积，实现不通过离心处理就浓缩精子数量的目的，避免因精子浓度过小而进行离心处理而对精子的损伤。
[0014]4、由于单个主件的下端外壁直径略小且设有外螺纹，该外螺纹与主件上端的内螺纹适配，保证一个主件可通过下端的外螺纹与另一个主件的上端的内螺纹连接，从而实现多个主件依次头尾螺纹连接。从最下层主件的上腔起，一直到最上层主件的上腔全部覆盖培养液后，精子从最下层的精下腔泳动到培养液中后，活力更优秀的精子将继续向上泳动，从而穿透上层的分离层开口进入上层主件的上腔，精子在培养液中孵育一段时间后，从上层到下层，主件上腔内精子的运动能力依次降低，从而实现对精子运动能的分级，通过收集不同层次主件上腔内的精子一培养液获得不同活力级别的分离精子。



[0015]下面结合附图和
[0016]图1为单个可搭式精子上泳分离装置的立体结构示意图。
[0017]图2为单个可搭式精子上泳分离装置的主视图。
[0018]图3为单个可搭式精子上泳分离装置的俯视图。
[0019]图4为多个可搭式精子上泳分离装置的安装示意图。
[0020]图5为单个可搭式精子上泳分离装置的使用示意图。
[0021]图6为多个可搭式精子上泳分离装置的使用示意图。
【具体实施方式】
[0022]下面通过实施例，并结合附图，对本实用新型的技术方案作进一步的说明。
[0023]实施例1
[0024]如图1、图2、图3所示为单个可搭式精子上泳分离装置的立体结构示意图、主视图和俯视图，该装置包括上下两端贯通的圆筒形的主件100、底盖50和设于所述主件100内的分离层20。所述主件100上端内壁11设有内螺纹13、下端外壁12直径略小且设有与该内螺纹13适配的外螺纹14，所述底盖50设有内螺纹51并与所述主件100下端的外螺纹14螺纹连接。所述分离层20大致位于所述主件100中层，所述分离层20上下两端贯通，底部边缘与主件100内壁密封地连成一体。在本实施例中，所述分离层20从下至上逐渐收窄，由上下两端贯通的分离通道21和密封环22构成，所述分离通道21为圆台状，密封环22为圆环状，分离通道21底部边缘通过密封环22与主件100内壁密封地连成一体。
[0025]所述底盖50、分离层20以及底盖50至分离层20之间的主件100内壁构成用于盛装待分离的精液标本的下腔30，分离层20及其上方的主件100内壁构成上腔10，所述上腔10用于盛装分离精子标本所用的培养液。本实用新型可搭式精子上泳分离装置的使用方法如图5所示，其使用方法如下:(I)将液化后的精液用巴氏吸管加入并充满装置的下腔30，精液加入至与分离层20顶部的开口 23齐平(不要超出或低于此开口 23，若精液量太少，可预先在精液中加入分离培养液稀释精液)；(2)在分离层20的密封环22上加入分离培养液(例如:HTF、F10、Bffff等)，培养液液面完全覆盖精液层，即完全浸没开口 23 ; (3)将上述装置置于37°C孵育一段时间(例如:60分钟)，等待活动精子泳动穿越分离层20的开口 23进入到上腔10的培养液中；(4)在密封环22上用巴氏吸管收集所有培养液，该培养液中即为含有闻活动能力的分尚后的精子。
[0026]所述分离通道21的形状不拘于圆台状，亦可为棱台状、圆柱状以及多棱柱状。若分离通道21底部形状与主体100内壁适配且其开口 23收缩，分离通道21底部边缘可直接与主体100内壁连成一体而无需设置密封环22。所述主体100与底盖50的连接方式不拘于螺纹连接，也可通过卡嵌式连接，因此主体100的形状不拘于圆筒形，也可为多棱柱形或其他形状的柱体。
[0027]实施例2
[0028]与实施例1不同，本实施例由多个主件100以及一个底盖50构成。由于单个主件100的下端外壁12直径略小且设有外螺纹14，该外螺纹14与主件100上端的内螺纹13适配,保证一个主件100可通过下端的外螺纹14与另一个主件100的上端的内螺纹13连接，从而实现多个主件100依次头尾螺纹连接。如图4所示，3个主件100依次头尾螺纹连接，最下层的主件100通过下端外壁12的外螺纹14与底盖50的内螺纹51螺纹连接。如图6所示，本装置的使用方法如下:(1)将液化后的精液用巴氏吸管加入并充满最下层主件100的下腔30，精液加入至与分离层20顶部的开口 23齐平(不要超出或低于此开口 23，若精液量太少，可预先在精液中加入分离培养液稀释精液)；(2)在最下层主件100的密封环22上加入分离培养液(例如:HTF、F10, Bffff等)，培养液液面完全覆盖精液层，即完全浸没其开口23，并由此向上，继续向各个主体100内加置培养液，直至培养液液面完全浸没最上层主件100的开口 23为止；(3)将该装置置于37°C孵育一段时间(例如:60分钟)，等待活动精子泳动穿越分离层20上端开口 23进入到上层培养液中，精子在装置中泳动的高度与其活力相关，从装置下层至上层，分离精子的活动能力依次增高，但精子数量依次降低；(4)用巴氏吸管从上层到下层分段收集培养液，可获得不同运动力等级的精子，装置中顶层培养液中的精子活力最优。