一种治疗多囊肾病的药物制作方法

梅长林, 李林

2002年9月25日

2001年9月4日

2001年9月4日

梅长林, 李林, 顾书华

A61P13/12GK1370534SQ0112662

多囊肾 药物 治疗

1.一种治疗多囊肾病的药物，其特征在于该药物是由N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨作为活性成份与药用辅料组成的2.一种如权利要求1所述的治疗多囊肾病的药物，其特征在于该药物的剂型是医学上可接受的以各种途径给药的制剂，包括口服制剂、注射剂、透皮贴剂以及通过其他途径给药的制剂3.一种如权利要求1或2所述的治疗多囊肾病的药物，其特征在于该药物的制剂由重量百分比为0.001％～99.99％的活性成份N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨与99.999％～0.01％的药用辅料组成；固体制剂每片、粒或袋含活性成份为0.1～3000mg；口服液每10ml含活性成份为0.1～3000mg；注射剂每ml含活性成份为0.001～300mg4.一种如权利要求1所述的治疗多囊肾病的药物的制备方法，其特征在于该药物的制备方法是按处方量将N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨与药用辅料混合后，按常规方法制成各种制剂5.一种如权利要求1所述的含活性成分N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨的药物在制备治疗多囊肾病药物中的应用6.一种如权利要求5所述的含活性成分N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨的药物在制备治疗多囊肾病药物中的应用，其特征在于其中所述的多囊肾病包括常染色体显性遗传性多囊肾病ADPKD和常染色体隐性遗传性多囊肾病ARPKD7.一种如权利要求5或6所述的含活性成分N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨的药物在制备治疗多囊肾病药物中的应用，其特征在于该药物可通过口服形式给药，也包括通过其他途径给药，每次给药的剂量范围为0.001～5000mg/kg体重，每次给药间隔的时间为0.5小时～2年或连续给药，疗程根据患者的病情决定，一般伴随患者终生8.一种如权利要求5或6所述的含活性成分N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨的药物在制备治疗多囊肾病药物中的应用，其特征在于该药物也适用于治疗因多囊肾病累及的肾外多个脏器，如肝囊肿、心脏瓣膜异常、颅内动脉瘤等并发症9.一种如权利要求4或5所述的含活性成分N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨的药物在制备治疗多囊肾病药物中的应用，其特征在于所述的给药方式为通过口服形式给药，也包括其他医学上可接受的途径给药，如肌肉注射、皮下注射、静脉注射、腹腔注射、局部组织注射；透皮给药、程控释放；各种形式的缓释、控释给药

本发明涉及药物制剂技术领域，具体涉及一种治疗多囊肾病的药物近年来有些学者认为多囊肾病是一种类肿瘤的疾病其病理特征为肾小管或集合管上皮细胞异常增生，形成囊肿，囊内有液体分泌现已证实表皮生长因子/转化生长因子/表皮生长因子受体(EGF/TGF-α/EGFR)轴的异常与囊肿的形成与增大有关多囊肾病时EGFR轴出现质与量的异常量的异常表现在人类多囊肾囊肿上皮细胞具有合成、加工、分泌EGF类多肽的功能质的异常包括多囊肾中EGFR极性错误，出现在腔膜面，与囊壁上皮分泌的EGF和EGF类多肽直接结合；EGFR对配体亲和力明显增高，形成自分泌环，直接导致了囊肿上皮的高增生特性体外培养发现囊肿上皮细胞对EGF等的促分裂作用呈高敏感性目前已知EGFR介导的信号转导途径与多囊肾病囊肿上皮细胞高增殖密切相关因此阻断异常活跃的EGFR信号通路，即采用“信号转导治疗”(signal transduction therapy)方法就能治疗多囊肾病在EGFR介导的信号转导通路中酪氨酸蛋白激酶(PTK)是重要的信号分子，同时它还是与其它信号通路相关的交联点之一1998年Wissner等发明了一种新型的酪氨酸激酶抑制剂CL-387785，用于肿瘤的治疗CL387，785(化学名N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨)属于氨基喹唑啉类，是EGFR、erbB2特异性的酪氨酸蛋白激酶抑制剂它通过与酪氨酸蛋白激酶活性部位形成烷基化的共价键达到非竞争性抑制作用1999年Discafani等进行了CL387，785的药效学研究发现它能特异性抑制酪氨酸蛋白激酶活性(IC50＝370±120pmol/L)，阻断EGF刺激的受体自身磷酸化(IC50＝5nmol/L)，以细胞周期抑制方式抑制过表达EGFR或erbB2细胞的增殖活动(IC50＝31-125nmol/L)显著地阻断裸鼠过度表达EGFR的肿瘤生长作用时间长，药物在体内被清除后抑制作用仍存在(不可逆抑制)1999年Sweeney等报道在体外应用CL-387，785有效抑制了集合管的囊肿形成2000年Sweeney等又在ARPKD小鼠模型上应用CL-387，785，发现它能减轻肾脏集合管囊肿，延长小鼠寿命，是一种药效好、毒性小的具有开发前景的多囊肾病治疗药物本发明提供的治疗多囊肾病的药物是由N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨作为活性成份与药用辅料组成的医学上可接受的以各种途径给药的制剂本发明所述的医学上可接受的以各种途径给药的制剂是指口服制剂(如固体制剂、液体制剂、控释或缓释制剂等)、注射剂、透皮制剂以及可以通过其他途径给药的制剂本发明所要解决的另一技术问题是提供了上述治疗多囊肾病的药物的制备方法，该方法是按处方量将活性成份N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨与药用辅料混合，按常规方法制成各种剂型本发明的制剂可以由重量百分比为0.001％～99.99％的活性成份N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨与99.999％～0.01％的药用辅料组成，制成的口服固体制剂如片剂、胶囊剂、颗粒剂等制剂，每片、粒或袋含活性成份CL-387，785的范围为0.1～3000mg本发明制成的口服液体制剂如口服液每10ml含有效成份N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨的范围为0.1～3000mg本发明制成的注射剂每ml含有效成份N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨的范围为0.001～300mg本发明的再一目的是提供上述含活性成份N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨的药物在制备治疗多囊肾病药物中的应用用本发明的含N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨(CL387，785)活性成份的制剂进行了临床研究，发现治疗多囊肾病(包括常染色体显性遗传性多囊肾病和常染色体隐性遗传性多囊肾病)具有疗效显著、毒副作用小的优点本发明用N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨作为活性成份的药物通过口服形式给药，也包括通过其他途径给药，每次给药的剂量范围为0.001～5000mg/kg体重，每次给药间隔的时间为0.5小时～2年或连续给药，疗程根据患者的病情决定，一般伴随患者终生本发明所述的给药方式可以通过口服形式给药，也可以其他医学上可接受的途径给药，如肌肉注射、皮下注射、静脉注射、腹腔注射、局部组织注射；透皮给药、程控释放；各种形式的缓释、控释给药等本发明的含N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨(CL387，785)活性成份制剂也适用于治疗因多囊肾病(包括常染色体显性遗传性多囊肾病和常染色体隐性遗传性多囊肾病)累及的肾外多个脏器病变，如肝囊肿、心脏瓣膜异常、颅内动脉瘤等并发症CL387，785是一种灰黄色结晶体，在水及酒精中溶解度很小，一20℃、避光可保存3年以上CL387，785的分子式如下 CL387，785是一种低毒性的化合物，能安全地用于治疗ICR小鼠的半数致死量(LD50)为3.27g/Kg本发明将PTK作为信号转导治疗的靶点，通过药物抑制或阻断EGFR信号转导通路中的酪氨酸蛋白激酶的功能及作用，来阻断该异常活跃的信号通路，以达到治疗多囊肾病的目的CL-387，785治疗多囊肾病的依据包括(1)在体外实验中，EGF、TGF-α能诱导囊肿形成；(2)ARPKD、ADPKD及小鼠PKD模型中囊液里含有具分裂活性浓度的EGF类似多肽；(3)PKD的TGF-αmRNA水平增高；(4)过高表达TGF-α的转基因小鼠形成了肾脏囊肿；(5)在人类及小鼠模型中PKD都存在异常高表达及错位于上皮腔膜面的EGFR；(6)异常表达于腔膜面的EGFR能高亲和力地结合EGF，并引起一系列信号转导级联反应，最终导致高分裂活性；(7)后肾组织培养证实针对EGFR的CL-387，785能降低EGF诱导的囊肿进展CL-387，785针对以上病理机制，阻断异常上调的EGF/TGF-α/EGFR轴，阻断EGFR介导的异常信号转导通路来达到治疗PKD的目的CL-387，785具有以下特点(1)非竞争性、不可逆性抑制酶的活性；(2)选择性高；(3)活性强；(4)具有体内活性；(5)不可逆抑制；(6)毒副作用较小经药代动力学研究，口服CL-387，785药物后能经胃肠道迅速吸收，且有效血药浓度能维持较长时间一次性给予健康人口服100mg的CL387，785后2.5到4小时血药浓度达到峰值，24小时后志愿者体内的药物浓度仍保持在150～300g/ml因此CL387，785具有作为药物应用的条件一、CL387，785治疗多囊肾病小鼠的试验研究试验设计见表1表1试验动物分组正常小鼠多囊肾病小鼠对照组 治疗组对照组 治疗组数量 12 7 7 6药物剂量(mg/Kg/3d) 090 0 90蒸馏水(mg/Kg/3d) 15 15 15 15多囊肾病动物采用常染色体隐性遗传性多囊肾病的BPK模型，是由Balb/c小鼠的近交系突变而来未治的囊肿动物存活期21-29天，平均24天肾外表现包括胆道系统增生和胆管坏死(BDE)用已确认的BPK同窝杂合子小鼠(包括BPK囊肿动物BPK/BPK，杂合子BPK/+，野生型+/+)，分别在出生后第7天(P-7)开始每3天于腹腔内注射(IP)90mg/kg的CL-387，785动物从出生后第7天治疗至第22天(6个剂量组)，出生后24天取肾脏、肝脏、心脏、脾脏、胃及甲状腺每个剂量组最少取6只受累动物及12只未受累动物进行分析对照动物包括CL387，785治疗和未治疗(仅用酒精)的同窝仔在第48天给予动物禁水禁水8小时后，收集尿样和血样以测定肾功能和肾小管功能，并取肾脏和肝脏进行形态学分析为确定撤药的影响，停止4只存活的病变小鼠的CL387，785治疗，严密观察动物的情况，直至出现一些临死前的表现时杀死动物，取肝肾组织进行形态学分析肾小管囊肿形成的程度用囊肿指数定量囊肿指数由光学显微镜形态学方法确定并经标准化，用来定量体内、体外的囊肿形成程度、肾脏功能及最大尿浓缩的测定试验结果见表2表2 动物实验结果BUN Scr尿渗透压 囊肿指数胆管坏死(mg/ml) (mg/ml) (mOsm/L)对照(P24) 18±3 0.3±0.1 1254±6800囊肿组(P24) 183±28 0.7±0.2 298±87 5.2±0.5 3.5±0.7对照+Cl-387，785(P24) 16±2 0.3±0.1 1202±4500囊肿组+CL387，785(P24)18±3 0.3±0.1 1103±54 1.8±0.4 1.1±0.3对照+CL387，785(P48) 16±2 0.3±0.1 1189±6000囊肿组+CL387，785(P48)21±3 0.4±0.2 998±65 1.9±0.32.3±0.6上述动物试验结果说明应用90mg/kg的CL387，785治疗后BDE指数为1.8(表2)，比未治疗组的BDE指数3.5有显著降低(p＜0.02)表2的数据证实采用CL387，785治疗(90mg/kg)的囊肿动物肾功能与对照组保持相同或相近的水平而未治疗的BPK囊肿小鼠(N＝9)在死时BUN值比无病变的同窝仔(N＝16)高10倍(p＜0.01)最大尿液浓缩能力下降3倍(p＜0.01)从出生后第7天至24天接受CL387，785治疗的BPK囊肿小鼠(N＝10)血清肌酐、BUN水平显著低于未治BPK小鼠(p＜0.01)，最大尿液浓缩能力显著增加(p＜0.01)治疗维持至第46天的囊肿动物(N＝8)集合管囊肿指数有轻微升高，但血清肌酐、BUN水平与24天的未治疗动物(N＝9)及48天的治疗对照(N＝12)相比基本不变而48天的治疗病变动物的最大尿液浓缩能力(998±65mOsm/L)比24天的未治疗动物(298±87mOsm/L)明显升高(p＜0.01)48天的治疗病变动物的最大尿液浓缩能力与未治组(N＝10)和治疗对照组(N＝11)相比没有统计学显著差异二、CL387，785的临床试验本发明选用口服CL387，785片剂进行临床试验18名确诊ADPKD且肾功能正常的志愿者入选临床试验(入选标准明确家族遗传史及B超确诊为多囊肾病仅表现为双侧肾脏多发囊肿而肾功能正常者)给药方法为口服CL387，785片100mg/3d试验结果如下1.一般临床资料所有入选试验的志愿者都能耐受治疗受试者接受100mg/3dCL387，785口服治疗没有出现严重的胃肠道反应，如呕吐、腹泻等，也没有出现头昏、口干、发热等不良反应，只有2名志愿者有轻微的恶心没有检测到肝功能异常或肾功能恶化血常规检查正常2.肾囊肿变化共18名ADPKD接受口服CL387，785治疗其中11名患者(61.1％)经超声检查证实肾脏囊肿体积无显著增大，2名患者(11.1％)肾脏囊肿体积显著缩小，5名患者(27.8％)肾脏囊肿体积有轻度增加，总有效率72.2％表3 临床实验结果(口服片组)肾脏囊肿体积改变 患者数(治疗3月后)囊肿进展5(27.8％)囊肿无改变 11(61.1％)囊肿缩小2(11.1％)通过临床试验证实口服CL387，785能延缓或阻断肾囊肿的进展，减小肾囊肿体积，且没有明显毒性，是具有临床开发价值的多囊肾病的治疗药物多囊肾病是临床较常见的遗传性肾病，发病率高、危害性大，约50％患者最终进展至尿毒症，需依赖透析维持生命据保守估计，我国至少有100多万患者，但目前对于多囊肾病的治疗仅以支持、对症为主，没有治疗药物，也没有针对病因的有效治疗多囊肾病对于患者家庭、社会都是巨大的负担，本发明公开的治疗多囊肾病的药物可以有效地预防、控制和治疗多囊肾病的发生、发展，具有重大的经济效益和社会效益CL387，785(g) 50微晶纤维素(g) 150碳酸钙(g) 65磷酸氢钙(g)5PVP-k30(g) 8硬脂酸镁(g)14制备方法同实施例1实施例3 片剂的制备处方CL387，785(g) 50微晶纤维素(g) 150碳酸钙(g) 65PVP-k30(g) 5硬脂酸镁(g) 8制备方法同实施例1实施例4 片剂的制备处方CL387，785(g) 50微晶纤维素(g) 130磷酸氢钙(g) 87PVP-k30(g) 5硬脂酸镁(g) 8制备方法同实施例1实施例5 胶囊剂的制备处方CL387，785 250g碳酸钙 2100g淀粉2100g将碳酸钙与淀粉混合，过筛，再与适量乙醇分散的CL387，785粉末混合均匀，过120目筛，于60～70℃烘干2小时，装胶囊，制成1万粒，每粒胶囊含CL387，785为25mg实施例6 口服液的制备处方 CL387，785 10gD，L-苹果酸适量对羟基苯甲酸甲酯 0.3g对羟基苯甲酸丙酯 0.2g蔗糖 35g单硬脂酸蔗糖酯 5g食用桔子香精 适量蒸馏水 加至1000ml将处方量的蔗糖溶于适量蒸馏水中，使其溶解，将CL387，785、单硬脂酸蔗糖酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯配成10％的酒精溶液，加入上述配液中，边加边搅拌均匀，再加入D，L-苹果酸2.0％的蒸馏水溶液，调节pH值约为5，加入适量香精，加蒸馏水至1000ml，混匀，取样测定含量、pH值，合格后灌装灭菌即得每10ml含CL387，785为0.1g实施例7 口服液防腐剂不同用量的抑菌效果试验表4CL387，785口服液防腐剂不同用量的抑菌效果对羟基苯甲酸 对羟基苯甲酸霉菌 杂菌致病菌试品号甲酯用量(‰) 丙酯用量(‰) (个/ml) (个/ml) (个/ml)1 0.25 0.15 10 95 未检出2 0.30 0.20未检出 2 未检出3 0.75 0.35未检出 2 未检出结果表明，配比2防腐剂的量是比较合适的量实施例8 口服CL387，785治疗多囊肾病的临床试验患者，女性，38岁1998年经B超诊断为常染色体显性遗传性多囊肾病，有明确家族史，经检查肾功能正常予口服CL387，785片剂100mg/3d，治疗6个月后复查各项指标治疗过程中没有出现严重的胃肠道反应，如呕吐、腹泻等，也没有出现头昏、口干、发热等不良反应复查肝功能、肾功能正常，血常规检查正常，没有发现明显毒性超声检查证实肾脏囊肿体积显著缩小，最大肾囊肿由治疗前的5.4×3.2cm缩小到4.3×2.8cm，且囊肿数目没有增加