专利名称：：使用薯蓣皂素来改善与停经期症候群有关联的认知缺陷的制作方法：停经期(menopause)与女性体内循环的性激素(circulatingsexualhormones)的快速减少有关联，并且意指女性的卵巢功能(ovarianfunction)逐渐衰退，最终导致月经终止(cessationofmenstruation)的过渡期,而停经后期(postmenopause)则意指女性的卵巢功能在完全丧失之后的时期。停经期或停经后期的女性通常会出现停经期症候群(menopausalsyndrome)，而停经期症候群的症状主要可区分成下列3大类(1)生理症状(physiologicalsymptom),诸如热潮红(hotflushes)、阴道干燥(vaginaldryness)、疲劳(fatigue)、头痛(headaches)、体重增加(weightgain)、皮肤老化(skinaging)以及骨质疏松症(osteoporosis)；(2)心理症状(psychologicalsymptom),诸如焦虑(anxiety)以及忧郁(expression)；以及(3)认知缺陷(cognitivedeficit)，诸如精神错乱(mentalconfusion)、记忆能力(memoryability)下降、学习能力(learningability)下降、辨识能力(recognitionability)下降以及无法应对(inabilitytocope)。目前在停经期症候群的治疗上大多是使用激素替代疗法(hormonereplacementtreatment,HRT)，借由投药含有一或多种性激素的医药品给停经期或停经后期的女性来补充她们体内不足的性激素。然而，性激素的长期投药或过量使用可能会导致乳癌。相较于性激素，植物雌激素(phytoestrogens)[诸如异黄酮(isoflavone)]更为安全并且具有相似于人类雌激素(humanestrogen)的效用，因而是一供用于HRT的更佳选择。山药(dioscorea)是一种常见的食物，它因为富含植物类固醇(phytosteroids)而长期被使用做为中草药，用以改善胃肠(gastrointestinal)、感觉(sensory)以及与性有关的功能(sexual-relatedfunctions)，同时也可改善停经后期的女性(postmenopausalwomen)的热潮红以及频尿(frequenturination)。另夕卜，山药也被证实具有抗骨质疏松(anti-osteoporotic)、抗糖尿病(anti-diabetic)以及抗高胆固醇血症(anti-hypercholesterolemia)白勺舌t生。在Y.J.Hoetal.(2007)，AnnalsofGeneralPsychiatry,6:21-28中，Y.J.Ho等人主要是探讨山药对于卵巢切除(OVX)的大鼠[ovariectomized(OVX)rats]的情绪行为(emotionalbehavior)以及脑中的IL_2位准的影响。实验结果显示，借由山药治疗可以回复OVX-诱发的焦虑(OVX-inducedanxiety)以及在免疫神经功能(neuroimmunologicalfunction)上的变化。薯蓣皂素(diosgenin)是山药中主要的类固醇皂素(steroidalsapogenin)，它在化学结构上与性激素相似，因此已被广泛地使用做为类固醇激素(steroidalhormones)[诸如助孕酮(progesterone)、雌激素(estrogen)、罩固酮(testosterone)以及可体松(cortisone)]的前驱物(precursor)，它可以借由活体外化学修饰(invitrochemicalmodification)而被制造成类固醇激素。近年来，有关于利用薯蓣皂素来治疗停经期症候群开始受到关注。例如，在K.Higdonetal.(2001)，BiomedSciInstrum.,37:281-286中，K.Higdon等人在卵巢切除(OVX)的大鼠中诱发骨质疏松症，继而在骨质疏松症的临床征兆(clinicalsigns)出现之后以薯蓣皂素(diosgenin，DG)、去氢表雄脂酮(dehydro印iandrosterone，DHEA)或雌激素(estrogen，Ε)的持续递送(sustaineddelivery)来进行治疗。实验结果显示，在OVX之后的骨质流失(boneloss)可借由补充以持续位准(sustainedlevels)的DG、DHEA以及E而被显著地降低，并且不会危害其它的身体器官。在Y.Tadaetal.(2009)，Meroids，74:504-511中，Y.Tada等人研究薯蓣皂素在对抗停经期之时的皮肤老化(skinaging)上的安全性以及效力(efficacy)。实验结果显示薯蓣皂素的投药会回复在老化的皮肤中的角质细胞增生(keratinocyteproliferation)，因而可以改善在卵巢切除的小鼠(一种停经期的模型)中的表皮厚度(epidermalthickness),但是不会改变月旨肪累禾只的禾呈度(degreeoffataccumulation)。此外，薯蓣皂素也不会加速乳癌负担的小鼠(breastcancer-burdenedmice)的肿瘤生长。根据这些发现，薯蓣皂素被预期具有可用于缓解一与停经期症候群有关联的症状的潜力。经研究，申请人意外地发现薯蓣皂素具有改善与停经期症候群有关联的认知缺陷(诸如学习能力的下降)的效用。
于是，在第一个方面，本发明提供一种用于改善一具有心理症状的停经期或停经后期女性的学习能力的组合物，其包含有一有效量的薯蓣皂素。在第二个方面，本发明提供一种用于改善一具有心理症状的停经期或停经后期女性的学习能力的方法，其包括对该停经期或停经后期女性投予(administering)—有效量的薯蓣皂素。下面结合附图及实施例来对本发明进行详细说明，所以本发明在上述以及其它目的与特征，可借由参照下文的描述、随文检附的权利要求书和伴随的图式而变得更为明显，附图中图1是一高架十字迷宫的立体图。具体实施例方式如本文中所用的，术语“停经期(menopause)”意指处于卵巢功能(ovarianfunction)开始衰退与月经终止(cessationofmenstruation)之间的时期。术语“停经后期(postmenopause)”意指在女性的卵巢功能已完全丧失之后的时期。如本文中所用的，术语“停经期症候群(menopausalsyndrome)”意指发生于停经期或停经后期的女性个体中的症状，这包括，但不限于(1)生理症状(physiologicalsymptom),诸如热潮红(hotflushes)、阴道干燥(vaginaldryness)、疲劳(fatigue)、头痛(headaches)、体重增加(weightgain)、皮肤老化(skinaging)以及骨质疏松症(osteoporosis)；(2)心理症状(psychologicalsymptom)，诸如焦虑(anxiety)以及忧郁(expression)；以及(3)认知缺陷(cognitivedeficit)，诸如精神错乱(mentalconfusion)、记忆能力(memoryability)下降、学习能力(learningability)下降、辨识能力(recognitionability)下降以及无法应对(inabilitytocope)。如此处所用的，术语“有效量(effectiveamount)”意指当一种依据本发明的含有薯蓣皂素的组合物被投予一需要该组合物来治疗的个体时，一足以提供所欲达致的治疗功效且不会对非标的组织或器官产生非所欲的严重危害的用量。该有效量会视下列因素而变化要被治疗的疾病的严重性，投药途径，以及要被治疗的个体的体重、年龄、身体状况与反应。此一有效量可为熟习此技艺的人士来决定。如本文中所用的，“有效量”此术语可与“有效剂量(effectivedose)”、“治疗有效量(therapeuticallyeffectiveamount)”和“治疗有效剂量(therapeuticallyeffectivedose)”交换使用。处于停经期或停经后期的女性通常会因为蒙受停经期症候群而严重影响她们的健康以及日常生活作息。此外，个体的差异会使得这些女性在症状(symptom)以及病况(condition)程度上会有所不同。近年来，已有许多针对停经期症候群的药物被广泛地研究，但是目前临床上所使用的药物仍无法有效地改善所有与停经期或停经后期有关联的症状。因此，当今医药界皆致力于针对个体的差异以及各种与停经期症候群有关联的症状来开发有用的药物以供治疗或改善的目的。目前已知薯蓣皂素具有改善停经期所诱发的骨质疏松症以及回复在老化的皮肤中的角质细胞增生的效用。为了进一步探讨薯蓣皂素在治疗停经期症候群上的效用，申请人以卵巢切除(OVX)的大鼠[ovariectomized(OVX)rats]作为停经期或停经后期的动物模型并且借由高架十字迷宫试验(elevatedplus-mazetest)所测得的移动行为(locomotorbehavior)而将牠们区分成具有或不具有焦虑症状的OVX大鼠。之后，将薯蓣皂素分别喂食给具有以及不具有焦虑症状的OVX大鼠，继而借由习得无助试验(learnedhelplessnesstest)来评估这些大鼠的学习能力。经由实验结果证实薯蓣皂素可以显著地改善具有焦虑症状的卵巢切除的大鼠的学习能力。基于上述，薯蓣皂素被预期具有可用于改善一具有心理症状(特别是焦虑症状)的停经期或停经后期女性的学习能力的高潜力。于是，本发明揭示薯蓣皂素供应用于制备一用来改善一具有心理症状的停经期或停经后期女性的学习能力的医药品或食品产品的用途。因此，本发明提供一种用于改善一具有心理症状的停经期或停经后期女性的学习能力的组合物，其包含有一有效量的薯蓣皂素。依据本发明，该停经期或停经后期女性具有焦虑症状。依据本发明，该薯蓣皂素的有效量是落在0.014g/天至3.5g/天的范围内。在本发明的一个优选实施例中，该薯蓣皂素的有效量是落在0.14g/天至0.7g/天的范围内。依据本发明，该组合物可被制造成有如一医药品的形式。该医药品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于非经肠地道(parenterally)、局部地(topically)或口服地(orally)投药的剂型，这包括，但不限于，注射品(injection)[例如，无菌的水性溶液(sterileaqueoussolution)或分散液(dispersion)]、无菌的粉末(sterilepowder)、锭剂(tablet)、片剂(troche)、丸剂(pill)、胶囊(capsule)以及类似物。依据本发明的医药品可以一选自于由下列所构成的群组中的非经肠道途径来投药月复月莫内注身寸(intraperitonealinjection)、皮下注身寸(subcutaneousinjection)、月/I肉内注身寸(intramuscularinjection)、静脉内注身寸(intravenousinjection)、舌下投药(sublingualadministration)1^^!^(transdermaladministration)。在本发明的一个优选实施例中，该医药品被制成适于舌下投药的剂型。在本发明的一个更优选实施例中，该医药品被制成适于穿皮投药的剂型。在本发明的另一个优选实施例中，该医药品被制成适于口服投药的剂型。依据本发明，该医药品可进一步包含有一被广泛地使用于药物制造技术的药学上可接受的载剂。例如，该药学上可接受的载剂可包含一或多种选自于下列的试剂溶剂(solvent)、乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspendingagent)、分角军剂(decomposer)、黏结剂(bindingagent)、赋形剂(excipient)、安定剂(stabilizingagent)、螯合剂(chelatingagent)、稀释齐Ll(diluent)、月交疑齐[J(gellingagent)、防腐齐[J(preservative)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂(absorptiondelayingagent)、脂质体(liposome)以及类似物。依据本发明，该组合物可被当作食品添加物(foodadditive)，借由以往方法于原料制备时被添加，或是于食品的制作过程中被添加，而与任一种可食性材料被配制成供人类与非人类动物摄食的食品产品。依据本发明，该食品产品的种类包括，但不限于奶粉(milkpowder)、饮料(beverages)(confectionery)(candies)(fermentedfoods)产品(bakeryproducts)、动物饲料(animalfeeds)、健康食品(healthfoods)以及膳食补充品(dietarysupplements)。本发明也提供一种用于改善一具有心理症状的停经期或停经后期女性的学习能力的方法，其包括对该停经期或停经后期女性投药以一有效量的薯蓣皂素。依据本发明，该停经期或停经后期女性具有焦虑症状。依据本发明，薯蓣皂素的每日有效剂量通常是0.2mg/Kg体重至50mg/Kg体重，呈单一剂量或是分成数个剂量的形式，且可被口服地投药或非经肠地道投药。在本发明的一个优选实施例中，薯蓣皂素的每日有效剂量通常是ang/Kg体重至10mg/Kg体重。本发明将就下面的实施例来作进一步说明，但应了解的是，该等实施例只是供例示说明用，而不应被解释为本发明的实施上的限制。<实施例>实验材料1.实验动物在下面实施例中所使用的雌性Wistar大鼠(femaleWistarrats)(8周大，体重约为洸4士2g)是购自于台湾的国家实验动物中心(NationalLaboratoryAnimalCenter,R.0.C.)。所有的实验动物被饲养于一个光照与黑暗各为12小时(光线在早上7点开启)、室温维持在23士1°C以及相对湿度维持在55士5%的独立空调的动物房内，而且水分与饲料被充分地供给。在实验开始之前，各个动物被安抚(handled)以减低动物对于实验操作者以及实验环境的压力反应。在光线开启的第2小时之后，动物被个别地放在一干净的笼子中并且被运送至一具有一照度(illumination)为28301ux的观察室(observationroom)中进行实验，同时实验操作者会离开该观察室以避免在实验期间与动物互动(interaction)。有关实验动物的一切实验程序是由台湾的中山医学大学的动物管理委员会(AnimalcareCommitteeofChungShanMedicalUniversity)所认可，并依据美国国家卫生研究院(NationalInstitutesofHealth，NIH)的实验动物饲养管理及使用规范(GuidefortheCareandUseofLaboratoryAnimals)来进行。2.制备含有薯蓣皂素的土司(diosgenin-containingtoast)首先，依据要被投药给大鼠的剂量(也就是，10,50或100mg/kg/天)来分别计算出所需的薯蓣皂素(diosgenin)(购自于sigma，USA)的重量，继而据此分别取既定重量(givenweight)的薯蓣皂素来与Ig的土司(toast)相混合，而得到含有薯蓣皂素的土司。所形成的含有薯蓣皂素的土司被拿来喂食给实验动物。3.高架十字迷宫(elevatedplus-maze)在下面实施例1中所使用的高架十字迷宫的结构被显示于图1中。该高架十字迷宫是呈十字型地由2个对置的开放臂(opposedopenarms)11(50cmX10cm)、2个具有侧壁(sidewall)而不具有顶盖(roof)的对置的封闭臂(enclosedarms)12(50cmX10cmX40cm)以及一位于中心的开放区域(opensquare)13(IOcmX10cm)所组成，并且以一为50cm的距离而被设置在地板上方。另外，开放臂11以及封闭臂12分别以一虚拟线(virtualline)14而被区分为一近半部(proximalhalf)(接近该开放区域13的部分)与一远半部(distalhalf)(远离该开放区域13的部分)。在各个实验动物被测试之前，该高架十字迷宫以20%乙醇予以彻底地清洗，继而予以彻底地干燥。4.穿梭箱(shuttlebox)在下面实施例1中所使用的穿梭箱是购自于ACCi^Can，USA，它是由2个相同的隔室(compartments)所组成，各个隔室具有一由不锈钢条(stainlesssteelbars)所制成的方格地板(gridfloor)，并且借由一具有一中央门(centraldoor)的壁(wall)而被分隔。该中央门可被关闭以分隔该2个隔室，或者被开启以容许实验动物从所在的隔室中穿越至另一个隔室。该穿梭箱可借由计算机控制来传送制约刺激(conditionedstimuli,CS)[一由音调(tone)(75db)以及光线O501ux)所构成的刺激，历时3秒]以及非制约刺激(unconditionedstimuli,UCS)[一脚电击(electricfootshock)(0.5mA)，历时10秒]。在各个实验动物被测试之前，该穿梭箱以20%乙醇予以彻底地清洗，继而予以彻底地干燥。一般实验方法1.卵巢切除术(ovariectomy)有关卵巢切除术是参考Y.J.Hoetal.^007)(同上述)当中所述的方法来进行，并作部分修改。简言之，大鼠借由克他明(ketamine)(100mg/kg)或舒泰(zoletil)(2mg/kg)的肌肉内注射(intramuscularinjection)而被麻醉。接着，将大鼠的腰区域(lumbarregion)的背侧部分(dorsalpart)进行剃毛(shaving)，然后以75%酒精予以消毒(disinfected)，继而以10%聚维酮碘(povidoneiodine)予以彻底地消毒。之后，使用手术刀(surgicalknife)将皮肤层(skin)切开而使得在皮肤层下方的腹膜(peritoneum)被显露出来，接着以该手术刀将腹膜切开以形成一长度约为1公分的切口(incision)，继而将卵巢移除并使用一4-0消毒缝合线(sterilesuture)来缝合伤口。之后，各个大鼠立即被注射以盘尼西林-G普鲁卡因(Penicillin-Gprocaine)(0.2mL,20,000IU)，并且伤口以10%聚维酮碘予以消毒，俾以减低术后感染(post-operativeinfection)的机会。接着，将各个经卵巢切除的大鼠(ovariectomizedrats)单独地放入塑料笼(plasticcages)中饲养并让牠们进行伤口愈合历时大约5天，继而将牠们随机地分组并转移至饲养笼(homecages)中。实施例1.薯蓣皂素对于具有焦虑症状(anxietysymptom)的卵巢切除(OVX)的大鼠[ovariectomized(OVX)rats]的学习能力(learningability)的影响Α.具有焦虑症状的卵巢切除的大鼠的筛选实验方法将雌性Wistar大鼠随机地分成实验组(n=74)以及假手术组(n=19)，其中实验组大鼠是依照上面“一般实验方法”的第1项「卵巢切除术」当中所述的方法来进行卵巢切除，而假手术组大鼠也被拿来进行相同的实验，不同之处在于这些大鼠的卵巢没有被移除。在手术之后的第四天，各组大鼠被拿来进行下面的高架十字迷宫试验(elevatedplus-mazetest)，俾以了解卵巢切除对于大鼠移动行为(locomotorbehavior)的影响并借此来判断牠们是否具有焦虑症状。有关高架十字迷宫试验是参考Y.J.Hoetal.(2007)(同上述)当中所述的方法来进行，并作部分修改。简言之，将大鼠放在高架十字迷宫的开放区域13上并且面向2个开放臂11中的一者，然后观察并记录牠的行为历时5分钟。在试验的期间，使用一被放置在高架十字迷宫上方的摄影机来监测并记录大鼠的行为，借此可得到下面的量测值(1)开放臂时间(openarmtime)大鼠进入并停留在开放臂11上的时间；(2)封闭臂时间(enclosedarmtime)大鼠进入并停留在封闭臂12上的时间；(3)开放臂活动量(openarmactivity)大鼠穿越开放臂11的虚拟线14的次数；(4)封闭臂活动量(enclosedarmactivity)大鼠穿越封闭臂12的虚拟线14的次数；以及(5)总臂活动量(totalarmactivity)开放臂活动量与封闭臂活动量的总合。接着，将假手术组大鼠所测得的各项量测值进行统计运算，所得到的实验数据是以平均值士SEM来表示。之后，以假手术组大鼠所测得的开放臂时间的平均值作为一基准值，当实验组大鼠所测得的开放臂时间是低于该基准值时表示具有焦虑症状，相反地，若是高于该基准值，表示不具有焦虑症状。依据此方式，申请人进一步将实验组的大鼠区分成具有或不具有焦虑症状的OVX大鼠，继而将具有或不具有焦虑症状的OVX大鼠所测得的各项量测值分别进行统计运算，所得到的实验数据也以平均值士SEM来表示。之后，各组所获得的实验数据借由t_试验(t-tests)来作分析，俾以评估具有或不具有焦虑症状的OVX大鼠与假手术组大鼠之间的差异性，以及具有焦虑症状的OVX大鼠与不具有焦虑症状的OVX大鼠之间的差异性。若所得到的统计比对结果是P<0.05，代表有统计学显著性(statisticalsignificance)。结果下面表1显示假手术组以及实验组大鼠借由高架十字迷宫试验所测得的移动行为。从表1可见，相较于假手术组以及不具有焦虑症状的OVX大鼠，具有焦虑症状的OVX大鼠在开放臂时间与开放臂活动量上都有显著的降低，而在封闭臂时间与封闭臂活动量上则有显著的增加。另外，相较于假手术组的大鼠，不具有焦虑症状的OVX大鼠在开放臂时间上有显著的增加，而在封闭臂时间上则有显著的降低。这个实验结果显示卵巢切除会引起部分的大鼠出现焦虑症状。权利要求1.一种用于改善一具有心理症状的停经期或停经后期女性的学习能力的组合物，其特征在于所述组合物包含有一有效量的薯蓣皂素。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于所述停经期或停经后期女性具有焦虑症状。3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于所述薯蓣皂素的有效量是落在0.014g/天至3.5g/天的范围内。4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于所述组合物可被制造成有如一医药品或食品产品的形式。5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于所述医药品是呈一供口服投药的剂型。6.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于所述医药品是呈一供非经肠道投药的剂型。7.一种薯蓣皂素用于制备一用来改善一具有心理症状的停经期或停经后期女性的学习能力的医药品或食品产品的用途。8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于所述停经期或停经后期女性具有焦虑症状。9.根据权利要求7所述的用途，其特征在于所述薯蓣皂素的有效量是落在0.014g/天至3.5g/天的范围内。10.根据权利要求7所述的用途，其特征在于所述医药品是呈一供口服投药的剂型。11.根据权利要求7所述的用途，其特征在于所述医药品是呈一供非经肠道投药的剂型。全文摘要本发明揭示薯蓣皂素可被用来改善与停经期症候群有关联的认知缺陷(诸如学习能力的下降)。文档编号A61K31/7048GK102462692SQ201110100440公开日2012年5月23日申请日期2011年4月19日优先权日2010年11月18日发明者何应瑞,陈建宏申请人:中山医学大学,何应瑞,晋亚化工厂