专利名称：治疗hiv感染的n-羟基-苯甲酰胺衍生物的制作方法由于十多年前高效抗逆转录病毒疗法(HAART)的引进，故可以有效地控制HIV-I 的感染，使HIV-I病毒血症维持在低于检测值。但是，通过扩展的HAART疗法来消除HIV-I 感染还是不可能。一旦HAART中断，通常在两周后，还会发生病毒血症的反弹[Imamichi H.等人 J Infect. Dis. 183, 36 (2001) ] 病毒反弹的来源是长期的细胞池，最可能是更缓慢受感染的记忆T-细胞储器 (reservoir)，其接纳了 HIV-I整合的前病毒DNA。量化潜伏的细胞池的固定技术是可行的， 并且可以计算HIV-I阳性病人的一百万个中的一个记忆细胞携带的具有复制能力整合的前病毒。在静止细胞中维持前病毒DNA转录无活性的机制为众所周知的。但是，人们长期相信该机制包括染色质-相关调控[Quivy V.等人Subcell Biochem. 41，371 (2007)]。在潜伏的细胞中，整合的前病毒DNA在核小体中密集地组成。包含了启动子和增强子元件的 HIV-I的5’长末端重复序列(LTR)，是大量转录因子结合的目标并且其被组成为两个核小体(nuc-Ο和nuc-1)。NF κ B ρ50同源二聚体，以及AP-4、YYl和LSFl，募集组蛋白脱乙酰酶 (HDAC)到LTR，该酶依次造成在染色质致密处的局部的组蛋白的脱乙酰，并且防止RNA-聚合酶II的组成。组蛋白脱乙酰酶抑制剂(HDACi)，一种新型的合成化合物，可以灭活HDACs的酶活性以及相对抑制HIV-I基因表达。而且与NF κ B细胞激活剂相反，在没有T-细胞常规的活化下，像IL-2、0KT3或TNFa，HDACi可以促进基因表达。组蛋白脱乙酰酶(HDACs)为有能力移除连接在组蛋白N-末端部分或其他蛋白中的赖氨酸残基的乙酰基基团的酶。根据结构同源性，HDACs可以分为四个类型。类型I HDACs (HDAC 1、2、3和8)与 RPD3酵母蛋白相似，并且在细胞核中发现它们。类型II HDACs (HDAC 4、5、6、7、9和10)与 HDAl酵母蛋白相似，并且在细胞核和细胞质中都发现它们。类型III HDACs为与SIR2酵母蛋白相关同NAD-依赖酶在结构上不同的形式。类型IV(HDAC 11) —般由具有特定结构特征的单一的酶组成。类型I、II和IV HDACs为含锌的酶，并且可以通过不同的分子类型抑制它们异羟肟酸衍生物、环状四肽、短链脂肪酸、氨基苯甲酰胺、亲电子酮衍生物等。不能通过异羟肟酸抑制类型III HDACs，其抑制剂结构特征不同于其它类型的抑制剂。为了实现本发明的目的，“组蛋白脱乙酰酶抑制剂”的表述意思是指天然来源、重组或合成、能够抑制至少一种酶(分为类型I、II或IV组蛋白脱乙酰酶)活性的任意分子。组蛋白脱乙酰酶抑制剂是一种具有抗肿瘤和抗炎活性的分子。
在肿瘤细胞中，组蛋白脱乙酰酶抑制剂抑制细胞增殖并且诱导细胞死亡和分化 [Gaofeng Bi 禾口 Guosheng Jiang在Cellular&Molecular Immunology 3,285-290(2006)]。
组蛋白脱乙酰酶抑制剂也能够通过免疫活性细胞调整细胞因子和其它促炎因子的产物，并且它们已经证明了在体内的抗炎性质[Fr6d6ric Blanchard和C6line Chipoy 在 Drug Discovery Today 10,197-204(2005) ；IM Adcock 在 British Journal ofPharmacology 150，829-8310007)]。
使用不同的用于肿瘤疾病和炎症疾病抑制剂的大量临床研究目前正在进行中，并且它们处在进程的不同阶段[Marielle Paris等人在Journal of Medicinal Chemistry 51，1505-1529(2008)]ο
在WO 97/43251(无水形式)和WO 2004/065355 (水合物结晶形式)中描述的二乙基-[6- (4-羟基氨甲酰基-苯氨甲酰氧甲基)-萘-2-基-甲基]-氯化铵，都并入此处作为参考，它是具有良好抗炎活性的HDACs抑制剂；已知这种有效成分的一水合物结晶形式为ITF2357和/或吉维司他(Givinostat)。
WO 2004/063146和WO 2006/003068中公开其它能够抑制HDAC酶的4_氨基-N-羟基-羟基苯甲酰胺衍生物，都一并引入此处作为参考。
不同的HDAC抑制剂被证明能够诱导HIV-I基因自潜伏的感染细胞株中表达；但是，在进行诱导所需的浓度下，越来越担心抑制剂可能的毒性作用[Shehu-Xhilaga，Μ.等人 AIDS 23,2047(2009)]；对此，最近已经提议[Archin, NM 等人 AIDS 23,1799(2009)]挑选的类型IHDAC抑制剂能够成为有效的且较低细胞毒性的HIV诱导物。
丙戊酸(VPA)，一种羧酸HDACi，用于给抽搐和精神病开处方，在某些临床研究中与HAART联合但并没有导致潜伏的储器(reservior)有任何相当大的减少[Lehrman G等人Lancet 366 (9485)，549 (2005)]。因此，这些VPA的研究并没有化解HDACi消除病毒的可台匕
WO 2008/0976M公开了 SAHA用于治疗HIV感染的应用；SAHA是不具有N-羟基-苯甲酰胺结构的HDACi，其市售为伏立诺他(Vorinostat)或佐里扎(Zolinza)。在WO 2008/097654(例子2和

图1)中提到，在0. 632M的EC50下，SAHA诱导HIV-I在ACH-2细胞系中表达。
佐里扎包装说明书指出，用400mg/天的剂量就可达到治疗受皮肤T-细胞淋巴瘤影响的病人的SAHA的可能有效循环浓度。但是，这个剂量下的SAHA会造成大量严重的不良反应，例如腹泻、疲倦、恶心、血小板减少、厌食和味觉障碍。而且，根据佐里扎包装说明书上的信息，在体外的细菌回复突变检测(埃姆斯试验)中SAHA是诱变性的，在体外的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中它会造成染色体畸形，且当对小鼠给药时(老鼠体内微核检测)，其提升了微核化红细胞的发生率。
因此，很明显需要新的HIV-I表达诱导剂，可能是HDAC抑制剂，它们有更强的活性和更低的毒性，与公知的有效诱导HIV-I基因表达的HDAC抑制剂相比，优选地都有更强活性和更低毒性。发明内容
现在已经发现，且其构成了本发明的第一方面，二乙基-W- (4-羟基氨甲酰基-苯
二乙基-[6- (4-羟基氨甲酰基-苯氨甲酰氧甲基)-萘-2-基-甲基]-氯化铵；
氨甲酰氧甲基)_萘-2-基-甲基]-氯化铵，优选一水合物形式，更优选一水合物结晶形式(ITF2357,吉维司他)，在ACH-2细胞系中，在优选125和250nM之间的浓度下，能够诱导 HIV-I基因表达。
ITF2357显示出无诱变性[Monzani，VM等人出席EUR0T0X 2007，第44届毒理学大会，海报G33]；在临床治疗中，通过给与50-200mg的ITF2357，可以轻易得到125和250nM 之间的治疗循环浓度。该范围的剂量应用于大量的临床研究，并且检测到的毒性作用非常低；1.5mg/kg/天的等价剂量给药于幼年特发性关节炎全身型(SOJIA)的儿童，有令人鼓舞的结果并且没有检测到任何毒性作用。[Vojinovic，J.等人出席第72届美国风湿病年会， 圣弗朗西斯科，加利福尼亚，2008年10月四日]。
因此发现，本发明第二个方面，某些4-氨基-N-羟基-苯甲酰胺衍生物(包括ITF2357)的HDAC抑制剂，在并没有显示出任何相当大毒性的浓度下，可非常有效地诱导HIV基因表达；这看起来与之前的观点相反[Shehu-Xhilaga，M.等人AIDS 23， 2047 (2009)]，所述之前观点提出两个作用，HIV基因诱导和毒性，可以取决于相同的结构和 /或机械学原因。
也已经发现，本发明的第三个方面，在ACH-2细胞系中，于125和250nM之间的浓度下，一些能够抑制HDAC酶的该4-氨基-N-羟基-苯甲酰胺衍生物，在诱导HIV-I基因表达时甚至比ITF2357更加有效。
仅仅凭借实施例的方法，如上述WO 2006/003068的实施例2中所述，在ACH-2细胞中，于250nM下，4-(2 (S)-苯甲酰氨基-3-萘_2_基-丙酰氨基)-N-羟基-苯甲酰胺 (化合物g)和苯并[1，3] 二氧杂环戊烯-5-羧酸[1(幻_(4_羟基氨甲酰基-苯氨基甲酰基)-2-萘-2-基-乙基]-酰胺(化合物t)，诱导HIV表达提升30倍，高于用相同浓度的 ITF2357得到的15倍的提升。
以下的化学结构
二乙基-[6- (4-羟基氨甲酰基-苯氨甲酰氧甲基)-萘-2-基-甲基]-氯化铵；
·4_ (2- (S)-苯甲酰氨基-3-萘-2-基-丙酰氨基)-N-羟基-苯甲酰胺(化合物 g)；和
·苯并[1，3] 二氧杂环戊烯-5-羧酸[1⑶-(4-羟基氨甲酰基-苯氨基甲酰基)-2-萘-2-基-乙基]-酰胺(化合物t)；
在下文示出。


本发明公开了治疗受HIV感染的病人的方法，所述方法包括给与N-羟基-苯甲酰胺-为基础的组蛋白脱乙酰酶抑制剂，例如·二乙基-[6-(4-羟基氨甲酰基-苯基-氨甲酰氧甲基)-萘-2-基-甲基]-氯化铵；·4-(2(S)-苯甲酰氨基-3-萘-2-基-丙酰氨基)-N-羟基-苯甲酰胺；和/或·苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-羧酸[1(S)-(4-羟基氨甲酰基-苯氨基甲酰基)-2-萘-2-基-乙基]-酰胺。这些组蛋白脱乙酰酶抑制剂的使用剂量为50到200mg/天，优选为100到200mg/天，以得到125和250nM之间的血液浓度。