专利名称：整合素阻断剂在制备治疗肿瘤药物中的应用的制作方法血管生成是生殖、生长发育和修复的基础，绝大多数恶性实体肿瘤如卵巢癌、肝 癌、宫颈癌和乳腺癌等都是血管依赖性肿瘤。新生血管一方面为肿瘤生长提供营养和氧气， 另一方面还是肿瘤转移的重要途径。因此，抑制肿瘤新生血管可以有效抑制肿瘤的发生、发 展及转移。肿瘤新生血管受许多细胞因子调控，其中与肿瘤血管生成相关的重要肿瘤血管内 皮细胞分子之一是整合素家族的部分成员。整合素是多种细胞外基质成分的受体，广泛存 在于细胞表面，是一个相当大的受体家族。这类受体由一条a链和一条β链组成，在与配 体的结合中都起作用，不同的a链和β链的组合决定了配体的特异性。到目前为止，已发 现15种a链和9种β链。在肿瘤细胞中，整合素的组分发生了复杂的变化，大体上讲，参与 组织结构的整合素数量下降，而与细胞迁移有关的整合素数量上升。整合素l、avi3 5、 av^3等都与血管新生和细胞迁移有关，其中3可影响癌变中的几个非常重要的过程。 它能与多种细胞外基质的糖蛋白结合，av^3还能够与金属蛋白酶结合，降解细胞外基质， 从而更有利于侵入；另外两个受av β 3影响的过程是细胞凋亡和血管新生，在参与血管新 生的毛细血管内皮细胞上，avi3 3的表达量也升高。在肿瘤血管内皮细胞中，血管生长因子 类与整合素的表达有着密切的关系，如VEGF、FGF都能够上调avi3 3的表达。av β 3单克隆 抗体能够抑制它的功能，因此能够促进凋亡和抑制血管新生。目前，国际上开发出的整合素阻断剂已进入II期临床，而我国尚未有相似或同类 产品进入市场，非常有必要开发我国自主知识产权的此类药物。ZL200510040378. 5高效抑 制血管生成多肽及其制备方法和应用，介绍几种整合素抑制剂，其一为整合素阻断剂多肽 序列为 Jle-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-A sp,该序列包含了整合素配体序列(Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp)和新生血管抑制序列 (Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro)，其中整合素配体序列中含有 RGD 序 列(Arg-Gly-Asp)，使该多肽序列可以有效地结合于肿瘤特异性表达的整合素亚型，并且该 序列中含有新生血管抑制序列，能够抑制肿瘤新生血管形成，进而达到抑制肿瘤生长和转 移的效果。先前专利中只是对黑色素瘤做了研究，本发明针对该序列做了进一步研究，发现 其对多种肿瘤有治疗作用，增加了其适用症，拓展了其社会价值和经济价值。
发明目的本发明针对序列 Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp做了进一步研究，发现其对多种实体肿瘤有治疗作用，增加了其适应症。技术方案整合素阻断剂在制备治疗肿瘤药物中的应用，其中所述的整合素阻断剂的序列为 Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp,其特 征在于所述的肿瘤为起源于人的头颈部、甲状腺、胰腺、肺脏、食管、乳腺、肾脏、胆囊、结肠 或直肠、卵巢、子宫颈、前列腺、膀胱或睾丸的原发或继发的癌以及肉瘤。有益效果研究发现，序列Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro 具有抑制肿瘤 血管生成的作用。精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列是整合素的一个重要配体，因此， 含有RGD序列的多肽Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp也能够特异性的识别整合素。本发明 的整合素阻断剂多肽是在具有抑制血管生成作用的序列Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-A Ia-Ala-Val-Pro的一端连接上与整合素家族具有亲和性和结合能力的含有精氨酸_甘氨 酸-天冬氨酸(R( )的Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp序列，构建了一种与整合素有亲和 性和结合能力的多肽。该整合素阻断剂多肽序列为Ile-Val-Arg-Arg-Ala-ASp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp，其含有 18 个氨基酸的多肽，分子中 RGD 序列 具有整合素亲和性和结合能力，研究表明其起作用靶点为整合素avi3 3，并且该序列中含有 新生血管抑制序列，从而抑制肿瘤新生血管形成，进而达到抑制肿瘤生长和转移的效果。虽然在先前的专利ZL200510040378. 5公开了该序列对黑色瘤有治疗效果，但并 未公开对其他肿瘤有治疗效果。国内外大量的研究表明即使是同一组织类型、分化程度相 同的肿瘤，对同一药物的敏感性也有可能不同，因此，药物开发中对某一分子需要进行抗肿 瘤谱的筛选。因为有些药物只对特定肿瘤细胞有效，对其他肿瘤是无效或低效，因此需要实 验去摸索和验证其治疗效果。发明人经过大量实验获知该整合素阻断剂能够抑制人脐静脉 内皮细胞迁移，体内实验具有明显的抗肿瘤效果，并且副作用少，用量少成本降低。说明本 发明设计的整合素阻断剂多肽科学、合理、可行有效，能作为制备治疗人类实体肿瘤的治疗 药物，极大拓展了该整合素阻断剂的治疗谱，为将来药物开发提供了新的思路和前景，具有 显著的社会价值和市场价值。附图 Iffesternblotting 检测 integrin av 和 β 3 在 Bel-7402 细胞中的表达；附图2流式细胞实验检测多肽与靶点的结合；附图3整合素阻断剂多肽抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖作用；附图4整合素阻断剂多肽抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的迁移作用；附图5整合素阻断剂多肽对人鼻咽癌CNE裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；附图6整合素阻断剂多肽对人甲状腺癌SW-579裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作 用；附图7整合素阻断剂多肽对人胰腺癌SW-1990裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；附图8整合素阻断剂多肽对人胰腺癌SW-1990裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用剖 取的肿瘤实物图；附图9整合素阻断剂多肽对人肺癌H460裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；附图10整合素阻断剂多肽对人食管癌Ecl09裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；附图11整合素阻断剂多肽对人乳腺癌MDA-MB-231裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作 用；附图12整合素阻断剂多肽对人乳腺癌MDA-MB-231裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作 用剖取的肿瘤实物图；附图13整合素阻断剂多肽对人肾癌A498裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；附图14整合素阻断剂多肽对人胆囊癌GBC-SD裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；附图15整合素阻断剂多肽对人结肠癌HT-四裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；附图16整合素阻断剂多肽对人卵巢癌SK-0V-3裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作 用；附图17整合素阻断剂多肽对人宫颈癌HeLa裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；附图18整合素阻断剂多肽对人宫颈癌HeLa裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用剖取 的肿瘤实物图；附图19整合素阻断剂多肽对人前列腺癌DU-145裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作 用；附图20整合素阻断剂多肽对人膀胱癌HT1376裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；附图21整合素阻断剂多肽对人睾丸癌5637裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；附图22整合素阻断剂多肽对肉瘤HT-1080裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；附图23整合素阻断剂多肽对肉瘤HT-1080裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用剖取 的肿瘤实物图。


本发明涉及药物领域，具体涉及具有抑制肿瘤血管生成、具有整合素亲和性和结合能力的一种整合素阻断剂，此阻断剂是一种多肽，该整合素阻断剂多肽可用于实体肿瘤的治疗。该整合素阻断剂在制备治疗肿瘤药物中的应用，其中所述的整合素阻断剂的序列为Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp，其特征在于所述的肿瘤为起源于人的头颈部、甲状腺、胰腺、肺脏、食管、乳腺、肾脏、胆囊、结肠或直肠、卵巢、子宫颈、前列腺、膀胱、睾丸的原发或继发的癌以及肉瘤。说明本发明设计的整合素阻断剂多肽科学、合理、可行有效，能作为制备治疗人类实体肿瘤的治疗药物，其极大拓展了该整合素阻断剂的治疗谱，为将来药物开发提供了新的思路和前景，具有显著的社会价值和市场价值。