专利名称：一种抗流感病毒的中药有效部位及其制备方法 中医药对流感的治疗，具有独特的疗效。“夏桑菊”由夏枯草、桑叶、野菊花三味中药组成，用水提制成的“夏桑菊颗粒剂”是我国的著名中成药，常用于中医热症的治疗，日常生活中常用作凉茶抗流行性感冒。但是由于通常用水提取原料药，取得的仅为水溶性成分，影响了中药的药效发挥；在工艺上又存在着长时间的加热，导致热敏性有效成分被破坏，不能作为一线药物用于抗流行性感冒；同时由于药物生产工艺技术落后，科技含量不足，剂型粗糙，消费者难以接受。
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种将古方与现代制剂技术相结合，既美观又方便，服用剂量小，可用于治疗急性流行性感冒病毒的抗流感病毒的中药有效部位及其制备方法。本发明的目的是这样实现的，其由如下原料药的脂溶性有效部位制成夏枯草5-200份，桑叶5-100份，野菊花5-100份。作为一种优化方案，其由如下原料药的脂溶性有效部位制成夏枯草50-150份，桑叶20-50份，野菊花15-100份。最优选的方案是其由如下原料药的脂溶性有效部位制成夏枯草100份，桑叶35份，野菊花16份。该中药有效部位可以制成片剂、胶囊、颗粒剂、口服液、注射液、吸入剂、喷雾剂或滴剂，可用作制成人用或禽兽用抗流行性感冒病毒药品，或消毒防疫品。可以应用于制备杀灭甲型流感病毒H3N2亚型、高致病性禽流感病毒H5N1亚型和乙型流感病毒株的药物。该抗流感病毒的中药有效部位的制备方法为将前述夏枯草，桑叶，野菊花粉碎，置超临界提取装置中，用CO2进行超临界萃取，萃取条件是萃取压力15-33Mpa；萃取温度为30-50℃，解析压力5-9Mpa；解析温度为30-55℃，萃取1-4小时后，即可得到含脂溶性有效部位的提取物。
优化的萃取条件是萃取压力20-22Mpa；萃取温度为45-50℃，解析压力6-7Mpa；解析温度为40-45℃，萃取3小时后，得到含脂溶性有效部位的提取物。(二氧化碳流量为25±3L/h)本发明的药物有效部位可以用于治疗盒预防急性流行性感冒，有效成分明确，药效显著，服用剂量小，剂型多样，使用方便。以下结合有关试验进一步说明本发明的有益效果1、材料与仪器1.1、试药与仪器夏枯草，桑叶，野菊花，购于广州清平药材市场，经鉴定均为中国药典2005年版收载的品种。
1-5升超临界二氧化碳萃取装置，购于广州市轻工业研究所；24，96孔细胞培养板和25cm3细胞培养瓶，购于德国Greiner bio-one公司。二氧化碳培养箱3210型，购于美国Forma公司。美国VARIAN-3900气相色谱仪。
1.2、毒株与细胞甲型流感病毒毒株(A/shenzhen/203/2001/H3N2，A/shenzhen/45/2001/H1N1 H5N1)、乙型流感病毒毒株，细胞株MDCK，由深圳市疾病预防控制中心微生物检验科提供。
2、方法与结果2.1、样品的制备将夏枯草100份，桑叶35份，野菊花16份，粉碎成粗粉，按水提液的制备方法和SFE-CO2提取物的制备方法制备夏桑菊水提液、夏桑菊SFE-CO2提取物。
水提液的制备方法取夏枯草100份，桑叶35份，野菊花16份，药材总重为151g，用1000ml水加热煎煮3次，每次1小时，过滤，合并提取液，浓缩至151ml，滤过，置洁净容器中备用。
SFE-CO2提取物的制备方法取夏枯草100份，桑叶35份，野菊花16份，药材总重为453g，粉碎成10-30目粉，置超临界提取装置中，用CO2进行超临界萃取，萃取条件是萃取压力21Mpa；萃取温度为50℃，解析压力6.5Mpa；解析温度为45℃，萃取3小时，得萃取物25g，置洁净容器中备用。
2.3、体外抑制甲型和乙型流感病毒的作用采用微量培养法。
首先将三种病毒(H3N2、H5N1和乙型流感病毒)分别稀释成测试浓度(100个TCID50)。将夏桑菊的水提液，不稀释直接加入已长成单层的MDCK细胞(狗肾传代细胞)中100μl/孔，再加入流感病毒液50μl/孔，再加100μl/孔的维持液。每个浓度4孔，同时设细胞对照孔，置35℃，5％CO2孵箱环境培养过夜，于每孔中加入0.2mL1％红细胞悬液，混合均匀后室温放置30-60min。观察血凝结果。
将夏桑菊的SFE-CO2提取物样品，用DMSO制成100mg/ml的样液后，用PBS作对倍稀释(1∶2，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128)共6管，稀释后加入已长成单层的MDCK细胞中50μl/孔，每孔再加流感病毒液50μl/孔，再加每孔100μl/孔的维持液。每个样品浓度4孔，同时设DMSO孔和细胞对照孔，置35℃，5％CO2孵箱环境培养过夜，于每孔中加入0.2mL1％红细胞悬液，混合均匀后室温放置30-60min.。观察血凝结果。结果见表1。
表1.夏桑菊不同提取法提取物的抗流感病毒的最大稀释度

结果显示，夏桑菊SFE-CO2提取物脂溶性成分对流感病毒甲型H3N2、流感病毒甲型H5N1(禽流感病毒)和乙型流感病毒均有灭毒作用，而夏桑菊水提液对流感病毒甲型H3N2、流感病毒甲型H5N1(禽流感病毒)和乙型流感病毒均无灭毒作用。
2.4、夏桑菊SFE-CO2提取物对细胞毒性的测定采用微量培养法。预先将MDCK细胞培养于96孔培养板内，置35℃，5％CO2孵箱环境中培养，约24小时细胞成层后，弃去孔内培养液，再将递倍稀释(1∶20，1∶40，1∶80，1∶160，1∶320，1∶640，1∶1280)的100μl脂溶性成分样品液，分别加入已长成单层的MDCK细胞中，每孔再加100μl/孔的维持液。每个浓度4孔，同时设细胞对照孔，置35℃，5％CO2孵箱环境培养，每天记录细胞病变结果，直至药物对细胞的毒性不再继续进展时判结果。以不出现细胞病变的药物最小稀释倍数为无限毒量。
结果显示，夏桑菊SFE-CO2提取物无限毒量为1∶16，是抗流感病毒作用的最大稀释度1∶320的20倍。
3、小结与讨论夏桑菊SFE-CO2提取物对流感病毒三种类型均有灭毒作用；而水提液对流感病毒三种类型均无灭毒作用。夏桑菊SFE-CO2提取物无限毒量为1∶16，是抗流感病毒作用的最大稀释度1∶320的20倍。由此可确认夏桑菊采用SFE-CO2提取才具有抗流感的药效。
流感病毒株选用甲型的H3N2、H5N1株和乙型流感病毒株，其中甲型的H3N2是近期在亚洲流行的流感发病病毒，而H5N1是人感染高致病性禽流感病毒，曾引发1997年和2003年香港禽流感，是亚洲流行的高致病性禽流感的病毒株。夏桑菊脂溶性成分能灭杀H3N2、H5N1甲型流感病毒和乙型流感病毒，提示夏桑菊SFE-CO2提取物脂溶性成分可用于人的甲型流感和乙型流感的防治，也可用于禽流感。

实施例2取夏枯草5份，桑叶20份，野菊花100份，药材总重为250g，粉碎成30目粉，置超临界提取装置中，用CO2进行超临界萃取，萃取条件是萃取压力16Mpa；萃取温度为35℃，解析压力5Mpa；解析温度为30℃，萃取2小时，得含脂溶性有效部位的提取物14g，加入适量辅料，制成含超临界提取物的滴剂，用于家禽预防禽流感。
实施例3取夏枯草200份，桑叶100份，野菊花10份，药材总重为620g，粉碎成20目粉，置超临界提取装置中，用CO2进行超临界萃取，萃取条件是萃取压力33Mpa；萃取温度为50℃，解析压力9Mpa；解析温度为55℃，萃取4小时，得含脂溶性有效部位的提取物35g，加入适量辅料，制成含2％超临界提取物的乳剂，用于禽流感疫情期间，喷射消毒防疫。
实施例4取夏枯草150份，桑叶50份，野菊花100份，药材总重为300g，粉碎成30目粉，置超临界提取装置中，用CO2进行超临界萃取，萃取条件是萃取压力25Mpa；萃取温度为48℃，解析压力8Mpa；解析温度为40℃，萃取3小时，得含脂溶性有效部位的提取物17g，加入适量辅料，制成含0.1g/粒超临界提取物的片剂，用于预防禽流感，每日3次，一次一粒，连续服用3天。
实施例5取夏枯草180份，桑叶75份，野菊花80份，药材总重为670g，粉碎成30目粉，置超临界提取装置中，用CO2进行超临界萃取，萃取条件是萃取压力28Mpa；萃取温度为40℃，解析压力9Mpa；解析温度为50℃，萃取4小时，得含脂溶性有效部位的提取物40g，加入适量辅料，制成含超临界提取物的颗粒剂，用于预防禽流感，连续服用3天。
实施例6取夏枯草20份，桑叶100份，野菊花5份，药材总重为500g，粉碎成30目粉，置超临界提取装置中，用CO2行超临界萃取，萃取条件是萃取压力30Mpa；萃取温度为45℃，解析压力7Mpa；解析温度为40℃，萃取4小时，得含脂溶性有效部位的提取物27g，加入适量辅料，制成含2％超临界提取物的乳剂，在流感疫情期间，用于喷射消毒防疫。
实施例7取夏枯草100份，桑叶50份，野菊花10份，药材总重为480g，粉碎成30目粉，置超临界提取装置中，用CO2进行超临界萃取，萃取条件是萃取压力22Mpa；萃取温度为50℃，解析压力6.5Mpa；解析温度为40℃，萃取3小时，得含脂溶性有效部位的提取物27g，加入适量辅料，制成含超临界提取物的口服液，在流感疫情期间，用于治疗流感。
实施例8、取夏枯草50份，桑叶50份，野菊花50份，药材总重为450g，粉碎成30目粉，置超临界提取装置中，用CO2进行超临界萃取，萃取条件是萃取压力21Mpa；萃取温度为45℃，解析压力7Mpa；解析温度为40℃，萃取3小时，得含脂溶性有效部位的提取物25g，加入适量辅料，制成含超临界提取物的注射液，在流感疫情期间，用于治疗流感。
实施例9取夏枯草40份，桑叶80份，野菊花20份，药材总重为420g，粉碎成30目粉，置超临界提取装置中，用CO2进行超临界萃取，萃取条件是萃取压力22Mpa；萃取温度为50℃，解析压力6.5Mpa；解析温度为40℃，萃取3小时，得含脂溶性有效部位的提取物23g，加入适量辅料，制成含超临界提取物的吸入剂，在流感疫情期间，用于治疗流感。
实施例10取夏枯草120份，桑叶75份，野菊花65份，药材总重为260g，粉碎成30目粉，置超临界提取装置中，用CO2进行超临界萃取，萃取条件是萃取压力20Mpa；萃取温度为40℃，解析压力5Mpa；解析温度为40℃，萃取2小时，得含脂溶性有效部位的提取物14g，加入适量辅料，制成含超临界提取物的喷雾剂，在流感疫情期间，用于喷雾防疫。
实施例11取夏枯草75份，桑叶20份，野菊花80份，药材总重为350g，粉碎成30目粉，置超临界提取装置中，用CO2进行超临界萃取，萃取条件是萃取压力22Mpa；萃取温度为50℃，解析压力6.5Mpa；解析温度为40℃，萃取3小时，得含脂溶性有效部位的提取物20g，加入适量辅料，制成含超临界提取物的滴剂，在流感疫情期间，用于治疗流感。
实施例12取夏枯草175份，桑叶10份，野菊花40份，药材总重为550g，粉碎成30目粉，置超临界提取装置中，用CO2进行超临界萃取，萃取条件是萃取压力20Mpa；萃取温度为35℃，解析压力5Mpa；解析温度为40℃，萃取2小时，得含脂溶性有效部位的提取物30g，加入适量辅料，制成含0.1g/粒超临界提取物的片剂，用于预防流感，连续服用3天。


本发明公开了一种抗流感病毒的中药有效部位，其由夏枯草5－200份，桑叶5－100份，野菊花5－100份为原料，粉碎后，用CO