一种转基因番茄组培苗炼苗的方法一、[0002]番茄营养丰富，产量高，适应性广，是世界各国的主要蔬菜作物之一。同时番茄也是最早进行基因转化研究的高等模式植物之一，其研究结果常常被借鉴用于其他植物上。因此番茄转基因的研究是当前植物基因工程研究的热点之一。随着生物技术的发展，利用基因工程进行番茄品种遗传改良的研究取得了重要的进展，迄今为止，已获得了抗病毒、抗病虫害、抗除草剂、抗冻、贮藏期延长和雄性不育转基因番茄等。[0003]目前绝大多数转基因番茄组培苗存在成活率低的问题，严重影响番茄转基因研究的进展。例如欧阳波等(2002)利用番茄下胚轴成功获得转基因植株，他们炼苗的方法是生根的再生苗长至5cm以上时，将根部培养基冲洗干净，栽入装有灭菌土的塑料杯中，待幼苗长到比较健壮后，移栽至瓦钵或大田。张艳芳等(2008)获得番茄转基因植株后炼苗的方法是揭去培养瓶的封口膜，炼苗一周后移栽于苗钵中(苗钵培养基质经高温高压灭菌)。移栽后先套塑料袋保湿数天后再去袋，室温下20-25°C生长。这两种常用的方法缺点是炼苗时外界环境变化大，幼嫩的转基因组培苗由于根系功能未完全恢复，不适应干燥的外界环境，容易萎蔫和染病致死。三、
[0004]本发明目的在于克服现有转基因组培苗炼苗方法的缺点与不足，提供一种成活率较高转基因番茄组培苗炼苗的方法。[0005]本发明的方法包括如下步骤:[0006]通过前期的组织培养和农杆菌的侵染，获得转基因番茄组培苗，待苗在生根培养基中生长健壮，高度4-5cm，根系发达，即可将培养瓶的封口膜打开，加入0.5-lcm蒸馏水在25°C光照培养箱中炼苗2d，然后将苗取出，洗去根部培养基残渣，将幼苗移栽至经高温灭菌浇足水的营养土花钵中，营养土的配置为花卉有机土:蛭石:珍珠岩2:1:1。盖塑料薄膜保湿，在25°C光照培养箱中培养一周，期间用稀释10倍的MS营养液浇I次。待小苗有新叶长出时，可去掉塑料薄膜。移栽时把花钵中苗和营养土一起移至大田，然后按照正常的水肥管理，成活率达100%。[0007]由上述公开的技术方案可见，本发明的方法比现在常规的技术增加了炼苗的步骤，使转基因组培苗有2个适应外部环境的阶段，极大提高了组培苗移栽至大田后成活率。
四、
[0008]将在MS培养基上生长7天的“中蔬四号”番茄无菌苗子叶作为外殖体，采用含有目的基因农杆菌EH105菌株进行遗传转化，待转基因组培苗在生根培养基中生长健壮，高度4-5cm，根系发达，即可进行炼苗。供试转基因番茄苗共50株，炼苗时先将培养瓶的封口膜打开，加0.5-lcm蒸馏水在25°C光照培养箱中炼苗2d，然后将苗取出，洗去根部培养基残渣，将幼苗移栽至经高温灭菌浇足水的营养土花钵中，营养土的配置为花卉有机土:蛭石:珍珠岩2:1:1。盖塑料薄膜保湿，在25°C光照培养箱中培养一周，期间用稀释10倍的MS营养液浇I次；待小苗有新叶长出时，可去掉塑料薄膜。移栽时把花钵中苗和营养土一起移至大田，然 后按照正常 的水肥管理，成活率达100 %。