专利名称：药物与蛋白质结合前药的结合体的制作方法目前使用的大多数药物为低分子量的化合物，并且当全身施用到患者时显示高血浆清除率或全身清除率。另外，所述低分子量化合物显示通过扩散渗透机体组织的高趋向性，导致均匀的生物分布。这些是之所以只有少量药物达到作用位点的两个主要原因，并且由于在整个机体健康组织内分布，因此所述药物引起不良副作用。对于具有高细胞毒素潜力的那些药物，例如细胞毒素剂、免疫抑制剂或病毒生长抑制剂，会特别关注于这些缺点。在降低健康组织中活性剂的浓度以减少副作用的同时，已寻求了用于改善低分子量药物的选择性并因此提高活性剂在所需组织中的浓度的若干策略。载体，例如白蛋白或其药物共轭物显示高达19天的显著长的体循环半衰期。这是因为恶性、被 感染或发炎组织等的血管壁对大分子的渗透性增加，使载体例如血清白蛋白优选通过进入靶组织。在该背景下，已提供了原位结合到例如人血清白蛋白并与单独的药物相比显示性能改善的前药。另外，已研究了将抗体、肽或合成聚合物作为药物载体以用于前药开发。然而，虽然该前药已显示出在大多数情况下允许活性剂向靶组织更特异的递送， 但期望进一步提高该试剂的效力和活体内耐受性以改善治疗。发明内容因此，本发明要解决的技术问题是提供可用于各种疾病治疗的更加有效和/或更加耐受的药物组合物。通过权利要求中表征的实施方案来实现上述技术问题的解决方案。特别地，已发现蛋白质结合前药与低分子量药物的结合体(combination)与单独的或者前药或者低分子量药物相比，令人惊讶地产生更好的治疗效果和活体内耐受性。因此，本发明的一个方面涉及包含至少一种第一药物和至少一种蛋白质结合前药的结合体的组合物，其中所述蛋白质结合前药包含蛋白质结合基团、第二药物和可水解裂解、酶解裂解或以PH依赖的方式裂解的连接子，和其中至少一种第一药物和包含于前药的第二药物为相同或不同。
如本文使用的术语“前药”涉及以非活性或低活性形式施用到生物体例如人，并例如通过新陈代谢转化为活性形式的任何形式的药物。前药向活性形式的所述转化不特别限定，并包括在施用后发生的前药的任何化学和/或物理变化，例如通过水解裂解、酶解裂解和/或PH依赖的裂解在作用位点处的前药活性部分的释放。
根据本发明，对于本发明组合物的前药组分，即蛋白质结合基团、第二药物和可裂解连接子是如何彼此连接的没有特别限定，只要第二药物结合到可裂解连接子并且蛋白质结合基团和第二药物的生物学功能不受组织结构(structural setup)的不利影响即可。本发明组合物前药的分子结构可例如具有线性形状或支化形状或以环形存在。
根据本发明，关于本发明组合物前药的组织结构(即，上述定义的前药组分彼此化学结合的方式)没有特别限定。特别地，根据本发明组合物的前药在上述定义的前药组分之间的任何位置中可包含一种或多种间隔子(spacer)，S卩，蛋白质结合基团可例如通过间隔子结合到前药的其余部分，或作为另外的实例，第二药物可通过间隔子结合到可裂解连接子。此外，例如可裂解连接子的功能可合并到该间隔子中，即，可在第二药物和前药的其余部分之间使用也可用作可裂解连接子的间隔子。还可将第二药物、可裂解连接子和/ 或蛋白质结合基团结合到中心基团(central group),所述中心基团可以是适于结合一种或多种前药组分的线性或支化的例如肽、糖、杂环基团或任何无机或有机化合物。
本文使用的表述“蛋白质结合基团”没有特别限定，并涉及能够结合到可以是内源性或外源性化合物的氨基、羟基或硫醇基的任何官能团。根据本发明的蛋白质结合基团的优选实例是顺丁烯二酰亚胺基、卤代乙酰胺基、卤代乙酸酯基、吡啶硫代基(pyridylthio)、 乙烯基羰基、氮丙啶基、二硫基、取代或未取代的乙炔基和羟基琥珀酰亚胺酯基。在本发明组合物的特别优选的实施方案中，蛋白质结合基团为顺丁烯二酰亚胺基。蛋白质结合基团还包括可通过标准偶联剂，例如二环碳二亚胺、酰基氯或肽偶联剂(如，BOP, HATU、PyBOP) 来活化的官能团例如-COOH或-SO3H。
可将一种或几种前药结合到任何合适的载体如肽、糖、血清蛋白质、抗体或抗体片段、生长因子、多糖或合成聚合物。通常载体可包含适当的官能团如羟基、氨基或硫醇基以结合蛋白质结合前药。如有必要，可通过本领域技术人员已知的技术经化学修饰来将这些引入载体分子。
在优选实施方案中，根据本发明组合物的前药的蛋白质结合基团允许所述前药在通过例如注射施用后原位结合到体液组分和/或组织组分，优选结合到血清蛋白质并更优选结合到血清白蛋白，特别是血清白蛋白的半胱氨酸-34，然后表现为携带第二药物到靶位的大分子前药。在本发明组合物的特别优选的实施方案中，上述定义的前药的蛋白质结合基团原位结合到白蛋白的半胱氨酸-34。
如本文所使用的术语“可裂解的连接子”涉及可物理或化学裂解的任何连接子。物理裂解的实例可以是通过光、放射性放射物或热的裂解，而化学裂解的实例包括通过如下的裂解氧化还原反应、水解裂解、pH依赖的裂解或通过酶的裂解。根据本发明的可裂解连接子的裂解可在活体内，例如在患者如人类患者体内进行。
根据本发明组合物优选的实施方案，可裂解连接子包括一种或多种可水解裂解键，其水解释放第二药物。可水解裂解键的实例为酯键或金属配合键(metal-complex bond)，例如存在于二羧酸钼配合物中的金属配合键，其中释放二氨二水合钼 (diaminediaquoplatinum) ( II )配合物。
本发明组合物的另外优选的实施方案中，可裂解连接子可为通过酶可裂解的。例如，本发明组合物的可裂解连接子可包含至少一种优选位于蛋白酶可裂解肽序列内的肽键。因此可通过将各肽序列插入到可裂解连接子来实现肽键。合适的酶例如为蛋白酶和5肽酶，例如，基质金属蛋白酶(MMP)、半胱氨酸蛋白酶、丝氨酸蛋白酶和纤溶酶活化剂，它们在疾病例如类风湿性关节炎或癌症中以强化方式形成或活化，导致过度的组织降解、炎症和转移。根据本发明蛋白酶优选的实例特别为MMP-2、MMP-3和MMP-9，组织蛋白酶B、H、L和D，纤溶酶，尿激酶，和前列腺特异性抗原(PSA)。合并到前药的优选的肽序列为 Arg、Arg—Arg、Phe-Arg> Phe—Cit、Ile-Pro Lys、Lys-Lys> Arg-Lys> Ala-Leu—Ala—Leu、 Phe-Lys> Phe_Lys_Ala、Val-Cit> Val-Arg、Ala_Phe_Lys、D-Ala-Phe-Lys、Met、 Met-Met> Phe-Met> Tyr-Met、Ala-Met、Ala-Phe-Met> Phe-Ala-Met、Ala-Tyr-Met、 Phe-Tyr-Met、Ser-Ser-Tyr-Tyr-Ser-Arg> Phe-Pro-Lys-Phe-Phe-Ser-Arg-Gln> Lys-Pro-I Ie-Glu-Phe-Nph-Arg-Leu> Gly-Pro-Leu-Gly-IIe-Ala-GIy_Gln、 Gly-Pro-Leu-Gly-IIe-Ala-Gly-Gln> Gly-Pro-Gln-Gly - I le_Trp-Gly_Gln、 Gly-Phe-Leu-Gly。另外，酶可裂解连接子可包括自杀式(self-immolative)连接子,例如自杀式对氨基苄氧羰基(PABC)连接子或N-甲基-或对称N，N-二甲基乙烯连接子。
在本发明组合物另外的优选实施方案中，根据本发明的可裂解连接子优选包含至少一种酸不稳定键。酸不稳定键的实例为酯键、缩醛键、缩酮键、亚胺键、腙键、羧基腙键和磺酰腙键以及含有三苯甲基的键。
在本发明组合物另外的优选实施方案中，可裂解连接子包括具有I至20个碳原子的取代或未取代的、支链或直链脂族烷基(可包含一个或多个氧原子或氮原子)，和/或取代或未取代的芳基。
在本发明组合物特别优选的实施方案中，可裂解连接子为羧基腙连接子。
根据本发明，术语“原位”包括在已向其施用前药的生物体内，根据本发明组合物的前药与内源性生物分子如血清蛋白质、特别是血清白蛋白的结合。
如本文所使用的术语“药物”涉及或者本身或者其转化后在上述生物体内引起药效的任何化合物，因此还包括来自这些转化(conversions)的衍生物。根据本发明组合物的药物的药效可以仅仅是单效，例如细胞生长抑制效果，或者广谱药学作用，例如同时免疫抑制和抗炎的效果。
在本发明组合物的优选实施方案中，第一药物和包含于前药的第二药物独立地选自由细胞生长抑制剂、细胞因子、免疫抑制剂、抗风湿药、消炎剂、抗生素、镇痛药、病毒抑制剂、抗霉菌剂、转录因子抑制剂、细胞周期调节剂、多耐药性(MDR)调节剂、蛋白酶体或蛋白酶抑制剂、细胞凋亡调节剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、酶抑制剂、血管生成抑制剂、激素或激素衍生物、放射性物质、发光物质或吸光物质组成的组。
在本发明组合物的优选实施方案中，第一药物和/或包含于前药的第二药物为独立地选自由以下物质组成的组的各细胞生长抑制剂N-亚硝基脲例如嘧啶亚硝脲；蒽环霉素类阿霉素、柔红霉素、表柔比星、依达比星(idarubicin)、米托蒽醌和阿美蒽醌， 及其任意衍生物；烧基化剂类瘤可宁、苯达莫司汀(bendamustine)、美法兰(melphalan) 和氧氮磷环(oxazaphosphorines),及其任意衍生物；抗代谢物类5_氟尿卩密唳、2’-脱氧-5-氟尿苷(2，-deoxy-5-fIuoridine)、阿糖胞苷、克拉屈滨(cladribine)、氟达拉滨 (fludarabine)、喷司他丁(pentostatine)、吉西他滨(gemcitabine)和疏基鸟嘌呤，及其任意衍生物；叶酸拮抗剂类氨甲蝶呤、雷替曲塞(raltitrexed)、培美曲塞(pemetrexed) 和普来曲塞(plevitrexed),及其任意衍生物；紫杉烧类紫杉醇和多西他赛(docetaxel),及其任意衍生物；喜树碱类拓扑替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)、9_氨基喜树碱和喜树碱，及其任意衍生物；长春花生物碱类长春花碱、长春新碱、长春花碱酰胺(vindesine)和长春瑞滨(vinorelbine),及其任意衍生物；加利车霉素类 (calicheamicins)及其任意衍生物；美登木素生物碱类(maytansinoids)及其任意衍生物；奥利斯达汀类(auristatins)及其任意衍生物；埃博霉素类(epothilones)及其任意衍生物；博来霉素、更生霉素、光辉霉素、丝裂霉素C和顺式构型的钼(II )配合物。在本发明组合物特别优选的实施方案中，第一药物和/或包含于前药的第二药物为/均为阿霉素或其衍生物。
根据本发明尤其适合的细胞因子为例如白细胞介素-2、干扰素a _2a、干扰素 a _2b、干扰素β-la、干扰素β-lb、干扰素Y _lb、肿瘤坏死因子及其任意衍生物。
根据本发明尤其适合的免疫抑制剂为例如，环孢菌素A、他克莫司(taciOlimus)、 西罗莫司(sirolimus)、依维莫司(everolimus)、麦考酌·酸酯(mycophenolatmofetil)及其任意衍生物。
根据本发明尤其适合的抗风湿药为例如，氨甲蝶呤、来氟米特(Ieflunomid)、柳氮磺批唳(sulfasalazine)、氯喹(chloroquine)及其任意衍生物。
根据本发明尤其适合的消炎剂和/或镇痛药为例如，水杨酸衍生物如乙酰水杨酸及其任意衍生物等；具有乙酸或丙酸基团的药物衍生物如双氯芬酸，或萘普生和氨基酚各自的衍生物例如扑热息痛等。
根据本发明尤其优选的抗生素为例如，磺胺、磺胺脲和磺胺甲氧二嗪及其任意衍生物；青霉素类，例如6-氨基青霉烷酸、青霉素G及青霉素V及其任意衍生物；异噁唑青霉素类(isoxazolylpenicillins),例如苯唑西林(oxacillin)、氯唑西林(cloxacillin)和可氯唑西林(clucloxacillin)及其任意衍生物；α -取代的苄青霉素类例如，氨苄青霉素、 羧苄青霉素、匹氨苄青霉素、阿莫西林及其任意衍生物；酰氨基青霉素类，例如美洛西林、阿洛西林、哌拉西林、阿帕西林及其任意衍生物；脒基青霉素类(amidinopenicillins),例如甲亚胺青霉素；非典型内酰胺类例如亚胺培南(imipenam)和噻肟单酰胺菌素；头孢霉素类，例如头孢氨苄、头孢拉定(cefradin)、氯头孢菌素、头孢羟氨苄、头孢克肟、头孢泊肟、 唑啉头孢菌素、头孢西酮、头孢呋肟、头孢羟唑、头孢替安、头孢噻吩、头孢替坦、头孢美唑、 拉氧头孢、头孢噻S亏(cefotaxmine)、头孢曲松、头孢唑厢、头孢甲厢(cefmonoxime)、头孢他啶、头孢磺啶和头孢哌酮及其任意衍生物；四环素类例如四环素、金霉素、土霉素、去甲金霉素、罗利环素、强力霉素、米诺环素及其任意衍生物；氯霉素类例如氯霉素和甲砜氯霉素及其任意衍生物；旋转酶抑制剂类，例如，萘啶酮酸、吡哌酸、诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星和依诺沙星及其任意衍生物；和抗结核病药例如异烟肼及其任意衍生物。
根据本发明尤其优选的病毒抑制剂为例如，核苷类似物如阿昔洛韦、更昔洛韦、 疱疹净、三氮唑核苷、阿糖腺苷(vidaribine)、叠氮胸苷、地达诺新和2’，3’ -双脱氧胞苷 (ddC)及其任意衍生物，以及金刚烷胺。
根据本发明尤其适合的抗霉菌剂为例如，两性霉素B及其任意衍生物。
根据本发明尤其优选的MDR调节剂为例如，戊脉安、二氢吡啶类、环孢菌素A和 D、他克莫司(tacrolismus)、雷帕霉素(rapamyin)、地高辛、洋地黄毒苷、奎尼丁、洛伐他汀、阿托伐他汀(atorvastin)、利血平类似物、三氟拉嗪、泊韦林(pervilleines)A-F、伐司朴达、右维拉帕米、比立考达(biricodar)、节普地尔(bepridil)、红霉素、左氧氟沙星、 氯沙坦(Iosartan)、吗啡、利福平、苯妥英、秋水仙素、罗丹明123、安瑞那韦、印地那韦、奈非那韦(nelfinavir)、沙奎那韦(saqunavir)、利托那韦、XR9576、LY335979、0C-144093、 R101933、GF120918、0NT-093、MS-209、S-9788、瑞沃辛(reversin) 205 和 121、或其任意相关衍生物。
根据本发明尤其优选的转录因子抑制剂为例如，抑制NF-κ B活化的化合物如α-硫辛酸、α _生育酹、茴脑二硫代硫酮(anetholdithiolthione, ADT)、丁基轻基苯甲醚(BHA)、千金藤碱(cepharanthine)、咖啡酸苯乙基酯(3，4_ 二轻基苯丙烯酸, CAPE)、儿茶酚衍生物、二乙基二硫氨基甲酸酯(DDC)、去铁胺(dif eroxamine)、二氢硫辛酸、戒酒硫(disulfram)、二甲基二硫代氨基甲酸酯(DMDTC)、姜黄素(二阿魏酰基甲烧diferuloylmethane)、EPC-Kl (维生素E和维生素C的磷酸二脂化合物)、表焙儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG:绿茶多酚)、乙二醇四乙酸(EGTA)、谷胱甘肽、L-半胱氨酸、拉西地平、褪黑素(melatonin)、N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)、降二氢愈疮酸(NDGA)、邻二氮杂菲、卩比咯啉二硫代氨基甲酸酯(pyrrolinedithiocarbamate, PDTC)、橡黄素、替泊沙林(tepoxaline) (5- (4-氣苯基)-N-轻基-(4-甲氧苯基)-N-甲基-IH-批唑-3-丙烧-酰胺)、维生素C、维生素E衍生物、α -琥拍酸托夫利酯(a -torphryl succinate)、 α -乙酸托夫利酯(a -torphryl acetate)、PMC(2, 2, 5，7，8_五甲基_6_轻基色原烧(2 ,2, 5, 7, 8-pentamethyl-6-hydroxychromane))、异氰酸节酉旨(benzyisocyanate)、·白藜芦醇(resveratol)、染料木黄酮(genistein)、羽扇豆醇(Iupeol)、番爺红素(Iycopene)、 佩泼克西酮(panepoxydone)、环氧醌霉素C(epoxyquinomicin C)、脱氢环氧甲基醌霉素 (dehydroxymethylepoxyquinomicin, DHMEQ)、环顶环氧菌素(cycloepoxydon)、木霉素 (gliotoxin),以及1-κ B-α磷酸化和/或降解抑制剂例如PS-1, 145、阿斯匹林、水杨酸、 BAY-11-7082 (E3 [ (4-甲苯基)-磺酰]-2-丙烯腈)、BAY-11-7085 (E3 [ (4-叔丁苯基)-磺酰]-2-丙烯腈)、环顶环氧菌素；1_羟基-2-羟甲基-3-五-I-烯基苯(l-hydroxy-2-h ydroxymethyl-3-pent-l-enyIbenzene)、布洛芬、前列腺素Al、血根碱(假白屈菜季铵碱, 13-甲基-[I，3]-苯并二氧并-[5, 6-c]-I, 3- 二氧并-4，5菲唳鐵)、柳氮横卩比唳、苏灵大、 辣椒素(8-甲基-N-香草基-6-壬烯胺)、泻素(3-甲基-1，6，8-三羟蒽醌)、尔班斯他汀 (erbstatin—癌基因抑活药，酪氨酸激酶抑制剂)、雌激素(E2)、曲霉菌素、染料木黄酮、超强辣素(resiniferatoxin),以及NF-κ B的各种抑制剂，例如β _淀粉样蛋白质、糖皮质激素(地塞米松、强的松、甲基强的松龙)、来普霉素B(leptomycin B, LMB)、o, O’ -双肉豆蘧酰基二硫硫胺(BMT)，ADP核糖基化抑制剂例如烟酰胺、3-氨基苯甲酰胺、二环内酰胺、 三环内酰胺或四环内酰胺、1，8-萘酰亚胺(naphtalimide)衍生物、菲啶_6_酮类、3，4-二氢-5-甲基-异喹啉-I (2H)-酮、苯并噁唑-4-甲酰胺、1，6-萘啶-5 (6H)-酮、喹唑啉 [3, 4-d]吡啶_4 (3H)-酮类、1,5-二羟基异喹啉、2-甲基-喹唑啉_4[3H]-酮类、1，Ilb-二氢-[2H]苯并吡喃[4，3，2-de]异喹啉_3_酮、心房肽(ANP)、阿托伐他汀(HMG-CoA还原酶抑制剂)、钙三醇(la，25- 二羟基维生素D3)、E3330 (醌衍生物)、除莠霉素A、金丝桃蒽酮、氢醌(HQ)、KT-90 (吗啡合成衍生物)、梅奴灵(mevinolin)、5’ -甲硫腺苷(MTA)、己酮可可碱 (I- (5’ -氧己基)3, 7- 二甲黄嘌呤,PTX)、苯基-N-叔丁基硝酮(phenyl-N-tert-butylnitr one, PBN)、垂体腺苷酸环化酶-活化多肽(PACAP)、喹那普利(quinadril) (ACE抑制剂)、三氮唑核苷、分泌型白细胞蛋白酶抑制剂(SLP1)、血清素衍生物(N-(对香豆酰基)血清素)、 水飞蓟素、血管活性肠肽(VIP)、D609 (磷脂酰胆碱-磷脂酶C抑制剂)、R031-8220 (PKC抑制剂)、SB203580(p38 MAPK抑制剂)、雷公藤内酯(PG490，中药提取物)、LY294，002、美沙拉明、渥曼青霉素(wortmannin,真菌代谢物)，或CHS 828 (N-(6-对氯苯氧基)-己基)-N’-氰基-N"-4-批唳基胍)，倍半職烯内酯类如小白菊内酯(parthenoilde)、堆心菊内酯、米勒-9E-恩诺立德(miller-9E-enolid)和巴德来因 A (budleinA)。
根据本发明尤其优选的蛋白酶体和蛋白酶抑制剂为例如，肽醛:ALLnL(N_乙酰基 ~ 亮氨酰-亮氨酰-正亮氨酸(N-acety 1-leuciny 1-leuciny 1-norleucynal), MG101)、 LLM(N-乙酰基-亮氨酰-亮氨酰(IeucinylI)-甲硫氨酸)>Z-LLnV (苄氧羰基_亮氨酰_亮氨酉先 ~ 正结Jj氨酸(carbobenzoxyl-leucinyl-leucinyl-norvalinal), MGl 15)、Z-LLL (节氧羰基-亮氨酰 _ 亮氨酰 _ 亮氨酸(carbobenzoxyl-leucinyl-leucinyl-leucynal) ,MG132)、 Z-LLL-B (OH) 2 (MG-262)，硼酸衍生物例如 PS-273、PS-293、PS-296、PS-303、PS-305、PS-313、 PS-321、PS-325、PS-334、PS-341、PS-364、PS-352、PS-383、乳胞素(Iactacystine)、β -内酯、硼酸肽、泛素连结酶抑制剂脱氧精胍菌素、APNE(N-乙酰基-DL-苯丙氨酸-β -萘基酯)、ΒΤΕΕ (N-苯甲酰L-酪氨酸-乙基酯)、DCIC (3,4- 二氯异香豆素)、DFP (双异丙烷-氟磷酸酯)、TPCK (N- α -甲苯磺酰基-L-苯丙氨酸氯甲基酮)、TLCK (N- α -甲苯磺酰基-L-赖氨酸氯甲基酮)、FK506 (他克莫司)、环孢菌素Α。
根据本发明尤其优选的细胞凋亡调节剂为例如，法呢基转移酶抑制剂如R115777、 SCH66336、BMS214662、伊马替尼(Imatinib)、17-AAG，EGFR 抑制剂如 ZD1839, MEK 抑制剂如PD 032590，RAF抑制剂如ΒΑΥ43-9006、埃罗替尼(erlotinib)，PKC抑制剂如 UCN-01、PKC-412、苔藓抑素(Bryostatin)、ISIS-3521、LY333531、沙芬戈(safingol)、 CGP-41251 (米哚妥林)、氯尼达明、凋亡蛋白、存活素、纳巴霉素、CCI-779、RAD001 (依维莫司)、PXD101，酪氨酸激酶抑制剂如易瑞沙(Iressa)、0SI-774、STI-571，有丝分裂原活化蛋白激酶途径中的酶抑制剂如Η)-098059、U-0126。
尤其优选的组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂为辛二酰-3-氨基吡啶酰胺氧肟酸、 M344、NVP-LAQ824、SB939、曲古抑菌素 A、伏立诺他(vorinostat，SAHA)、BML-210、环四肽 (例如托普辛(trapoxin)B)和缩酹酸肽(depsipeptide),苯酰胺如恩替诺特(entinostat) (MS-275)、CI994、莫赛替诺司他(mocetinostat，MGCD0103)、亲电子酮类和脂族酸化合物如丁酸苯酯和丙戍酸，AN-9、丁酸苯酯和丙戍酸、贝利诺司他(belinostat,PXD101)、阿佩西丁(apicidin)、LAQ824,和帕比司他(panobinostat, LBH589);和罗咪酯月太(Romidepsin) (Istodax、FK228、FR901228)、PCI-24781、瑞米诺司他(Resminostat) (4SC-201)、维诺司他(Givinostat, ITF2357)、AR-42、CUDC-IOU 萝卜硫素(sulforaphane)，PCI-24781 和 PCI-34051,多克西诺司他(Droxinostat), R306465 (JNJ-26481585), MC1568，和 N-羟基-N’ -3-吡啶基辛二酰胺(Pyroxamide，NSC696085)。
根据本发明尤其优选的细胞周期调节剂为例如夫拉平度(flavopiridol)、苔藓虫素(bryostain-1)、若斯克维汀(roscovitine 剂)、BMS_387032、哌立福辛(perifosine)或洛伐他汀(Iovastatin)。
根据本发明尤其优选的酶抑制剂为例如，Y-谷氨酰胱氨酸合成酶如丁硫氨酸 (buthione)、亚讽亚胺(sulfoximine)。
根据本发明尤其优选的血管生成抑制剂为例如萨立多胺、内皮他汀、西乐德(celecoxib)、ABT-510、考布他汀A4 (combrestatin A4)、达肝素、二甲咕吨丽乙酸 (dimethy lxanthenone acetic acid)、来那度胺(Ienalidomide)、LY317615 (恩泽司他辛(enzastaurin))、PPI-2458、ADH-1 (埃克斯海辛(exherin))、AG-013736, AMG-706、 AZD2171、Bay43-9006(索拉非尼(sorafenib))、BMS-582664、CHIR-265、GW786034 (帕唑帕尼(pazopanib))、PI-88、PTK787/ZK 222584(瓦他拉尼(vatalanib))、RADOOl (依维莫司)、SUl 1248 (舒尼替尼(sunitinib))、苏拉明(suramin)、XL184、ZD6474、ATN-161 或 EMD121974(赛伦尼太(cilenigtide))。
根据本发明尤其优选的激素或激素衍生物为例如氨鲁米特(aminogluthemid)、 布舍瑞林(buserilin)、醋酸环丙孕酮(cyproteronacetate)、屈洛昔芬(droloxifen)、 乙炔雌二醇、氟他胺(flutamid)、福美司坦(formesta)、磷雌酹(fosfestrol)、己酸孕诺酮(gestonoroncaproate)、戈舍瑞林(goserilin)、亮丙瑞林(Ieuprolein)、炔雌烯醇、美屈孕酮(medrogestone)、安宫黄体酮(medroxyprogesteronacetate)、醋酸甲地孕酮(megestroIactetate)、奥曲月太(octreotid)、三苯氧胺(tamoxifen)、托瑞米芬 (toremifin)、曲谱瑞林(triptorelin)、阿那曲唑(anastrazole)、依西美坦(exemestane) 或来曲唑(Ietrozone)。
为了制备本发明组合物的蛋白质结合前药，将第二药物通过酸敏感性键和/或水解可裂解键和/或酶解可裂解键结合到连接子。与第二药物的适当官能团(其为ho-、nh2-、 hooc-、ho3s-或羰基)进行该衍生化。如果第二药物不包含适当的官能团，则通过化学修饰将其导入，即，上述药物另外地包括具有HO-、NH2-、H00C-、HO3S-和/或羰基的所有衍生物。
在本发明组合物特别优选的实施方案中，第一药物和包含于前药的第二药物相同。在本发明组合物特别优选的实施方案中，第一药物和包含于前药的第二药物均为阿霉素。在本发明组合物甚至更加优选的实施方案中，前药为D0X0-EMCH，其为阿霉素的6-马来酰亚胺己酰基(maleimidocaproyl)(腙)衍生物。在本发明组合物另外的优选实施方案中，第一药物和包含于前药的第二药物不同。
本发明另外的方面涉及用于同时或相继(sequential)施用的至少一种第一药物和至少一种蛋白质结合前药的结合体，其中所述蛋白质结合前药包含蛋白质结合基团、第二药物和可水解裂解、酶解裂解或以pH依赖的方式裂解的连接子。
本发明的结合体中，至少一种第一药物和包含于蛋白质结合前药中的第二药物彼此相同或不同。
此处，术语“结合体”不特别限定，例如涉及当以结合方式使用时显示协同效应的两种以上的化合物的结合体，或所述化合物的混合物。本发明的结合体可例如由以可分离或不可分离的方式存在并且当一起作用时显示改善的效果的两种不同化合物或化合物的混合物来表示。例如，本发明的结合体可包含当与各单一药物单独使用相比时，结合使用时显示改善的药学效果的两种以上的药物。
根据具体实施方案，本发明的结合体包含在单独容器中存在的，例如当一起使用时产生显著协同效应的两种以上的化合物或所述化合物的混合物。
此处，术语“同时施用”不特别限定，并且指蛋白质结合前药和至少一种第一药物例如作为混合物基本上同时施用。
另外，此处使用的术语“相继施用”不特别限定，并且指蛋白质结合前药和至少一种第一药物不同时施用，而相反首先施用两者之一，并在特定时间间隔后施用另一种。
在另外的实施方案中，本发明涉及上述结合体，其中在相继施用中，在至少一种第一药物前后施用蛋白质结合前药，蛋白质结合前药和至少一种第一药物的施用之间的时间间隔在2分钟至48小时范围内。
通常，根据本发明，蛋白质结合药物和至少一种第一药物的施用之间的时间间隔可以在几分钟至几小时的范围内，例如,在20分钟至36小时、30分钟至24小时、或I至12 小时的范围内。另外的实例包括在24至48小时、12至36小时、8至24小时和6至12小时范围内的时间间隔。然而，优选的间隔为2、5、10、15、20、30和45分钟，和1、2、3、4、6、8、10、12、16、18、20、24、28、30、32、36、40、44 和 48 小时。
根据另外的实施方案，在本发明的结合体中，第一药物和/或第二药物、蛋白质结合基团和可裂解连接子与上述 的定义相同。特别地，如果不另外提及，则全部定义例如，关于上述组合物的构成或性质的定义也适应于本发明的结合体。
第一药物和包含于本发明组合物或结合体的蛋白质结合前药中的第二药物的摩尔比不特另Ij限定。例如，第一药物和第二药物的摩尔比在1:500至500:1，或1:100 M 100:1 的范围内。根据另外的实例，所述摩尔比在1:50至50:1，或1:20至20:1的范围内。然而， 摩尔比还可在1:5至5:1，或可在1:1的范围内。
本发明另外涉及试剂盒，其包含上述组合物或结合体，和任选的药物学可接受载体和/或药物学可接受佐剂和/或稀释剂。在本发明的试剂盒中，蛋白质结合前药和至少一种第一药物可作为混合物，例如以上述组合物的形式存在，以便同时施用，或可以单独的容器，例如以上述结合体的形式存在，以便相继施用。
在另外的方面，本发明涉及药物组合物，所述药物组合物包含本发明的组合物，和任选的药物学可接受载体和/或药物学可接受佐剂和/或稀释剂。
本发明的试剂盒或药物组合物可例如包含溶剂和稀释剂如氯化钠溶液或含有任何药物学可接受的缓冲剂的溶液。另外，本发明的药物组合物可以是适于施用到患者的任何形式，例如可注射形式、作为片剂或胶囊、或者作为吸入组合物。
根据本发明另外的实施方案，上述试剂盒或药物组合物用于治疗选自由癌症、自身免疫病、急性或慢性炎性疾病或由病毒和/或微生物(microorganisms)引起的疾病组成的组中的疾病。
在另外的方面中，本发明涉及本发明的组合物在制备用于治疗患有选自由癌症、 自身免疫病、急性或慢性炎性疾病或由病毒和/或微生物引起的疾病组成的组中的疾病的患者的医药品中的用途。
本发明的另外方面，涉及上述组合物、结合体、试剂盒或药物组合物在治疗选自由癌症、自身免疫病、急性或慢性炎性疾病或由病毒和/或微生物引起的疾病组成的组中的疾病中的用途。
在另外的方面，本发明涉及用于治疗患有紊乱或疾病例如癌症、自身免疫病、急性或慢性炎性疾病、或由病毒和/或微生物引起的疾病的患者的方法，其包括施用上述组合物、结合体或药物组合物的步骤。


图I :阿霉素㈧和作为阿霉素的6-马来酰亚胺己酰基(腙)衍生物的前药 doxo-emch(b)的化学结构。
图2 :描述在用阿霉素、D0X0-EMCH和阿霉素与D0X0-EMCH的结合体治疗下皮下生长A2780异种移植物(xenografts)的肿瘤生长抑制的曲线。
图3 :描述在用阿霉素、D0X0-EMCH和阿霉素与D0X0-EMCH结合体治疗下具有皮下生长A2780异种移植物的小鼠的体重变化(BWC，&9U+)的曲线。
本发明的组合物与单独的或者第一药物或者蛋白质结合前药相比，令人惊讶和有利地产生改善的功效和活体内耐受性。因此，通过将蛋白质结合前药与相同或不同类型的游离药物结合(combining)可以有利地有效治疗许多种疾病，由此超越单独前药和游离药物的性质可改善所述药物的有利性质。
本发明现将在以下实施例中进一步说明，而不受其限制。如上述所概括的，可实现根据本发明的许多另外的组合。

实施例
实施例阿霉素与前药D0X0-EMCH的结合体的抗肿瘤功效
在卵巢癌A2780异种移植物模型中评价临床规定的阿霉素(图1A)、阿霉素的 6-马来酰亚胺己酰基(腙)衍生物(D0X0-EMCH ;图1B)，和阿霉素与D0X0-EMCH的结合体的抗肿瘤功效。D0X0-EMCH为快速结合到体液白蛋白的半胱氨酸-34位置的阿霉素的白蛋白结合前药，并由于增强的渗透和滞留效应(EPR效应)而被实体肿瘤所吸收。在肿瘤吸收后，D0X0-EMCH在肿瘤组织或者细胞外或者细胞内的酸性环境中被裂解。
D0X0-EMCH在裸鼠中具有3 X 24mg/kg体重阿霉素当量的最大耐受剂量(MTD)，并且在相对于许多异种移植物和原位肿瘤模型(orthotopic tumor model)中的游离阿霉素已显示出优异的功效。阿霉素在裸鼠模型中的MTD为2X8mg/kg体重，较高的剂量，例如 2X12mg/kg体重导致不可接受的毒性和死亡。
为了在荷瘤小鼠中评价阿霉素与D0X0-EMCH的结合体的活体内抗肿瘤功效，与用阿霉素(2X8mg/kg体重)或D0X0-EMCH(3X24mg/kg体重阿霉素当量)以其各自的MTD治疗的组进行直接比较。对于结合体，较低剂量的阿霉素(3X4mg/kg体重)与较低剂量的 D0X0-EMCH(3 X 12mg/kg体重阿霉素当量)结合，其中D0X0-EMCH在施用相应天阿霉素之前 6小时施用(参见，表I)。在卵巢癌A2780异种移植物模型中该实验的结果显示于表I及图2和3。
关于抗肿瘤功效，阿霉素直到第30天在其2 X 8mg/kg体重的最佳剂量下仅显示有限的抗肿瘤功效，之后该组的小鼠由于不可接受的高肿瘤负荷而毫无疑问地被杀死。相反， 用D0X0-EMCH在3X24mg/kg体重下治疗产生显著的抗肿瘤效果，其对阿霉素治疗组为统计学显著，肿瘤缓解达到37天(参见，图2)，之后该组中的一些动物由于超过30%的相当大的体重损失而死亡或被杀死(参见，图3)。相反，用D0X0-EMCH(3 X 12mg/kg体重阿霉素当量)和阿霉素(3X4mg/kg体重)的结合体治疗的组产生优异的抗肿瘤效果，其对阿霉素治疗组统计学显著，稳定的肿瘤缓解多于40天(参见，图3)。另外，与阿霉素或D0X0-EMCH治疗的动物相比，清楚地观察到显著小的体重变化(BWC)(在实验结束时约12%)，表明耐受性更好(参见，图3)。
因此，相对于用阿霉素或D0X0-EMCH单独的治疗，用D0X0-EMCH与阿霉素的结合治疗在抗肿瘤功效和耐受性方面具有显著的优点。
表I.阿霉素、D0X0-EMCH以及D0X0-EMCH与阿霉素的结合体针对人卵巢癌异种移植物(A2780)的剂量、致死、相对肿瘤体积、体重变化的比较。


本发明涉及包含至少一种第一药物和至少一种蛋白质结合前药的组合物和结合体，其中所述蛋白质结合前药包含蛋白质结合基团、第二药物和可在体内水解裂解、酶解裂解或以pH依赖的方式裂解的连接子，还涉及包含所述组合物或结合体的试剂盒和药物组合物。