肽基核苷类杂合抗生素NikkoxinE和NikkoxinF及其制备方法

陈文青, 祁建钊, 邓子新, 刘进

2015年4月8日

2015年1月22日

2015年1月22日

武汉大学

C12R1/465GK104497104SQ201510033114

肽基 Nikkox 杂合 核苷 抗生素

1. 两种肽基核苷类杂合抗生素的Nikkoxin E和Nikkoxin F，其结构如下所示2.权利要求1所述肽基核苷类杂合抗生素NikkoxinE和NikkoxinF的制备方法，包 括以下步骤 1) 重组菌株LSY4的构建 将质粒PJTU5701/AnikOAnikQ通过接合转移导入多氧霉素工业菌株的polOP和polF基因突变株Li3,通过apramycin抗性筛选和PCR验证，得到重组菌株LSY4 ;所述质粒 PJTU5701/AnikOAnikQ是以同框缺失方式将尼克霉素的核苷骨架的生物合成关键基因 nikO和4-甲酰-4-咪唑-2-酮生物合成关键基因nikQ都敲除得到的，所述突变株Li3是 以同源重组的方式在多氧霉素工业菌株中氨甲酰多聚草氨酸生物合成关键基因polOP和 聚肟酸生物合成关键基因PolF中插入硫连丝菌素抗性基因而得到的双突变菌株； 2)重组菌株LSY4发酵和肽基核苷类杂合抗生素NikkoxinE和NikkoxinF提取和纯 化 重组菌株LSY4直接进行发酵培养，用草酸将发酵液的pH值调节至3. 0,离心过滤后 将滤液用阳离子交换树脂吸附Dowex50Wx8H+，用0.IM氨水洗脱，选择性收集组分并旋转 蒸发浓缩；用分析型HPLC进行检测，再经制备型HPLC获得杂合抗生素纯品NikkoxinE和 NikkoxinF03.权利要求1所述肽基核苷类杂合抗生素NikkoxinE和NikkoxinF的制备方法，包 括以下步骤 1)重组菌株LSY4的构建 将质粒PJTU5701/AnikO AnikQ通过接合转移导入多氧霉素工业菌株的polOP和 polF基因突变株Li3,通过apramycin抗性筛选和PCR验证，得到重组菌株LSY4 ;所述质粒 PJTU5701/AnikO A nikQ是以同框缺失方式将尼克霉素的核苷骨架的生物合成关键基因 nikO和4-甲酰-4-咪唑-2-酮生物合成关键基因nikQ都敲除得到的，所述突变株Li3是 以同源重组的方式在多氧霉素工业菌株中氨甲酰多聚草氨酸生物合成关键基因polOP和 聚肟酸生物合成关键基因PolF中依次插入硫连丝菌素抗性基因而得到的双突变菌株； 2) 高产菌株QL4的构建 将nikS通过NdeI和EcoRI酶切位点克隆到载体pJTU968上，再通过MfeI和EcoRI进 行双酶切获得含有红霉素启动子的nikS片段，然后再将该片段通过EcoRI酶切位点载体 PPM927上获得质粒pPM927/nikS，以接合转移方式将质粒pPM927/nikS转入重组菌株LSY4， 通过streptomycin抗性筛选和PCR验证，得到高产菌株QL4 ; 3) 高产菌株QL4发酵和肽基核苷类杂合抗生素Nikkoxin E和Nikkoxin F提取和纯化 高产菌株QL4直接进行发酵培养，用草酸将发酵液的pH值调节至3. 0,离心过滤后将 滤液用阳离子交换树脂吸附Dowex 50Wx8H+，用0. IM氨水洗脱，选择性收集组分并旋转蒸 发浓缩；用分析型HPLC进行检测，再经制备型HPLC获得杂合抗生素纯品Nikkoxin E和 Nikkoxin F04.权利要求1所述的肽基核苷类杂合抗生素Nikkoxin E和Nikkoxin F在制备抗真菌 药物中的应用

[0001] 本发明涉及肽基核苷类杂合抗生素 Nikkoxin E和Nikkoxin F及其制备方法,属 于生物医药领域

本发明涉及肽基核苷类杂合抗生素Nikkoxin E和 Nikkoxin F及其制备方法，属于生物医药领域。本发明通过将尼可霉素的生物合成基因簇进行突变后导入到多氧霉素工业菌株中进行异源表达。经过质谱和核磁共振检测，确定产生了两种氧霉素与尼可霉素杂合的核苷类抗生素。这两种杂合抗生素对人类或植物病原真菌具有更加显著的抗菌活性。

肽基核苷类杂合抗生素 Nikkoxin E和Nikkoxin F及其制 备方法