专利名称:艾滋病毒原位核酸芯片的制作方法图1是本实用新型的一种艾滋病毒原位核酸芯片的结构示意图。图1中,1为基片,2为微电极,3为电极引线,4为传感器两电极间基片区域,探针在图1中未示出。2)在基片上用微电子技术制作微型电极阵列(1)在基片1上蒸镀或溅射电极金属材料,如金、或银、或铂、或镍铬合金,制出厚100nm-5000nm的金属薄膜。(2)采用光刻法制出电极图形,再采用反应离子腐蚀法,按电极图形腐蚀制出微电极2的阵列及其引线。在基片上平行对齐地装了两排,每排由6个传感器组成的阵列,每一微电极长0.2-2mm、宽0.2-2mm,每一传感器的两个微型电极的空间距离为0.2-2mm,引线宽约0.1-1mm,在12个传感器的两微型电极间的基片上分别固化有12中不同的艾滋病毒核酸探针。3)在传感器表面固定探针本发明的艾滋病毒核酸探针根据HIV特征基因片段设计,共设计了34种,如前表1所示。可全部选用,也可根据需要选用其中的几种,如在图1所示的芯片上可选用表1中1-12号探针。探针固定在传感器的一对电极上,也可固定在传感器电极间基片区域上。当探针固定在金、氧化铌、氧化铱、铂、钛、钽、钨及其它金属表面时,这些金属表面能通过与探针上的有机巯基连接形成稳定的偶合物。如一5’或3’端标记上巯基的合成DNA探针可与金等金属形成稳定的偶合物。当探针固定在用作基片的玻璃表面时,可通过与环氧硅烷反应使其环氧基功能化,在玻璃上的环氧基与5’-氨基-衍生寡核苷酸探针反应,形成一仲胺共价联接,而将探针联接到玻璃的表面。如5’醛或羧酸、氨基和磷酸的衍生物可分别与酰肼、重氮化活化以及氮基修饰的聚苯乙烯结合。探针的固定可在合成各种探针后,采用微量移液管或微喷头或针头将各种探针逐点分布在基片表面各相应的位点上。
使用本发明的艾滋病毒核酸原位芯片,对艾滋病毒核酸进行检测的传感检测可用成熟的各种电学或电磁学方法,以下对其中的交流电导法作一介绍交流电导GAC=εA/d,式中,A为电极的有效面积、d为电极间的有效距离,两者之比对所用芯片而言为一常数;而ε为介电常数,取决于电极表面以及其间介质的性质和状态。在检测过程中,GAC将随着传感器上是否存在核酸杂交、核酸杂交的量的变化而变化。因此可通过测量芯片上传感器的交流电导,对探针与靶核酸的反应进行原位实时检测,从而判断是否存在某种艾滋病毒,并可测定出该艾滋病毒核酸的量。
艾滋病毒原位核酸芯片制作方法
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