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醛缩酶、编码它们的核酸及制备和使用它们的方法

  • 专利名称
    醛缩酶、编码它们的核酸及制备和使用它们的方法
  • 发明者
    D·P·维那, E·伯克, L·赵, P·M·希克斯, P·卢京比尔, T·理查德森
  • 公开日
    2012年9月26日
  • 申请日期
    2007年3月7日
  • 优先权日
    2006年3月7日
  • 申请人
    维莱尼姆公司
  • 文档编号
    C12N15/63GK102690833SQ201210175110
  • 关键字
  • 权利要求
    1.分离的,合成的或重组的核酸,其编码具有醛缩酶活性的多肽,所述核酸为(a)SEQ ID NO K SEQ ID N03、SEQ ID N05、SEQ ID NOSEQ ID NO9、SEQ IDN011、SEQ ID N013、SEQ ID N015、SEQ ID N017、SEQ ID N019、SEQ ID N021、SEQ IDNO23^SEQ ID NO25^SEQ ID NO27^SEQ ID NO29^SEQ ID N031、SEQ ID NO33^SEQ IDNO35^SEQ ID NO37^SEQ ID NO39^SEQ ID N041、SEQ ID NO43^SEQ ID NO45^SEQ IDNO47^SEQ ID NO49^SEQ ID N051、SEQ ID NO53^SEQ ID NO55^SEQ ID NO57^SEQ IDNO59^SEQ ID N061、SEQ ID NO63^SEQ ID NO65^SEQ ID NO67^SEQ ID NO69^SEQ IDN071、SEQ ID N073、SEQ ID N075、SEQ ID N077、SEQ ID N079、SEQ ID N081、SEQID NO83^SEQ ID NO85^SEQ ID NO87^SEQ ID NO89^SEQ ID N091、SEQ ID NO93^SEQID NO95^SEQ ID NO97^SEQ ID NO99^SEQ ID NO101、SEQ ID N0103、SEQ ID NO105、SEQ ID NO 107、SEQ IDN0109、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 115、SEQ IDNO 117、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 125、SEQ IDNO127、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 133、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 137、SEQ IDNO139、SEQ ID NO141、SEQ ID NO143、SEQ IDNO145、SEQ ID NO147、SEQ ID NO149、SEQ ID NO 151、SEQ ID NO 153、SEQ ID NO 155、SEQ ID NO 157、SEQ ID NO 159、SEQ IDNO161、SEQ IDNO163、SEQ ID NO165、SEQ ID NO167、SEQ ID NO169、SEQ ID NO171、SEQ ID NO 173、SEQ ID NO 175、SEQ ID NO 177、SEQ ID NO 179、SEQ IDNO181、SEQ IDNO183、SEQ ID NO185^SEQ ID NO187、SEQ ID NO189^SEQ ID NO191、SEQ ID NO193、SEQ ID NO 195、SEQ ID NO 197、SEQ IDNO199、SEQ ID N0201、SEQ ID N0203、SEQ IDNO205^SEQ ID NO207^SEQ ID NO209^SEQ ID NO211、SEQ ID NO213、SEQ ID NO215、SEQ IDNO217、SEQ ID NO219、SEQ ID NO221、SEQ ID NO223、SEQ ID NO225、SEQ IDNO227^SEQ ID NO229、SEQ ID NO231、SEQ ID NO233、SEQ IDNO235、SEQ ID NO237、SEQ ID NO239^SEQ ID NO241、SEQ ID NO243^SEQ ID NO245、SEQ ID NO247^SEQ IDNO249^SEQ ID NO251、SEQ IDNO253、SEQ ID NO255^SEQ ID NO257^SEQ ID NO259^SEQID NO261、SEQ ID NO263、SEQ ID NO265、SEQ ID NO267^SEQ ID NO269^SEQ IDNO27USEQ ID NO273^SEQ ID N0277、SEQ ID NO279^SEQ ID N0281、SEQ ID NO283^SEQ IDNO285^SEQ ID N0287、SEQ ID NO289^SEQ IDNO29U SEQ ID NO293^SEQ ID N0295、SEQ ID NO297、SEQ ID NO299、SEQ ID NO301、SEQ ID NO303、SEQ ID NO305、SEQ IDNO307^SEQ IDNO309^ SEQ ID N0311、SEQ ID N0313、SEQ ID N0315、SEQ ID N0317、SEQ ID N0319、SEQ ID N0321、SEQ ID N0323、SEQ ID N0325、SEQ IDN0327、SEQ IDNO329^SEQ ID N0331、SEQ ID NO333^SEQ ID N0335、SEQ ID NO336^SEQ ID NO337或 SEQ ID NO 338 ;(b)编码SEQ ID N02、SEQ ID N04、SEQ ID N06、SEQ ID N08、SEQ IDN010、SEQID NO12、SEQ ID NO14、SEQ ID NO16、SEQ ID NO18、SEQ IDN020、SEQ ID NO22、SEQID NO24、SEQ ID NO26、SEQ ID NO28、SEQ IDN030、SEQ ID NO32、SEQ ID NO34、SEQID NO36^SEQ ID NO38^SEQ IDNO40^SEQ ID NO42^SEQ ID NO44^SEQ ID NO46^SEQID NO48^SEQ IDN050、SEQ ID NO52^SEQ ID NO54^SEQ ID NO56^SEQ ID NO58^SEQIDNO60^SEQ ID N062、SEQ ID NO64^SEQ ID NO66^SEQ ID NO68^SEQ IDNO70^SEQ IDNO72^SEQ ID NO74^SEQ ID NO76^SEQ ID NO78^SEQ IDNO80^SEQ ID NO82^SEQ IDNO84、SEQ ID NO86、SEQ ID NO88、SEQ IDNO90,SEQ ID NO92、SEQ ID NO94、SEQ IDNO96、SEQ ID NO98、SEQ IDNO100,SEQ ID NO102、SEQ ID NO104、SEQ ID NO106、SEQID NO108,SEQ ID NO110,SEQ ID NO112,SEQ ID NOI14,SEQ ID NO116,SEQ IDN0118、SEQ ID NO120、SEQ ID NO122、SEQ ID NO124、SEQ ID NO126、SEQ ID NO128、SEQ IDNO130、SEQ ID NO132、SEQ ID NO134、SEQ IDNO136, SEQ ID NO138、SEQ ID NO140、SEQ ID NO142、SEQ ID NO144、SEQ ID NO146、SEQ ID NO148、SEQ ID NO150、SEQ IDNO152、SEQ IDNO154, SEQ ID NO156、SEQ ID NO158、SEQ ID NO160、SEQ ID NO162、SEQ ID NO 164、SEQ ID NO 166、SEQ ID NO 168、SEQ ID NO 170、SEQ IDN0172、SEQ IDNO174、SEQ ID NO176、SEQ ID NO178、SEQ ID NO180、SEQ ID NO182、SEQ ID NO184、SEQ ID NO 186、SEQ ID NO 188、SEQ IDN0190、SEQ ID NO 192、SEQ ID NO 194、SEQ ID NO196、SEQ ID NO198、SEQ ID NO200、SEQ ID NO202、SEQ ID NO204、SEQ ID NO206、SEQ IDNO208, SEQ ID NO210、SEQ ID NO212、SEQ ID NO214、SEQ ID NO216、SEQ IDNO218、SEQ ID NO220、SEQ ID NO222、SEQ ID NO224、SEQ IDNO226,SEQ ID NO228、SEQ ID NO230、SEQ ID NO232、SEQ ID NO234、SEQ ID NO236、SEQ ID NO238、SEQ IDNO240、SEQ ID NO242、SEQ IDNO244、SEQ ID NO246、SEQ ID NO248、SEQ ID NO250、SEQID NO252,SEQ ID NO254,SEQ ID NO256,SEQ ID NO258,SEQ ID NO260,SEQ IDNO262,SEQ ID NO264、SEQ ID NO266、SEQ ID NO268、SEQ ID NO270、SEQ ID NO272、SEQ IDNO274、SEQ ID NO278、SEQ ID NO280、SEQ IDNO282,SEQ ID NO284、SEQ ID NO286、SEQ ID NO288、SEQ ID NO290、SEQ ID NO292、SEQ ID NO294、SEQ ID NO296、SEQ IDNO298、SEQ IDNO300,SEQ ID NO302、SEQ ID NO304、SEQ ID NO306、SEQ ID NO308、SEQ ID NO310、SEQ ID NO312、SEQ ID NO314、SEQ ID NO316、SEQ IDNO318, SEQ IDNO320、SEQ ID NO322、SEQ ID NO324、SEQ ID NO326、SEQ ID NO328、SEQ ID NO330、SEQ ID NO332 或 SEQ ID NO334 的序列的核酸; (c)与(a)或(b)互补的核酸序列2.权利要求I所述的核酸,其中所述醛缩酶活性是丙酮酸醛缩酶活性3.权利要求I所述的核酸,其中所述醛缩酶活性是HMG醛缩酶活性4.权利要求I所述的核酸,其中所述醛缩酶活性是KHG醛缩酶活性5.表达盒,其包括权利要求I中所述的序列6.权利要求5所述的表达盒,其中所述表达盒是载体7.权利要求6所述的表达盒,其中所述载体是克隆载体8.权利要求7所述的表达盒,其中所述克隆载体是病毒载体、质粒或人工染色体9.权利要求8所述的表达盒,其中所述病毒载体是噬菌体10.权利要求9所述的表达盒,其中所述噬菌体是噬菌粒或细菌噬菌体11.权利要求8所述的表达盒,其中所述质粒是粘粒12.权利要求11所述的表达盒,其中所述粘粒是F粘粒13.权利要求8所述的表达盒,其中所述病毒载体选自腺病毒载体或反转录病毒载体,或所述人工染色体包括细菌人工染色体、细菌噬菌体Pl-衍生的载体或哺乳动物人工染色体14.转化的细胞,其包括权利要求I中所述的序列,或包括权利要求5-7中任一项所述的表达盒,其中所述细胞选自细菌细胞、哺乳动物细胞、真菌细胞、昆虫细胞或植物细胞15.分离的、合成的或重组的多肽,其具有醛缩酶活性,所述多肽为下列氨基酸序列中所述的多肽(a)氨基酸序列SEQ ID NO 2,SEQ ID NO4,SEQ ID N06、SEQ ID NO8,SEQ ID NO 10、SEQ ID NO12,SEQ ID NO14,SEQ ID NO16,SEQ ID NO18,SEQ ID NO20,SEQ ID NO22、SEQ ID NO24,SEQ ID NO26,SEQ ID NO28,SEQ ID NO30,SEQ ID NO32,SEQ ID NO34、SEQ ID NO36,SEQ ID NO38,SEQ ID NO40,SEQ ID NO42,SEQ ID NO44,SEQ ID NO46,SEQ ID NO48,SEQ ID NO50,SEQ ID NO52,SEQ ID NO54,SEQ ID NO56,SEQ ID NO58、SEQ ID NO60,SEQ ID NO62,SEQ ID NO64,SEQ ID NO66,SEQ ID NO68,SEQ ID NO70,SEQ ID NO72,SEQ ID NO74,SEQ ID NO76,SEQ ID NO78,SEQ ID NO80,SEQ ID NO82、SEQ ID NO84,SEQ ID NO86,SEQ ID NO88,SEQ ID NO90,SEQ ID NO92,SEQ ID NO94,SEQ ID NO96、SEQ ID NO98、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 104、SEQ IDNO106、SEQ IDNO108, SEQ ID NO110、SEQ ID NO112、SEQ ID NO114、SEQ ID NO116、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 124、SEQ IDNO126, SEQ IDNO128、SEQ ID NO130、SEQ ID NO132、SEQ ID NO134、SEQ ID NO136、SEQ ID NO138、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 142、SEQ IDNO144, SEQ ID NO 146、SEQ ID NO 148、SEQ IDNO150、SEQ ID NO152、SEQ ID NO154、SEQ ID NO156、SEQ ID NO158、SEQ ID NO160、SEQ IDN0162、SEQ ID NO 164、SEQ ID NO 166、SEQ ID NO 168、SEQ ID NO 170、SEQ IDNO172、SEQ ID NO174、SEQ ID NO176、SEQ ID NO178、SEQ IDN0180、SEQ ID NO182、SEQ ID NO184、SEQ ID NO186、SEQ ID NO188、SEQ ID NO190、SEQ ID NO192、SEQ IDNO194,SEQ ID NO196,SEQ IDNO198,SEQ ID NO200,SEQ ID NO202,SEQ ID NO204,SEQID NO206,SEQ ID NO208,SEQ ID NO210,SEQ ID N0212、SEQ ID N0214、SEQ IDN0216、SEQ ID NO218、SEQ ID NO220、SEQ ID NO222、SEQ ID NO224、SEQ ID NO226、SEQ IDNO228、SEQ ID NO230、SEQ ID NO232、SEQ IDNO234, SEQ ID NO236、SEQ ID NO238、SEQ ID NO240、SEQ ID NO242、SEQ ID NO244、SEQ ID NO246、SEQ ID NO248、SEQ IDNO250、SEQ IDNO252, SEQ ID NO254、SEQ ID NO256、SEQ ID NO258、SEQ ID NO260、SEQ ID NO262、SEQ ID NO264、SEQ ID NO266、SEQ ID NO268、SEQ IDNO270, SEQ IDNO272、SEQ ID NO274、SEQ ID NO278、SEQ ID NO280、SEQ ID NO282、SEQ ID NO284、SEQ ID NO286、SEQ ID NO288、SEQ IDNO290, SEQ ID NO292、SEQ ID NO294、SEQ IDNO296、SEQ ID NO298、SEQ ID NO300、SEQ ID NO302、SEQ ID NO304、SEQ ID NO306、SEQ IDNO308, SEQ ID NO310、SEQ ID NO312、SEQ ID NO314、SEQ ID NO316、SEQ IDNO318、SEQ ID NO320、SEQ ID NO322、SEQ ID NO324、SEQ IDNO326,SEQ ID NO328、SEQ ID NO 330、SEQ ID NO332 和/或 SEQ ID NO334 ; (b)由权利要求I所述核酸编码的氨基酸序列16.权利要求15所述的分离的、合成的或重组的多肽,其中所述醛缩酶活性包括丙酮酸醛缩酶活性17.权利要求15所述的分离的、合成的或重组的多肽,其中所述醛缩酶活性包括HMG醛缩酶活性18.权利要求15所述的分离的、合成的或重组的多肽,其中所述醛缩酶活性包括KHG醛缩酶活性19.包含权利要求15中所述多肽的蛋白制剂,其中所述蛋白制剂是液体、固体或凝胶20.制备转基因植物的方法,包括 (a)向所述细胞中引入权利要求I的异源核酸序列,由此产生转化的植物细胞; (b)从所述转化的细胞产生转基因植物, 其中任选地,步骤(a)进ー步包括通过植物细胞原生质体的电穿孔或显微注射导入所述异源核酸序列, 并且任选地,步骤(a)包括通过DNA微粒轰击或通过使用根瘤农杆菌宿主将所述异源核酸序列直接导入植物组织中21.在植物细胞中表达异源核酸序列的方法,包括 (a)用可操作地连接到启动子的权利要求I中所述的异源核酸序列转化所述植物细胞; (b)在所述植物细胞表达所述异源核酸序列的条件下培养所述植物22.在组合物中切割碳-碳键的方法,包括以下步骤 (a)提供权利要求15到18中任一项所述具有醛缩酶活性的多肽,或由权利要求I到4中任一项所述核酸编码的多肽; (b)提供包含碳-碳键的组合物;和 (C)在所述醛缩酶切割所述组合物中所述碳-碳键的条件下,使步骤(a)所述的多肽与步骤(b)所述的组合物接触, 其中任选地,所述多肽具有丙酮酸醛缩酶、HMG醛缩酶和/或KHG醛缩酶活性23.形成碳-碳键的方法,包括以下步骤 (a)提供权利要求15到18中任一项所述具有醛缩酶活性的多肽,或由权利要求I到4中任一项所述核酸编码的多肽; (b)提供供体和受体化合物;和 (C)在所述醛缩酶形成所述碳-碳键的条件下,使步骤(a)所述的多肽与步骤(b)所述的化合物接触, 其中任选地,所述多肽具有丙酮酸醛缩酶、HMG醛缩酶和/或KHG醛缩酶活性24.面团或面包产物,其包含权利要求15到18中任一项所述的多肽,或由权利要求I到4中任一项所述核酸编码的多肽,其中任选地,所述多肽具有醛缩酶,如丙酮酸醛缩酶,如HMG和/或KHG醛缩酶活性25.面团处理的方法,包括在足以处理所述面团的条件下,使面团或面包产物与权利要求15到18中任一项所述的至少ー种多肽,或由权利要求I到4中任一项所述核酸编码的多肽接触26.饮料,其含有权利要求15到18中任一项所述的多肽,或由权利要求I到4中任一项所述核酸编码的多肽,其中任选地,所述多肽具有丙酮酸醛缩酶,HMG醛缩酶和/或KHG醛缩酶活性27.饮料生产的方法,包括在足以降低所述饮料粘度的条件下,给予饮料或饮料前体至少ー种权利要求15到18中任一项所述的多肽,或由权利要求I到4中任一项所述核酸编码的多肽,其中任选地,所述饮料或饮料前体是麦芽汁或啤酒28.食品添加剂、饲料添加剤、饮料添加剂或营养补充剂,含有权利要求15到18中任一项所述的多肽,或由权利要求I到4中任一项所述核酸编码的多肽,其中任选地,所述多肽具有醛缩酶,例如丙酮酸醛缩酶,例如HMG和/或KHG醛缩酶活性29.在动物膳食中利用醛缩酶作为营养补充剂的方法,所述方法包括 制备包含醛缩酶的营养补充剂,所述醛缩酶包含权利要求15到18中任一项所述多肽,或由权利要求I到4中任一项所述核酸编码的多肽的至少30个连续氨基酸;和 给予动物所述营养补充剂, 其中任选地,所述动物是人类,或所述动物是反刍动物或单胃动物, 并且任选地,所述醛缩酶通过在选自细菌、酵母、植物、昆虫、真菌和动物的生物体中表达编码所述醛缩酶的多核苷酸而制备出来,以及任选地,所述生物体选自粟酒裂殖酵母、酿酒酵母、巴斯德毕赤酵母、大肠杆菌、链霉菌属某种、杆菌属某种和乳酸杆菌属某种30.可食用酶输送基质或小丸,其包含热稳定重组醛缩酶,所述醛缩酶包括权利要求.15到18中任一项所述的多肽,或由权利要求I到4中任一项所述核酸编码的多肽,其中任选地,所述多肽具有醛缩酶,例如丙酮酸醛缩酶,例如HMG和/或KHG醛缩酶活性31.向动物输送醛缩酶补充剂的方法,所述方法包括制备含有颗粒状可食用载体和热稳定重组醛缩酶的可食用酶输送基质或小丸,其中所述的小丸容易将包含在其中的醛缩酶分散至含水介质中,并且所述重组醛缩酶包括权利要求15到18中任一项所述的多肽,或由权利要求I到4中任一项所述核酸编码的多肽;和给予所述动物所述可食用的酶输送基质或小丸, 其中任选地,所述颗粒状可食用载体包括选自谷物胚芽、去油的谷物胚芽、干草、苜蓿、梯牧草、大豆売、向日葵籽粉和小麦粗粉的载体, 并且任选地,所述可食用载体包含去油的谷物胚芽, 并且任选地,所述醛缩酶被糖基化以在制丸的条件下提供热稳定性, 并且任选地,所述输送基质通过将含有谷物胚芽和醛缩酶的混合物制丸而形成, 并且任选地,所述制丸条件包括应用蒸汽,以及可选地,所述制丸条件包括应用超过大约80°C的温度大约5分钟,所述酶保留每毫克酶至少350至大约900単位的比活性32.食品或饲料,包含权利要求15到18中任一项所述的多肽,或由权利要求I到4中任一项所述核酸编码的多肽,其中任选地,所述多肽具有包括醛缩酶,如丙酮酸醛缩酶,如HMG和/或KHG醛缩酶活性的活性33.制备食品或饲料的方法,包括使组合物与权利要求15到18中任一项所述的多肽,或由权利要求I到4中任一项所述核酸编码的多肽接触,所述组合物包括含有碳-碳键的化合物, 其中任选地,所述多肽具有包括醛缩酶,如丙酮酸醛缩酶,如HMG和/或KHG醛缩酶活性的活性34.包含多肽的组合物,所述多肽如权利要求15到18中任一项所述,或所述多肽由包含权利要求I到4中任一项所述序列的核酸编码35.权利要求15所述的多肽,其没有信号序列36.权利要求15所述的多肽,其进ー步包含异源序列37.权利要求15所述的多肽,其中所述多肽是具有醛缩酶活性的片段
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专利名称:醛缩酶、编码它们的核酸及制备和使用它们的方法醛缩酶、编码它们的核酸及制备和使用它们的方法本申请是分案申请,原申请的申请日为2007年3月7日、申请号为200780016408.6(PCT/US2007/063515)、发明名称为“醛缩酶、编码它们的核酸及制备和使用它们的方法”。相关申请的交叉參考本申请要求2006年3月7日提交的美国临时专利申请号60/780,515的权益。发明领域 本发明涉及分子和细胞生物学及生物化学。更特别地,本发明涉及具有醛缩酶活性的多肽,编码这些多肽的多核苷酸,以及制造和使用这些多核苷酸和多肽的方法。Monatin是具有如下化学式的高强度甜味剂本发明涉及具有醛缩酶活性,包括丙酮酸醛缩酶,例如没有限制地,HMG和/或KHG醛缩酶活性的多肽,编码这些多肽的多核苷酸,和制备并使用这些多核苷酸及多肽的方法。在一些实施方式中,本发明涉及具有醛缩酶活性,包括丙酮酸醛缩酶,例如没有限制地,HMG和/或KHG醛缩酶活性,包括热稳定性和耐热活性的多肽,编码这些酶的多核苷酸,和制备并使用这些多核苷酸及多肽的方法。依据本发明的多肽可以被用于多种药物、农业和工业环境。在一些实施方式中,本发明提供了多肽和生物合成途径,它们被用于产生R-2-羟基2-(吲哚-3基甲基)-4-酮戊二酸(R-MP)和某些monatin立体异构体,如R,R和S,R monatin及其盐,以及monatin衍生物的某些立体异构体,如R,R和S,R构型及其盐。
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