一种镉离子结合多肽及其编码序列的制作方法【技术领域】，具体地说，本发明涉及一种编码具有特异性结合镉离子功能多肽的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。[0002]许多细菌持有特定金属离子调控的转录调控机制。结合特定金属的蛋白识别并结合启动子当中或附近的特定DNA序列,MerR家族蛋白就是这种转录调控蛋白之一。MerR家族蛋白中，CadR蛋白能够特异性识别镉离子，并在镉离子诱导的情况下调控相应铜抵抗基因的转录。[0003]CadR蛋白含有147个氨基酸，其中N端为DNA结合结构域，C端为重金属镉结合结构域，中间部分为二聚体作用区域。CadR蛋白以二聚体的形式行使其正常功能。
[0004]本发明提供一种具有镉离子结合能力的多肽。[0005]本发明的另一目的是提供编码这一多肽的多核苷酸。[0006]本发明的另一目的是提供生产这种多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。
[0007]在本发明的第一方面，提供具有镉离子结合能力的多肽，它的氨基酸序列为:SEQID NO: 2，或其保守性变异多 肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
[0008]在本发明的第二方面，提供了一种多核苷酸，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85%的相同性:(a)编码上述的具有镉离子结合能力的多肽；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸的序列可以为:SEQ IDNO:1。
[0009]在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。
[0010]在本发明的第四方面，提供了制备具有镉结合能力的多肽的制备方法，该方法包含:(a)在适合表达具有镉结合能力的多肽的条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；
(b)从培养物中分离具有镉结合能力的多肽。
[0011 ] 去除恶臭假单胞菌iPseudomonas putida ) CadR蛋白的DNA结合结构域的编码序列，剩余序列包括二聚体作用区域和镉结合结构域的编码序列，将两段重复的剩余序列顺向串联，中间以柔性氨基酸(如GSG)连接，以使得多肽能够顺利折叠，形成模拟的镉结合二聚体结构。所得的多肽命名为CBP (命名采用其克隆编号)。
[0012]本发明的多核苷酸序列可以采用化学法合成，或采用聚合酶链式反应(PCR)以含有CadR蛋白编码基因的细菌基因组(或质粒)DNA为模板进行扩增。
[0013]本发明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。以CBP多肽为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO:1所示的编码区序列相同或是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”对于CBP而言是指编码具有SEQ ID N0:2的多肽，但与SEQ ID NO:1所示的编码区序列有差别的核苷酸序列。
[0014]本发明还涉及上述多核苷酸的变异体，其编码与本发明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。此多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的，等位变异体是一个多核苷酸的替换形式，它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入，但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。
[0015]本发明中，CBP多肽多核苷酸序列可插入到重组表达载体中。术语“重组表达载体”指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。总之，只要能在宿主体内复制和稳定表达，任何质粒和载体都可以使用。
[0016]宿主细胞可以说原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是搞定真核细胞，如哺乳动物细胞。
[0017]重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。获得的转化子可以用常规方法培养，表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞，培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。
[0018]在上述的方法中的重组多肽可包被于细胞内、细胞外或在细胞膜、细胞壁上表达或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其他特性通过各种分离方法分离和纯化重组的多肽。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于:常规的复性处理、盐析方法、离心、超声处理、分子筛层析、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其他各种液相层析技术及这些方法的结合。
[0019]本发明中重组的具有镉结合能力的多肽CBP有多方面的用途。这些用途包括(但不限于):用于重金属镉的去除，和用于重金属镉的检测。
[0020]以上所述仅为本发明的一般实施方式而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。