专利名称：一种具有降血糖作用的制剂及其制备方法毛连菜属植物包括日本毛连菜、毛连菜(原亚种毛连菜、单毛毛连菜)、滇苦菜、新 疆毛连菜，一年生、两年生、多年生分枝草本。日本毛连菜G0Zcri1S japoncia Thunb)为菊科植物，又名枪刀菜。在我国主要分 布于河北、山西、陕西、吉林、黑龙江等地，其中山西主要分布在太原及周边县市，交城，五台 等地区。生于山坡草地、灌丛中或田边、河边，海拔650 3650米。日本及俄罗斯也有分布。 全草入蒙药，具有清热、消肿及止痛作用。目前还未见将日本毛连菜用于降血糖的报道。
本发明所要解决的技术问题是提供一种降血糖作用的制剂及其制备方法。解决上述问题，本发明所述的制剂是由日本毛连菜的水提物制成。上述具有降血糖作用的制剂的制备方法是将日本毛连菜洗净，晾干，切成小段，加 蒸馏水浸泡后，提取2-3次，每次2-池，过滤提取液，收集滤液、合并滤液，离心，取上清，减 压浓缩至稠膏A ；将日本毛连菜洗净，晾干，切成小段，粉碎，过60目的筛，得粉末B，将日本 毛连菜水提物稠膏A与适量日本毛连菜生药材粉末B充分混勻，A与B的质量混合比例为 8.5 :1 13.5 :1，于60°C以下干燥，粉碎，得生药材和药材提取物的混合粉末C，再制备成 制剂。日本毛连菜生药材粉末B的选择通过考察不同粒度的生药材粉末与水提取物稠 膏A混合的均勻性和分散性，确定留取可以过60目筛的粉末，使得在使用尽可能少的粉末 的情况下达到适宜的分散效果。未能通过60目筛的粉末可以进一步的粉碎，这么作可以最 大限度的节约生药材。干燥条件的选择生药材粉末B与提取物稠膏A混合后，在干燥过程中通过对温 度和时间的考察，最终确定为于60°C以下真空干燥箱中干燥90min-120min，这样既可以充 分去除水分和降低粘度，又可以保证其适宜的硬度，易于粉碎。日本毛连菜水提取以前，加入日本毛连菜质量15-20倍的蒸馏水浸泡，使药材全 部被水淹没。但是，日本毛连菜生药材在清洗的过程要采用活水快速冲洗，不可浸泡，以免 损失水溶性的成分。提取方式可以是回流提取或温浸提取或超声提取。所述的稠膏A在80-85°C测定的比重为1. 20-1. 34，大约是将IOOg生药材的提取 物减压浓缩至20-40ml，这样既保证了当使用日本毛连菜生药材粉末与稠膏A混合时，尽可 能使用较少的生药材粉末即可混合均勻，又可以有适宜的分散性，这一步对日本毛连菜粉 末C的制备极其重要。利用混合粉末C，采用公知的方法可以制成片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂或口服液。在制颗粒剂的过程中，通过对温度的考察，最终确定为80°C以下真空干燥箱中干燥，这样 既可以保证其硬度且稳定其中的药用成分，又有适宜的溶解性。日本毛连菜水提取物含有 较多的水溶性成分，糖分含量较高，醇度小，不易降低提取物的粘度；醇度大，导致分散性太 大，都不适宜制粒，最终确定的方案为首先用适量的95%乙醇将混合的粉末C浸润，再加适 量蒸馏水混勻，过20目筛制粒，于80°C以下干燥，整粒，分装，即得日本毛连菜水提物颗粒 剂。本发明所述的日本毛连菜水提物具有降血糖功效，可用于制备降血糖药物，其有 效成分测定及降血糖作用的确立方法如下1.日本毛连菜水提取物中多糖及黄酮的含量测定多糖含量测定1)葡萄糖对照品溶液的制备精密称取105°c干燥至恒重的无水葡萄糖对照品0. 0104 g，加适量水溶解，转移至100 ml容量瓶中，加水至刻度，摇勻，即得104 μδ/πι1的溶液。2)葡萄糖准曲线的制备取葡萄糖对照品溶液0.1 ml,0.2 ml,0.4 ml,0.6 ml,0.8 ml, 1.0 ml各加蒸馏水至2.0 ml，然后各加苯酚1.0 ml，摇勻，迅速滴加浓硫酸5.0 ml，摇勻，置沸水浴中加热15 min，然 后冷却至室温。在490 nm处测定吸光度值。以一系列葡萄糖对照品溶液的浓度为横坐标， 吸光度值为纵坐标，建立标准曲线，并进行回归处理。得葡萄糖标准曲线回归方程式Y=0. 0156χ 一 0. 0076 (r=0. 9994)，葡萄糖在5. 2 μδ/πιΓ52 Pg/ml之间线性关系良好。3)日本毛连菜多糖含量测定
精密量取日本毛连菜总供试品溶液适量，按照标准曲线方法显色后测定其吸光度，代 入回归方程，计算总黄酮含量。黄酮含量测定
1)芦丁对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的芦丁标准品18. 60mg，用60%的乙醇(ν/ν)溶解，并转移至100 ml容量瓶中定容，摇勻，制成0. 186mg/ml的芦丁对照品溶液。2)芦丁标准曲线的制备
精密吸取芦丁标准溶液OmUO. 5ml、1. 0ml,2. 0ml,3. 0ml,4. 0ml,5. Oml分别置干燥试 管中，各加60 %乙醇至5. 0ml，加5%亚硝酸钠溶液0. 3ml，摇勻，6 min后加10%的硝酸铝 溶液0. 3ml，摇勻，6 min后加4 %的氢氧化钠溶液，摇勻，加蒸馏水定容至IOml，摇勻，放 置15 min，试样空白作参比，在波长505nm处测定其吸光度。以浓度C&g/ml)为横坐标，吸 光度A为纵坐标得芦丁标准曲线回归方程Y = 0. 0146Χ-0. 0062 (r = 0. 9991)，结果显示 芦丁在9. 3 93Pg/ml之间线性关系良好。3)日本毛连菜总黄酮含量测定
精密量取日本毛连菜总黄酮供试品溶液适量，按照标准曲线方法显色后测定其吸光 度，代入回归方程，计算总黄酮含量。2.日本毛连菜水提取物降血糖作用的确立，其方法如下
对正常小鼠血糖的影响，昆明种小鼠随机分为正常对照组，日本毛连菜总提物高、中、低剂量组，阳性对照组；连续给药14天，于末次给药前小鼠禁食不禁水他，给药后继续禁食 不禁水，眼眶后静脉丛采血，3500r/min离心15min，取血清测各组的空腹血糖值。对四氧嘧啶致小鼠高血糖的影响，小鼠尾静脉注射新鲜配制的四氧嘧啶造成高血 糖模型，取合格模型小鼠，随机分为5组，阳性对照组，日本毛连菜总提物高、中、低剂量组； 糖尿病模型组；另取重量相近的正常小鼠作为正常对照组。连续给药14天后，于末次给药 前小鼠禁食不禁水他，给药后继续禁食不禁水后2h，眼眶后静脉丛采血，测定各组的空腹 血糖值。对肾上腺素致小鼠高血糖的影响，取合格昆明种小鼠，随机分为6组，给药组和阳 性对照组剂量同上，模型对照组和空白对照组灌胃等体积生理盐水，连续给药10天。于末 次给药前小鼠禁食不禁水他，给药后继续禁食不禁水后，除正常对照组外，每只小鼠腹 腔注射肾上腺素0. 2mg/kg,正常对照组则腹腔注射等容量生理盐水。30min后，眼眶后静脉 丛采血，各组的空腹血糖值。
四氧嘧啶致糖尿病小鼠模型的建立四氧嘧啶的注射量直接关系到小鼠的成模率、死 亡率、成模后血糖值以及给药后的降糖效果，给药量大虽然可以使成模率升高，但是血糖值 过高，死亡率增加，完不成整个给药过程，通过对四氧嘧啶用量的考察，最终确定为尾静脉 注射四氧嘧啶40-60mg/kg，0. lml/10g的给药量，成模率达到70%以上，成模后血糖值适宜、 稳定，几乎没有死亡，能完成整个实验过程，可以充分证明药物的降糖效果。根据动物实验，日本毛连菜水提取物能显著降低四氧嘧啶以及肾上腺素致糖尿病 模型小鼠的血糖值，与阳性药格列本脲的降糖效果没有统计学差异。结果见表1、表2。且 对正常小鼠的血糖值没影响，结果见表3。


本发明公开了一种具有降血糖作用的制剂，该制剂是由日本毛连菜的水提物制成，其制备方法是将日本毛连菜洗净，晾干，切成小段，加蒸馏水浸泡后，提取2-3次，每次2-3h，过滤提取液，收集滤液、合并滤液，离心，取上清，减压浓缩至稠膏A；将日本毛连菜洗净，晾干，切成小段，粉碎，过60目的筛，得粉末B，将日本毛连菜水提物稠膏A与适量日本毛连菜生药材粉末B充分混匀，A与B的质量混合比例为8.51～13.51，于60℃以下干燥，粉碎，得生药材和药材提取物的混合粉末C，再制备成制剂。本发明将日本毛连菜水提取有效部位制备成具有降血糖作用的药物制剂，工艺稳定，简单，可行。