专利名称：具有降血糖活性的木香提取物及其应用的制作方法糖尿病是威胁人类健康的重大疾病，其持续增长的流行病学趋势已构成严重的公 共卫生问题。目前，临床用于治疗II型糖尿病的药物主要有(1)胰岛素及其类似物；(2) 口服降血糖药包括双胍类、磺酰脲类、α-葡萄糖苷酶抑制剂和胰岛素增敏剂等。西药治 疗糖尿病疗效肯定，但存在一定的消化道反应和肝、肾损害等副作用，且不能有效控制并发 症。而中药治疗糖尿病疗效稳定，作用温和，不良反应少，能够有效防治并发症。因此，积极 开发新型、高效、安全的中药降血糖药物，对糖尿病的防治具有重要意义。木香为菊科植物木香lappa Decne.的干燥根。味辛、苦，性温。归 脾、胃、大肠、三焦、胆经。具有行气止痛，健脾消食的功效。中医主要用于治疗胸脘胀痛，泻 痢后重，食积不消，不思饮食等症。现代研究表明，木香主要含挥发油，其中相对含量较高的 为倍半萜类和倍半萜内酯类，包括木香内酯、去氢木香内酯、二氢木香内酯等成分，此外还 含有天冬氨酸、谷氨酸、Y -氨基丁酸等多种氨基酸。药理研究表明，木香具有抗菌、抗炎、抗 肿瘤、调节胃肠运动、抗消化道溃疡、扩张血管、抑制血小板聚集等非常广泛的作用。此外， 有文献报道，木香的乙醇提取物具有一定的降血糖活性。
有鉴于此，本发明的目的在于对木香的降血糖活性部位进行提取与纯化，从而获 得较现有技术具有更高降血糖活性的木香提取物。为达到上述目的，本发明提供如下技术方案 具有降血糖活性的木香提取物，采用下述方法制得a、取木香，粉碎成粗粉，用体积分数为709Γ85%的乙醇回流提取，合并提取液，减压浓缩至浸膏；b、将步骤a所得浸膏加水分散，用石油醚萃取，分别收集有机相和水相；C、将步骤b收集的水相用乙酸乙酯或正丁醇萃取，合并有机相，减压浓缩至浸膏，即得 具有降血糖活性的木香提取物。进一步，所述步骤a是取干燥木香，粉碎过40目筛，所得粗粉按固液质量比为 1 7 10加入体积分数为709Γ85%的乙醇，回流提取3次，每次0.5 1小时，合并3次提取 液，减压浓缩至浸膏。进一步，所述步骤b是将步骤a所得浸膏加水分散，用广2倍体积的石油醚萃取3 次，分别收集有机相和水相。进一步，所述步骤c是将步骤b收集的水相用广2倍体积的乙酸乙酯或正丁醇萃 取3次，合并有机相，减压浓缩至浸膏，即得具有降血糖活性的木香提取物。进一步，所述步骤c中优选用乙酸乙酯进行萃取。鉴于采用上述方法制得的木香提取物具有较高的降血糖活性，因此，上述具有降 血糖活性的木香提取物可以用于制备预防和治疗糖尿病的药物。本发明的有益效果在于本发明通过优选的有机萃取溶剂对木香的乙醇提取物进 行两次萃取以纯化降血糖活性部位，减少或去除与降血糖活性无关的组分，纯化后的产品 具有更强的降血糖活性，疗效更确切，安全性更高，达到同等活性水平所需的用量减少，服 用更方便，可用于制备预防和治疗糖尿病的药物，在糖尿病的防治领域具有良好的开发应 用前景。

a、取干燥的木香300g，粉碎过40目筛，所得粗粉用体积分数为70%的工业乙醇回流提 取3次，每次加入体积分数为70%的工业乙醇2100mL提取30分钟，合并3次提取液，减压 浓缩至浸膏，制得浸膏I 90. 5g;
b、将步骤a所得浸膏加水IOOmL分散，用石油醚萃取3次，每次加入石油醚lOOmL，分别 收集石油醚萃取液和水相，将石油醚萃取液减压浓缩至浸膏，制得浸膏II 7. 4g ；
C、将步骤b收集的水相用乙酸乙酯萃取3次，每次加入乙酸乙酯IOOmL,合并乙酸乙酯 萃取液，减压浓缩至浸膏，制得浸膏III 7. 5g，即本发明所述具有降血糖活性的木香提取物。实施例2、木香提取物的制备
a、取干燥的木香300g，粉碎过40目筛，所得粗粉用体积分数为75%的工业乙醇回流提 取3次，每次加入体积分数为75%的工业乙醇^OOmL提取30分钟，合并3次提取液，减压 浓缩至浸膏，制得浸膏I 90. 7g;
b、将步骤a所得浸膏加水200mL分散，用石油醚萃取3次，每次加入石油醚200mL，分别 收集石油醚萃取液和水相，将石油醚萃取液减压浓缩至浸膏，制得浸膏II 7. 2g ；
C、将步骤b收集的水相用乙酸乙酯萃取3次，每次加入乙酸乙酯200mL，合并乙酸乙酯 萃取液，减压浓缩至浸膏，制得浸膏III 7. 3g，即本发明所述具有降血糖活性的木香提取物。实施例3、木香提取物的制备
a、取干燥的木香300g，粉碎过40目筛，所得粗粉用体积分数为85%的工业乙醇回流提 取3次，每次加入体积分数为85%的工业乙醇3000mL提取30分钟，合并3次提取液，减压 浓缩至浸膏，制得浸膏I 90. 7g;
b、将步骤a所得浸膏加水300mL分散，用石油醚萃取3次，每次加入石油醚500mL，分别 收集石油醚萃取液和水相，将石油醚萃取液减压浓缩至浸膏，制得浸膏II 7. 7g ；
C、将步骤b收集的水相用乙酸乙酯萃取3次，每次加入乙酸乙酯500mL，合并乙酸乙酯 萃取液，减压浓缩至浸膏，制得浸膏III 7. 5g，即本发明所述具有降血糖活性的木香提取物。实施例4、木香提取物的制备
a、取干燥的木香300g，粉碎过40目筛，所得粗粉用体积分数为75%的工业乙醇回流提 取3次，每次加入体积分数为75%的工业乙醇^OOmL提取50分钟，合并3次提取液，减压浓缩至浸膏，制得浸膏I 91. Og;
b、将步骤a所得浸膏加水200mL分散，用石油醚萃取3次，每次加入石油醚200mL，分别 收集石油醚萃取液和水相，将石油醚萃取液减压浓缩至浸膏，制得浸膏II 6. 9g ；
C、将步骤b收集的水相用正丁醇萃取3次，每次加入正丁醇200mL，合并正丁醇萃取液， 减压浓缩至浸膏，制得浸膏IV 7. 5g，即本发明所述具有降血糖活性的木香提取物。实施例5、木香提取物的制备
a、取干燥的木香300g，粉碎过40目筛，所得粗粉用体积分数为85%的工业乙醇回流提 取3次，每次加入体积分数为85%的工业乙醇3000mL提取50分钟，合并3次提取液，减压 浓缩至浸膏，制得浸膏I 90. Sg;
b、将步骤a所得浸膏加水270mL分散，用石油醚萃取3次，每次加入石油醚300mL，分别 收集石油醚萃取液和水相，将石油醚萃取液减压浓缩至浸膏，制得浸膏II 7. 7g ；
C、将步骤b收集的水相用正丁醇萃取3次，每次加入正丁醇400mL，合并正丁醇萃取液， 减压浓缩至浸膏，制得浸膏IV 8. Og,即本发明所述具有降血糖活性的木香提取物。实施例6、木香提取物的体外α -葡萄糖苷酶抑制活性
分别将实施例广5所述浸膏I (乙醇提取物)、浸膏II (石油醚萃取物)、浸膏IIK乙酸乙 酯萃取物)和浸膏IV (正丁醇萃取物)以及阳性对照药阿卡波糖用质量分数为1%的吐温80 溶液溶解制成浓度为1. 2g/L的溶液，作为待测样品溶液。在4mL离心管中，加入pH6. 8的 磷酸盐缓冲液2010 μ L、待测样品溶液250 μ L、3mmol/L的谷胱甘肽80 μ L和α -葡萄糖苷 酶80 μ L，混勻，37°C恒温水浴保温10分钟，再加入硝基苯基-α -D-吡喃葡萄糖苷(pNPG) 8(^1^，立即于波长40011111处测定在酶的作用下释放出对硝基苯酚(pNP)的量，以不加待测 样品溶液为空白对照，每2分钟读1次吸光度值并记录。每种样品设置3个平行，取平均值， 绘制吸光度-时间关系曲线(吸光度与时间成正比例关系)，取斜率K值，计算α -葡萄糖苷 酶的抑制率抑制率=(Kse_K#s)/Kse。结果如表1所示，可见浸膏III和浸膏IV对α -葡萄糖苷酶有很强的抑制活性， 强度与阿卡波糖相当，优于浸膏I和浸膏II。表1、木香提取物的体外α -葡萄糖苷酶抑制活性
实施例7、木香提取物对HepG2细胞消耗葡萄糖的影响
用质量分数为10%的灭活胎牛血清培养H印G2细胞，每3、天传代1次。取对数生长 期的HepG2细胞，用胰酶消化后制成密度为IXlO5AiL的细胞悬液，接种于48孔板，每孔 300 μ L ；培养M小时后换为无血清培养液，每孔225 μ L ；继续培养M小时后，分别向每孔 中加入不同浓度(l、10yg/.mL)的实施例广5所述浸膏I (乙醇提取物)、浸膏II (石油醚萃
5取物)、浸膏IIK乙酸乙酯萃取物)和浸膏IV (正丁醇萃取物)以及阳性对照药二甲双胍，每孔 25 μ L，每种样品每个浓度设置7个平行，以PBS为空白对照；继续培养M小时后，每孔吸取 培养液115PL，用全自动生化分析仪测定葡萄糖含量，计算细胞的葡萄糖消耗量。结果如表2所示，可见浸膏III对HepG2细胞消耗葡萄糖的能力有明显促进作用，作 用优于浸膏I、II、IV和二甲双胍。表2、木香提取物对HepG2细胞消耗葡萄糖的影响
实施例8、木香提取物的体内降血糖活性


本发明属于中药活性部位提取纯化技术领域，涉及一种具有降血糖活性的木香提取物，可采用下述方法制得将木香用体积分数为70%~85%的乙醇回流提取，合并提取液，减压浓缩至浸膏，再加水分散，用石油醚及乙酸乙酯或正丁醇连续萃取，减压浓缩去除有机溶剂的乙酸乙酯或正丁醇提取物即本发明的降血糖活性提取物；本发明通过优选的有机萃取溶剂对木香的乙醇提取物进行两次萃取以纯化降血糖活性部位，减少或去除与降血糖活性无关的组分，纯化后的产品具有更强的降血糖活性，疗效更确切，安全性更高，达到同等活性水平所需的用量减少，服用更方便，可用于制备预防和治疗糖尿病的药物，在糖尿病的防治领域具有良好的开发应用前景。