一种用于治疗亚洲象皮肤癣菌病复方制剂及其制备方法[0004]为了解决上述亚洲象存在的皮肤病问题，本发明提供了一种用于治疗亚洲象皮肤癣菌病复方制剂；具体的
是: [0005]一种用于治疗亚洲象皮肤癣菌病复方制剂，所述组合药物活性成分为盐酸特比萘芬与艾叶精油的混合物。[0006]所述盐酸特比萘芬与艾叶精油的重量比为1-20:10-100。[0007]所述组合药物为盐酸特比萘芬与艾叶精油的混合物的水溶液。[0008]所述混合物的水溶液中混合物和水的重量比为1:20-200倍。[0009]一种用于治疗亚洲象皮肤癣菌病复方制剂的制备方法，包括以下步骤:[0010]I)将盐酸特比萘芬溶解在10倍重量的水中，得到盐酸特比萘芬水溶液；[0011]2)提取艾叶精油，0_4°C冷藏；
[0012]3)将艾叶精油与盐酸特比萘芬水溶液混溶，形成混合液，得到用于治疗亚洲象皮肤癣菌病复方制剂；
[0013]4)使用前根据需要稀释使用。
[0014]本发明的有益技术效果是:本发明提供的组合药物较现有的单方抗真菌药物抑菌效果更高，更重要的是本发明提供的组合药物，能够通过稀释后直接用简单工具对大象进行涂抹；使用非常方便。

[0015]实施例1用于治疗亚洲象皮肤癣菌病复方制剂的体外模型研究
[0016]收集3头亚洲象皮肤出现溃疡、发炎、结痂并不规则的脱落的亚洲象皮肤组织，进行分离培养、PCR扩增与测序比对，发现其为小孢子菌属引起的皮肤病。体外药敏试验采用美国临床和实验室标准化研究所(LSI)公布的抗真菌药敏试验方案M38-A对灰黄霉素、氟康唑、两性霉素、艾叶精油、特比萘芬五种化学药物和艾叶精油、大蒜素、青蒿素三种天然药物的提取物进行试验。结果显示在体外药敏试验中，化学药物的抗菌效果远远优于天然药物提取物，化药中抗菌效果最好的是特比萘芬，特比萘芬对受试菌的最小抑菌浓度为
0.02ug/mL ;天然药物中抗菌效果最好的是艾叶提取物，艾叶精油对受试菌的最小抑菌浓度可达 20ug/mL。
[0017]将上述分离出菌株参照美国临床和实验室标准化研究所(LSI)的微量液基稀释方案M38-A(菌丝相)及M27-A(酵母相)配制药物的贮存液及倍比稀释液，即药物均溶解在100% DMSO中，获得的贮存液浓度均为1600 μ g/mL，在-20%条件下储存。实验前用RPMI1640液体培养基将药物稀释成两倍终浓度工作液。
[0018]试验前所有受试菌均接种在马铃薯葡萄糖培养基(PDA)上30°C活化7d。取2mL生理盐水加入试管内，轻挑黑灰色绒毛样菌落，反复吹吸后，将菌悬液吸到无菌试管中静置20min。取上清液振荡15S，用比浊仪调整菌悬液浓度至0.5麦氏单位。再用血球计数板计数，浓度调至1-5X 106CFU/mL。再用RPMI1640液体培养基稀释50倍，得到2 X IO4-1 X 105CFU/mL的2倍终浓度的接种菌悬液。
[0019]酵母相菌悬液制备试验前所有受试菌均接种在含5%葡萄糖的脑心浸汁培养基(BHI)上35°C培养，每7d传 代I次，共3次，直至70%以上细胞转化为酵母样细胞。挑取灰白色酵母菌落适量，放置于装有2mL生理盐水的无菌玻璃小瓶中制成混悬液，静置20min。取上清液振荡15S，用比浊仪调整菌悬液浓度至0.5麦氏单位。再用血球计数板计数，浓度调至1-5 X 106CFU/mL。再用RPMI1640液体培养基稀释1000倍，得到1-5 X 103CFU/mL的2倍终浓度的接种菌悬液。
[0020]真菌药敏试验培养板横向以1-12列表示，即有12孔；纵向以A-H行表示，即有8孔；第I列及第H行为单独药敏试验区，第2-11列及A-G行为联合药敏试验区。两种药物的储存液分别用RPMI1640培养基进行倍比稀释，取50L各稀释浓度特比萘芬药液分别加入第1-11列各孔，取50各稀释浓度艾叶精油药液加入A-H行。第12列加入200培养基作为阴性对照。特比萘芬药液浓度范围为0.0075-8 μ g/mL，艾叶精油为0.03-16 μ g/mL，根据每株菌的结果不同可分别提高或降低2个数量级的药物浓度。之后各孔接种制备好的菌悬液100 μ L，将药敏板放置35°C恒温培养箱，72-120h观察结果。
[0021 ] 菌丝相和酵母相的MIC判定一致，艾叶精油和特比萘芬单独用药和联合用药时的MIC值均取与生长对照孔相比生长100%受抑制的最低药物浓度。
[0022]FIC (分数抑菌浓度)为联合用药时各药的MIC值分别除以单独用药时MIC值的商的和，表示为FIC=MICa/MICajhs+MICa/MICb 相互作用解释为:FIC ( 0.5有协同作用；FIC > 4有拮抗作用；0.5〈FIC ( 4为无关。[0023]用SPSS14.0统计软件，计算艾叶精油和特比萘芬在单独用药和联合用药时MIC的几何均数值(GM值)及FIC值,单独和联合用药组间数据采用秩和检验和Fisher’s exacttest, P〈0.05认为差异有统计学意义。
[0024]艾叶精油对菌丝相的MIC值范围为4-32 μ g/mL，GM值为14.93 μ g/mL ;对酵母相分别为l-8g/mL和1.69g/mL,菌丝相与酵母相GM值比较差异具有显著统计学意义。特比萘芬对菌丝相的MIC值范围为0.06-0.25 μ g/mL, GM值为0.13mL ;对酵母相分别为
0.06-0.25 μ g/mL和0.11 μ g/mL,菌丝相与酵母相GM值比较差异无统计学意义；具体见表I所示。
[0025]表1艾叶精油与特比萘芬联合用药对菌丝相和酵母相体外药物相互作用