一种具有抗耐药性革兰阳性细菌作用的药物组合物的制作方法【技术领域】，具体涉及协同抗耐药性革兰阳性细菌的药物组合物。该药物组合物含有多肽cbf-14和选自氨苄青霉素、头孢他啶或万古霉素在内的抗生素。本发明的药物组合物具有协同抗耐药性革兰阳性细菌感染的用途。[0002]抗生素的发现使人们进入了控制、治疗细菌感染性疾病的时代。但是大量广谱抗生素的使用同时加强了对致病菌的筛选作用，加速了致病菌的进化，使得细菌的耐药率逐步增加。自发耐药突变的存在与抗生素选择压力的持续作用，以及病原菌的环境适应能力与人体微环境生态变化的进化催动，是临床上耐药菌和多重耐药菌产生的基础。金黄色葡萄球菌(SA)是医院感染的主要病原菌之一，特别是耐甲氧西林的金葡菌(MRSA)感染有逐年上升的趋势，是临床面临的严峻问题。MRSA的耐药性主要表现为耐受青霉素，头孢他啶等多种β -内酰胺类抗菌药物，而万古霉素对于多种细菌，包括对MRSA的敏感性远高于其他药物。但是，由于近年MRSA对于万古霉素的敏感性降低，已出现万古霉素耐药菌，万古霉素这一优势受到挑战。因此，单一抗生素治疗多药耐药菌的感染已经无法达到令人满意的疗效。[0003]氨苄青霉素、头孢他啶是两种常见的β -内酰胺类抗生素。β -内酰胺类抗生素能抑制胞壁粘肽合成酶，即青霉素结合蛋白(PBPs)，从而阻碍细胞壁粘肽合成，使细菌胞壁缺损，菌体膨胀裂解。而哺乳动物无细胞壁，不受内酰胺类药物的影响。所以，此类抗生素具有杀菌活性强、毒性低、适应症广及临床疗效好的优点。但随着抗生素的大量应用，特别是无指征用药、 不恰当地选择备用抗菌药、过度治疗及频繁换药，导致细菌的耐药率越来越高，耐药程度越来越严重。其中细菌产生内酰胺酶是细菌对内酰胺类抗生素耐药的主要机制。[0004]万古霉素是一种糖肽类窄谱抗生素。主要对革兰氏阳性菌有效，如金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌(包括耐甲氧西林菌株)以及链球菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌、放线菌、链球菌属、牛链球菌、肠球菌、类白喉菌等。万古霉素通过抑制细菌细胞壁的合成而发挥速效杀菌作用，但其作用部位与青霉素类及头孢菌素类不同，主要为抑制细胞壁糖肽的合成，也可能是改变细菌细胞膜的渗透性，并选择性地抑制RNA的生物合成。因此，万古霉素是临床上治疗MRSA感染的首选药物。但是，由于近年MRSA对于万古霉素的敏感性降低，已出现万古霉素耐药菌，万古霉素这一优势受到挑战。初步研究表明，万古霉素耐药金葡菌(VRSA)的细胞壁有增厚现象，可能与其出现耐药性有关。[0005]由于抗微生物肽具有广谱的抗菌活性和广泛的生物学功能，近年来有关抗微生物肽的研究已经得到广泛重视。与传统抗生素相比，多肽具有分子量小、抗菌谱广、抗菌机理独特、不易产生耐药性等优点。大多数抗菌肽具有广谱杀菌作用，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌都有效果。一些抗菌肽还有其他生理活性，抗病毒，抗癌，促进伤口愈合，激活免疫应答等。目前已经应用于临床的抗菌肽类药物是Polymyxins和Gramicidin S,用来治疗由P.aeruginosa和Acinetobacter baumannii引起的感染，临床证实其安全及有效,未发现抗药性，只是由于具有很大的毒性，阻碍了其全身性的使用，只能在局部应用。此外，抗菌肽的作用机理的研究也越来越广泛。抗菌肽的作用机理有很多种，有些可以使细胞膜透化，有些作用于细胞壁，还有一些抑制细胞内大分子的合成。[0006]多肽Cbf-14是发明人前期依据Cathelicidin家族的抗菌多肽，将其部分活性氨基酸位点进行突变，采用固相化学合成法获得对青霉素耐药性细菌具有高抑制活性的抗菌多肽，其具有SEQ ID No:1所示的氨基酸序列。其含有14个氨基酸，7个正电荷，分子量为1819.33，等电点为12.31。其全序列为:精氨酸_亮氨酸_亮氨酸_精氨酸_赖氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-赖氨酸-亮氨酸-赖氨酸-赖氨酸-丝氨酸-缬氨酸。体外抗菌活性研究表明，Cbf-14具有显著的杀灭耐药性细菌的作用。公开于中国专利CN103435686A中。

[0007]本发明针对传统抗生素对耐药细菌敏感性下降的不足，提出一种抗耐药性革兰阳性细菌的药物组合物，能有效地预防和治疗耐药或多药耐药的金黄色葡萄球菌引起的感染，如肺炎、败血症等临床疾病。
[0008]本发明公开了一种多肽Cbf-14与抗生素的复方药物组合物，由药物活性组分和药学上可接受的载体组成，其中药物活性组分含序列为SEQ ID No:1的多肽(即多肽Cbf-14)及选自氨苄青霉素、头孢他啶或万古霉素中的任一组分，构成复方药物。
[0009]多肽Cbf-14与选自氨苄青霉素、头孢他啶或万古霉素中的任一组分的重量比优选4:1-1:4。更优选1:1_1:2。最优选1:1。
[0010]可通过常规的操作手段，向药物活性组分中直接或间接加入药学上可接受的辅料制成胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、片剂、口服液、糖浆、口崩片、含漱液、细粒剂、粉末、或者注射剂等剂型供临床应用。
[0011]下面是本发明的部分抗菌试验及结果:
[0012]一、多肽cbf-14及氨苄青霉素、头孢他啶、万古霉素三种抗生素对耐药性细菌的药效:
[0013](I)接种物的制备
[0014]将实验用细菌从甘油管中接至营养琼脂斜面，37°C培养过夜后，再挑取少许接种于2ml营养肉汤培养基，37°C培养8h，用无菌MH肉汤培养液稀释成105CFU/ml左右的细菌悬液。
[0015](2)药物的配置
[0016]精确称取一定量的Cbf-14及氨苄青霉素、头孢他啶、万古霉素，配置成浓度为1024 μ g/ml的药物溶液，0.22 um膜无菌过滤，分装，置_70°C保藏备用。
[0017](3)最小抑菌浓度(MIC)的测定
[0018] 用无菌MH肉汤培养液将药物原液倍比稀释成Iml含药浓度为512、256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5,0.25 μ g/ml的溶液。取Iml的上述菌液加至制备好的含药培养基中，此时，各试管中药物浓度分别为 256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5,0.25,0.125 μ g/ml。另设不含药组作为对照。置37°C培养箱中培养16~20h，观察抗菌效果，并记录MIC值。结果见表1:
[0019]表lCbf-14与抗生素单独及联用抗耐药性细菌临床株及标准株的MIC
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