专利名称：用于预防和治疗中风后遗症的药物组合物的制作方法 中风是人类目前最常见的疾病死亡原因之一。中风后遗症是在出血性中风和缺血性中风的急性期后，由于脑组织局部缺血和受压，仍存在炎症、水肿或缺血状况，患者仍遗留的部分功能障碍，如头痛、头晕、运动障碍、语言障碍等。据统计，75％的中风幸存者有都会遗留有不同程度的残疾，其中最常见的是偏瘫等肢体运动障碍性的后遗症。随着中风急性期临床治疗水平的提高，脑卒中的生存率不断提高，以肢体运动障碍为主的中风后遗症的患病率也相应呈增长趋势。目前对于治疗中风后遗症的各类药物的报导较多。如，《药学学报》1999，34(1)72-78曾报导，目前治疗脑卒中恢复期和后遗症的药物大多为对病患部位的脑代谢和脑循环改善剂，临床常用药物中使用最广泛的有银杏叶提取物、艾地苯醌(idebenono)、丹参注射液及长春西丁(vinpocetin)等。银杏叶提取物主要含黄酮甙和银杏苦内酯，其中黄酮甙的药理作用是能清除自由基，抑制脂质过氧化物，扩张血管和增加脑血流量，银杏苦内酯对PAF有特异性抑制作用，可防止抗血小板聚集和血栓形成。艾地苯醌能改善脑能量代谢，改善脑功能障碍和精神症状，对线粒体肿胀和脂质过氧化物有抑制作用。丹参注射液则主要是抗血小板聚集。这些药物的共同点是多只能单一地作用于某一病理机制环节。由于卒中的病理机制甚为复杂，各种病理机制的共同作用以及再受病程时间长短的交互影响，均会导致和影响病情的严重性和复杂性，因而限制了单一用药的功效性，故有些学者也曾提出过采用“鸡尾酒”形式的用药方案设想。另一方面，传统中药在卒中及卒中后遗症的预防和治疗中也一直具有着重要的作用。中医理论认为，中风乃本虚标实之证，中风后遗症则为标去本现，是由于正气亏虚，气血瘀阻，四肢百骸失于濡养所致。临床上常用的药物主要是具有调补正气，补肝肾活血作用药物，如补阳还伍汤、华佗再造丸、当归宝液、追风丸、愈风丸、步长脑心通和豨蛭络达胶囊等。此外，在申请号分别为CN 1136935A、1257729A、1235050A、1235049A、1255356A、1207312A、1081888A等许多中国专利文献，以及《陕西中医》2000，21(9)397，《中医药学》1997，25(1)21等诸多文献中，也分别报导了不同组成和/或剂型形式的可用于治疗中风及中风后遗症的中药药物。这些中药药物的在实践中虽可具有一定的疗效，但由于对其中的有效成分一般均不甚明确，因而多采用的是大处方，且加工深度有限，造成服药量大而有效成分服用量相对少，影响了疗效的发挥。另一方面，临床所用的这些药物在药理和药效上一般也多只限于活血化瘀和改善血液循环方面。现有的实验结果已经表明，正常人卧床休息1个月后肌肉即可减少5％，且肌力下降。随着人们对中风后遗症认识的不断深入，对于中风瘫痪病人已发现由于运动能力受限或功能障碍而引起了骨矿含量的减少，导致了废用性骨质疏松，卧床6个月以上即可出现皮肤血流量减少，肌肉和皮下脂肪萎缩，关节韧带挛缩及骨疼痛。
针对上述情况，本发明将提供一种可供治疗中风后遗症的新形式的药物组合物，使其在改善和提高脑神经元功能和增加脑血流量的同时，还能针对因中风后遗的肢体运动障碍所致的肌力下降和废用性骨质疏松具有治疗和改善恢复的药理和药效作用。本发明用于预防和治疗中风后遗症的药物组合物，是以天然药用原料黄芪、丹参、牛膝和淫羊藿的提取物为有效药用组分以及在制药中允许使用的辅助添加成分组成。其中，各提取物中，黄芪、牛膝和淫羊藿为由体积含量30％-90％的乙醇提取分别得到的含有皂甙类、甾体类和黄酮类的浓缩或干燥的提取物，丹参为由常规水煎提取液除去醇沉不溶物后得到的含有水溶性酚酸成分的浓缩或干燥的提取物。以重量份计的各有效药用组分提取物的生药原料组成为黄芪5-150，丹参2-20，牛膝2-20，淫羊藿2-20，试验结果表明，上述药物组成中，所说的牛膝提取物的生药原料以采用川牛膝为好。在上述的药物组成比例中，所说生药原料中的丹参、牛膝和淫羊藿一般可以采用等重量份的比例。例如，可以作为实施例采用的较好比例为黄芪30-50，丹参8-12，牛膝8-12，淫羊藿8-12。其中较理想的可以为黄芪30-50，丹参10，牛膝10，淫羊藿10。以上述的组成形式为基础，在本发明的药物有效药用组分中还可以进一步再增加银杏叶的提取物，即以天然药用原料黄芪、丹参、牛膝、淫羊藿和银杏叶的提取物为有效药用组分，以及再含有在制药中允许使用的辅助添加成分组成。该银杏叶提取物为同样的乙醇提取物中除去热水不溶物后得到的浓缩或干燥提取物。在保持上述各有效药用组分提取物的生药原料重量份比例关系的基础上，银杏叶提取物的银杏叶生药原料用量为2-20份，其中也以采用8-12为好，并可以采用使丹参、牛膝、淫羊藿和银杏叶各提取物所用的生药原料为相同重量份的更为简便的方式。本发明上述药物原料中的黄芪可以为主产于内蒙、河北等地的豆科蒙古黄芪或膜荚黄芪等品种的干燥根；丹参为主产于云南、四川、安徽等地唇形科植物丹参的干燥根茎；牛膝，特别是主产于四川、云南、贵州等地的苋科植物川牛膝，是其干燥的根；淫羊藿为可广泛产于各地的小檗科植物的淫羊藿、箭叶淫羊藿、巫山淫羊藿或朝鲜淫羊藿等品种的干燥地上部分；银杏叶则为银杏科植物银杏的干燥树叶。根据传统中医药理论，黄芪具有大补元气的功效，可益气行血，气旺可促进血液循环而使瘀血消散，恢复肢体的活动功能，中医临床也已证实了其对中风和中风后遗症有确切的疗效。现代医学和临床结果的研究认为，其有效部位为黄芪皂甙，并具有清除自由基和保护脑组织的作用。丹参具有活血化瘀的功能，现代中医临床证实其对中风和中风后遗症有确切的疗效。科学试验结果已表明，丹参的水溶性酚酸类化合物对血小板有较好的解聚和抑制其粘附凝聚作用，是其有效成分。牛膝中含有的昆虫变态物质杯苋甾酮有蛋白同化作用，试验结果表明其可显著增加小鼠肝脏和肾脏的蛋白质合成能力，且无任何的毒性反应。中风偏瘫病人的显著临床特征是肢体无力，蛋白质同化作用对增加中风偏瘫病人的肌肉力量和改善运动功能障碍具有重要意义。淫羊藿历来是中医补益肝肾，强筋健骨的常用药。现代科学试验证明，淫羊藿总黄酮有促进蛋白质合成作用，可以直接扩张脑血管，增加脑血流量，降低脑血管阻力，对脑缺血有保护作用。以黄芪、丹参、牛膝、淫羊藿的提取物为有效药用组分的本发明上述药物，可以针对中风后遗症病人在改善脑缺血，降低血小板聚集等方面发挥作用；在这些药用超过的基础上再增加银杏叶提取物成分后，银杏叶中所含的黄酮类和内酯类化合物更可在改善脑缺血、改善患者的中枢神经功能、治疗偏瘫等方面具有促进的作用。由于本发明上述药物中的有效药用组分为所用生药原料的提取物，因此在提取物中各相应有效药用成分的有效含量是影响药物效果的重要因素。实验表明，为使药物的效果能得到可靠的保证，所说的各有效药用提取物成分中，黄芪提取物中的总皂甙类化合物重量宜≥50％，黄芪甲甙的重量宜≥2-3％；丹参提取物中的总水溶性酚类化合物重量宜≥50％，丹参素的重量宜≥1％；牛膝提取物中的总甾类化合物的重量宜≥50％，杯苋甾酮的重量宜≥5％；淫羊藿提取物中的总黄酮的重量宜≥50％，淫羊藿甙的重量宜≥3％；银杏叶提取物中的总黄酮重量宜≥20％。
本发明所说的药物，在上述有效药用组分的基础上，根据不同口服剂型的特定制药要求使用相应的辅助添加性成分后，通过相应的常规工艺操作即能得到相应的胶囊、片剂、缓释或控释等不同口服剂型形式的药物，满足不同的需要。
以按生药原料的重量为黄芪50份，丹参10份，牛膝10份，淫羊藿10份和银杏叶10份的比例用上述方法进行提取、且所得提取物中的各相应有效药用化合物成分的含量符合上述要求的提取物，分别制备成不含银杏叶提取物成分的试验药物A，以及含有银杏叶提取物成分的试验药物B，分别进行了毒性试验及相关的药效学试验。
一、急性毒性试验取体重为18-22克的小鼠50只，按体重随机分为5组，每组10只，雌雄各5只，依次分别按5种剂量灌服本发明的上述药物A，灌服后观察7天，逐日记录小鼠毒性反应及死亡数，结果统计如表1所示。
表1小鼠的急性毒性试验结果

对表1结果用Bliss法，以NDST程序计算，本发明上述药物A的LD50＝219.68，其95％的可信限为218.98-220.39。
二、药效学试验(一)急性血瘀大鼠血液流变性和血栓形成的影响试验1.取体重250-300克雌雄各半的Wistar大鼠40只随机分为4组，各组均口服给药，本发明药物A组给药剂量为30g(以生药量计，以下同)/kg，阳性对照组按4.32g/kg给以华佗再造丸，正常对照组和模型组给予同体积生理盐水，每日1次连续给药7日，末次给药1小时后，除正常组外，以0.08ml/100g剂量间隔4小时于皮下各注射肾上腺素注射液1次，第1次注射后2小时时将大鼠浸入冰水中5分钟，处置完毕后停食，次日晨检测。结果如表2所示。
表2对急性血瘀模型大鼠血液流变性的影响(x±S n＝10)

表2结果显示，急性血瘀模型大鼠的血液流变性发生了明显的变化，全血、血浆及血清的粘度增高，给以本发明的药物A可以使血液流变学指标明显改善。
2.对大鼠血栓形成的影响取上述同样的Wistar大鼠40只随机分为4组，药物试验组分别给以本发明上述的药物A和药物B，给药剂量、给药方法及给药途径同上述实验，每日给药1次，连续给药7天，于末次给药1小时后进行实验，检查对血栓形成的影响。结果如表3所示。
表3对剂型血瘀模型大鼠血栓形成的影响(x±S)

表3的结果表明，本发明的药物A和药物B均具有较好的抗血栓形成的作用，且药物B显示的效果可优于药物A。
(二)对大鼠血小板功能及凝血时间的影响试验1.药物A和药物B对大鼠血小板功能的影响取上述同样的Wistar大鼠40只随机分为5组，药物试验组分别给以本发明的上述药物A和药物B，给药剂量、给药方法及给药途径同上述实验，阳性对照药物给予脑血康口服液2.00ml/kg，每日给药1次，连续给药7天，于末次给药1小时后制作血瘀模型，造型后用戊巴比妥钠麻醉，由腹部下腔静脉取血，检测血小板功能的各项指标。实验结果如表4所示。
表4对大鼠血小板功能的影响(x±S n＝8)

表4的结果表明，本发明药物A和药物B均可以显著抑制血小板的粘附性和聚集性，且药物B显示的效果可优于药物A。
2.药物A对大鼠凝血时间的影响取上述大鼠34只随机分为2组，各组均为口服给药，实验组按30g/kg给以本发明药物A，对照组给予同体积生理盐水，30分钟后，用眼科弯镊迅速摘去一侧眼球，即有血液流出。于载玻片两端各滴一滴血，血滴直径约5mm，立即用秒表记时，从采血开始至挑起血丝止，所历时间即为凝血时间。结果如表5所示。
表5对大鼠凝血时间的影响(x±S)

表5的结果显示，本发明药物A可以显著延长大鼠的凝血时间。
(三)大鼠红细胞变形能力和红细胞聚集率的影响实验取上述同样的大鼠30只随机分为3组，各组均口服给药，实验组按30g/kg给以本发明药物A，阳性药物对照组按20mg/kg给予尼莫地平，每日1次，连续给药7天。末次给药1小时后，由腹部下腔静脉取血，测红细胞变形指数和聚集性。实验结果如表6所示。
表6的结果表明，本发明的药物A可以提高红细胞的变形能力，降低红细胞的聚集率。
表6对大鼠红细胞变形能力和红细胞聚集率的影响(x±S n＝10)

(四)对大鼠软脑膜微循环作用的影响取体重163.0±19.0克的雄性Wistar大鼠30只，口服给药，实验组按30g/kg的剂量给以本发明药物A，阳性药物对照组按2.00g生药/kg的剂量给予脑血康口服液，每日给药1次连续给药10天，第11天作微循环检查，用高分子右旋糖酐水溶液静脉注射形成大鼠软脑膜微循环障碍，观察药物对大鼠软脑膜微循环血流速度、血流流态及毛细血管交叉点数的影响。其中1)血流速度，共分5级0级为微血管可见，但无血液细胞通过；I级为微血管内可见血液细胞通过，有时出现血细胞聚集成团，数量较少，逐渐向前运行，时停时进；II级为微血管内血细胞充满管腔，慢向前流动；III级为血细胞充满管腔，流动成线形，但镜下可分出流动中的血细胞；IV级为微血管中血细胞细胞分辩不出来，流动极快速。
实验结果如表7所示。
表7对大鼠软脑膜微循环血流速度的影响(x±S n＝10)

2)血液流态，共分为5级0级无血细胞聚集；I级2-3个血细胞聚集成微细的颗粒状，不影响血流速度；II级4-6个血细胞聚集成颗粒状；III级血细胞聚集成块，影响血流速度；IV级血流停止或形成微血栓。实验结果如表8所示。
表8对大鼠软脑膜微循环血液流态的影响(x±S n＝10)

3)毛细血管交叉点数观察固定区域内固定面积毛细血管与四周边界的交叉点。实验结果如表9所示。
表9对大鼠软脑膜微循环毛细血管交叉点数的影响(x±S n＝10)

表7、表8和表9的结果表明，给以本发明药物A的实验组的血流速度开始减慢的时间明显比生理盐水模型对照组延长，且分级数也明显优于生理盐水组；对高分子右旋糖酐造成的血液流态障碍，本发明药物A组也明显好于生理盐水模型对照组；毛细血管交叉点数开始减少的时间也比生理盐水模型对照组的延长，且差异显著。
(五)对大鼠丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的影响取体重200-250克的Wistar大鼠，本发明药物A的给药剂量、给药途径及给药方法均同上述实验，每日给药1次，连续给药7天，分别在动物末次给药后的第3、6、15、25天麻醉动物后，切开股动脉采血，测定SOD和MAD的含量。测定结果分别如表10和表11所示。其中，表内各栏数据后的括号中数字为被测定动物的只数。
表10本发明药物A对大鼠红细胞内SOD作用的比较

表11本发明药物A对大鼠血浆MDA作用的比较

表10和表11的结果表明，本发明药物A具有良好的升高大鼠红细胞内SOD的含量和降低大鼠血浆MDA的作用，且升高SOD含量的作用出现时间早于降低MDA含量作用的时间。
(六)关于本发明药物中有效药用组分的半成品牛膝提取物的蛋白质同化作用实验将大鼠切除睾丸，饲养2周后，让其按20g/kg的量口服以本发明上述方法得到的牛膝提取物，每日灌胃给药一次，连续15天。停药24小时后处死动物，取出动物的提肛肌，称重；对照组给以甲基睾丸素。试验结果如表12所示。
表12牛膝提取物对去势大鼠提肛肌重量的影响(x±S)

表12的结果表明，本发明药物组合物的有效药用组分之一的牛膝提取物可促进体内蛋白质的合成，具有提高肌肉的作功能力。这对偏瘫病人肢体软弱无力的临床症状有改善作用。
通过上述的相关药效学初步实验的结果均已显示，本发明上述的药物A及药物B的虽组成形式简单，但由于其有效成分十分明确且高度集中，除重点以行之有效的传统方式通过补气和活血化瘀作用对以运动障碍为主要表现的中风后遗症患者的受损脑神经元进行修复外，还能有效地针对患者瘫痪肢体的软弱无力和肌肉萎缩的特点，通过蛋白同化作用的药效，增加肌肉的重量，增强病患肢体的肌肉力量，克服了目前药物大多只是单一作用于某一病理机制环节的不足，通过药物在中风后造成运动障碍后遗症的多种病理机制上产生的共同和协同的药理作用，能明显提高治疗效果。同时，由上述的试验结果也已显示，如采用在药物A的基础上再加入银杏叶提取物成分作为有效药用成分的药物B后，在降低血小板聚集、改善脑缺血、以及改善患者中枢神经功能等方面，则可显示出有更为优异的效果。


本发明涉及的是一种用于预防和治疗中风后遗症的药物组合物，其特征是以天然药用原料黄芪、丹参、牛膝、淫羊藿或还有银杏叶的提取物为有效药用组分，以及在制药中允许使用的适当辅助添加性成分组成，可以制成胶囊、片剂、缓释或控释等常用口服剂型。该药物在可刺激脑神经元，增加脑血流量和活血化瘀的同时，特别还对中风后因肢体运动障碍导致的肌力下降和废用性骨质疏松有特殊的针对性治疗和改善恢复作用。