专利名称：氟化的2,6-二烷基-3,5-二氰基-4-(1h-吲唑-5-基)-1,4-二氢吡啶及其使用方法氟化的2’ 6- 二烷基-3’ 5- 二氰基-4-(1 H-吲唑-5-基)-1, 4- 二氢吡啶及其使用方法本发明涉及具有蛋白酪氨酸激酶抑制活性的新的氟化的2，6- 二烷基-3，5- 二氰基-4-(1Η-吲唑-5-基)-1，4- 二氢吡啶衍生物，其制备方法及其用于治疗c-Met-介导的疾病或c-Met-介导的病症，特别是癌症和其它增殖性疾病的用途。癌症是最常见的广泛传播的疾病之一。在2002年，全世界超过440万人被诊断患有乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、肺癌或前列腺癌，并且超过250万人死于这些致病性疾病 (Globocan 2002 Report, http://www-dep.iarc.fr/globocan/downloads.htm)。仅在美国，预计在2005年有超过125万的新增病例并且有超过500 000人死于癌症。这些新增病例中的大多数预计是结肠ClOO 000)、肺C170 000)、乳腺C210 000)和前列腺C230 000)的癌症。预计在未来十年癌症的发病率和流行率都增加约15%，表现出1.4%的平均增长率(American Cancer Society, Cancer Facts and Figures 2005 ；http://www. cancer, org/docroot/STT/content/STT_lx_Cancer—Facts—Figures_2007.asp)。癌症的发生可以有许多方式，这是它们的治疗很困难的原因之一。一种方式是细胞通过癌蛋白的转化，癌蛋白通过遗传突变来源于正常细胞蛋白质，转化导致这些蛋白质非生理学活化。许多癌蛋白来源的一个家族的蛋白质是酪氨酸激酶(例如，src激酶)，特别是受体酪氨酸激酶(RTKs)。在过去的二十年中，许多方面的研究已经证实受体酪氨酸激酶(RTK)-介导的信号在哺乳动物细胞生长调节中的重要性。近来，临床使用酪氨酸激酶的选择性小分子抑制剂作为抗肿瘤剂已经取得了成果。c-Met受体也是受体酪氨酸激酶。在二十世纪八十年代初鉴定了其致癌潜能，那时从化学诱导的人骨肉瘤细胞系中分离到突变的Met，所述细胞系含有与其N-端的二聚体化功能域稠合的Met基因的激酶结构域[C. S. Cooper等，Nature 311 :29-33 (1984)]。细胞Met蛋白是合成为单链190 kd前体的异二聚化跨膜蛋白质⑴.A. Rodrigues 等，Mol. Cell Biol. 11:2962-70 (1991)]。该前体在氨基酸残基307之后进行细胞内裂解以形成50 kd的α -链和145 kd的β -链，二者通过二硫键连接。α -链完全是细胞外的，而β-链可以跨越质膜。β-链由N-末端的sema结构域组成，该结构域与α-链一起调节配体结合。β-链外功能域的剩余部分由半胱氨酸富集结构域和四个免疫球蛋白功能区组成，其随后为跨膜区域和细胞内结构域。细胞内结构域含有近膜域、激酶结构域和C-末端结构域，其调节下游信号。一旦配体结合，诱导受体的二聚化，激酶结构域通过近膜区域 (Υ1003)、激酶(Υ1234和Y123Q的活化环和羧基-末端结构域(Υ1349和Υ1356)中的酪氨酸自磷酸化步骤的级联活化。磷酸化的Υ1349和Υ1356包含下游c_Met发信号所需的结合接头蛋白的多底物停靠位点[C. Ponzetto等，Cell 77:261-71 (1994)]。c_Met发信号最重要的底物之一是支架(scaffolding)接头蛋白Gabl，其通过异常磷酸酪氨酸结合位点(术语mbS:met结合位点)与Y1349或Y1356结合，导致独特的延长的细胞内信号。另一重要的底物是接头蛋白GA2。根据细胞环境，这些接头物调节各种细胞内信号途径的活化，例如通过ERK/MAPK、PI3K/Akt, Ras, JNK、STAT、NF κ B和β -连环蛋白发信号的那些。c-Met独特地通过肝细胞生长因子(HGF)(还称为分散因子)及其剪接变体活化，这是其已知的唯一生物学活性配体[L. Naldini等，Oncogene 6:501-4 (1991)]。HGF具有独特的结构，其显示与纤溶酶原家族的蛋白水解酶的相似性。它由非酶活性的氨基-末端结构域组成，氨基-末端结构域之后为四个kringle结构域和丝氨酸蛋白酶同源性结构域。与c-Met相似，HGF被合成为非活性单链前体(前-HGF)，非活性单链前体被丝氨酸蛋白酶(例如，纤溶酶原活化剂和凝血因子)细胞外裂解并转化为二硫化物连接的活性α-和 β -链异二聚体。HGF以高亲和力结合硫酸类肝素蛋白多糖，这使其保持主要与细胞外基质结合并限制其扩散。晶体结构分析表明HGF形成二聚体，其一旦与c-Met结合即诱导受体的二聚化。HGF由间质细胞表达，其与特别是在上皮细胞中广泛表达的c-Met结合在各种组织包括上皮细胞、内皮细胞、神经元细胞和造血细胞中导致多效性。该效应通常包括下列现象的一种或全部i)刺激有丝分裂发生；通过对肝细胞的有丝分裂促进活性鉴定出HGF ； )刺激侵入和迁移；在独立的实验方法中，基于其细胞运动性(“分散”)的诱导作用， HGF被鉴定为分散因子；和iii)刺激形态发生(小管发生)。HGF诱导来自犬肾细胞的分枝小管在胶原基质中的形成。此外，来自遗传修饰的小鼠和细胞培养试验的证据表明c-Met 可以作为存活受体并保护细胞免于凋亡[N. Tomita等，Circulation 107:1411-1417 (2003) ；S. Ding 等，Blood 101:4816-4822 (2003) ；Q. Zeng 等，J. Biol. Chem. 277 25203-25208 (2002) ；N. Horiguchi 等，Oncogene 21 :1791-1799 (2002) ；A. Bardelli 等， Embo J. 15 :6205-6212 (1996) ；P. Longati 等，Cell Death Differ. 3 :23-28 (1996)； Ε. Μ. Rosen, Symp. Soc. Exp. Biol. 47:227-234 (1993) ]。HGF 的这些生物学进程的协调执行会产生特异的遗传程序，其被称为“侵袭性生长”。在正常条件下，c-Met和HGF对于小鼠的胚胎发育，特别是对于胎盘和肝的发育以及四肢体节的成肌细胞的定向迁移是必不可少的。c-Met或HGF基因的遗传中断导致相同的表型，这表明它们独特的相互作用。人们对成年生物体中c-Met/HGF的生理学作用了解较少，但实验证据表明它们与伤口愈合、组织再生、造血作用和组织稳态有关。癌蛋白TPR-MET的鉴别是c_Met在肿瘤发生中可能发挥作用的最重要的暗示。其它重要的证据来源于许多不同的实验方法。人和鼠细胞系中c-Met或HGF的过表达诱导肿瘤发生和转移表型(当在裸鼠中表达时)。c-Met或HGF的转基因过表达诱导小鼠的肿瘤发生。更有趣地，已经在散发性和遗传性乳头状肾癌(HPRC)以及其它癌类型例如肺癌、 胃癌、肝癌、头和颈癌、卵巢癌和脑癌中鉴定了 c-Met的错义突变或活化受体的突变。重要地，HPRC家族的特异性c-Met突变与疾病隔离，形成c_Met活化和人癌症之间的因果关系[L. Schmidt 等，Nat. Genet. 16 :68-73 (1997) ；B. Zbar 等，Adv. Cancer Res. 75 163-201 (1998)]。具有最强转化活性的活化突变位于活化环(D12^N/H和Y1230H/D/C) 和邻近的P+1环(M1250T)。已经发现其它较弱的突变接近催化环并在激酶结构域的A叶。 此外，在肺肿瘤中已经观察到c-Met近膜域中的某些突变，其不直接活化激酶，而是通过使蛋白质对遍在蛋白化和随后的降解耐受来稳定蛋白质[M. Kong-Beltran等，Cancer Res. 66 :283-9 (2006) ；Τ. Ε. Taher 等，J. Immunol. 169:3793-800 (2002) ；P. Peschard 等， Mol. Cell 8:995-1004 (2001) ]0有趣地是，c_Met的体细胞突变与各种癌症中增加的侵润性和广泛的转移相关。当种系和体细胞突变的频率较低(低于5%)时，已经观察到其它主要机制，在没有突变的情况下，其通过旁泌性或自身内分泌机制导致c-Met信号脱调节。 在来源于间质细胞的肿瘤例如在生理学上产生HGF的骨肉瘤或横纹肌肉瘤中，以及在外胚层来源的胶质母细胞瘤和乳癌中已经观察到旁泌性活化。然而，最常见的病例是其中C-Met过表达的癌，如在结肠、胰、胃、乳腺、前列腺、卵巢和肝的癌中观察到的。例如，通过基因扩增可以发生过表达，如在胃和肺肿瘤细胞系中观察到的。最近，在获得对EGF受体抑制作用的抗性的肺肿瘤细胞系中检测到c-Met的过表达[J.A. Engelmann 等，Science 316:1039-1043 (2007) ] 某些过表达 c_Met 的上皮性肿瘤也共表达HGF，导致自分泌c-Met/HGF刺激环并从而规避间质细胞来源的HGF的需要。一般而言，已经发现无论其具体机制如何，人癌症中c-Met的异常活化通常与预后不良相关[J. G. Christensen 等，Cancer Lett. 225:1-26 (2005) ] 总之，已经进行了许多证实c-Met为重要的癌靶点的体外和体内研究，全面的列 ^^1 http://www. vai. org/met[C. Birchmeier Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 4 :915-25 (2003) ] 0已经采用许多策略来减弱人肿瘤中异常的Met发信号，包括 HGF拮抗剂和小分子抑制剂等等。目前许多小分子抑制剂正处于临床研发中，例如ARQ-197 (Arqule)、foretinib (XL-880, Exelixis/GSK)和PH-2341066 (Pfizer)；最近已经对它们进行了综述[J. J. Cui, Expert Opin. Ther. Patents 17:1035-45 (2007) ] 在W02006/066011-A2中，在4_位具有芳基或杂芳基的卤代烷基-取代的3_氰基-1，4- 二氢吡啶衍生物已经描述为留体受体和钙通道活性的调节剂，由此特别适用于治疗心血管疾病。使用4-苯基-1，4- 二氢吡啶衍生物治疗阿尔茨海默氏病的方法已经在WO 2006/074419-A2中被要求保护。具有c-Met激酶抑制活性的各种取代的3-氰基_4_杂芳基_1，4_ 二氢吡啶近来被公开在W02008/071451-A1。在这种新结构类型的c-Met抑制剂的进一步研究中，然而， 出现了候选化合物经常受到不能令人满意的口服生物利用率的连累，该口服生物利用率结果是显著低于在大鼠的血液清除率测定中的最初预期。由于口服生物利用率还取决于化合物吸收的多好，和考虑到这些化合物的药物动力学和物理化学性质，假定穿过胃肠道的低溶解度和/或不充分的渗透性可能导致在吸收方面的限制。根据本发明要解决的技术问题因此可以看成鉴别对c-Met激酶具有有效抑制活性的备选化合物，其将(would)显示增加的溶解性和/或渗透性，随后在经口给予这些化合物之后产生增加的级分吸收。令人惊讶地，现在已经发现某些氟化的3，5- 二氰基-4- (1H-吲唑_5_基)_2，6_ 二烷基-1，4- 二氢吡啶衍生物，其中在2和6位的烷基之一具体地代表二氟甲基或三氟甲基基团，展现显著改进的体外渗透性质(如在公认的肠细胞实验中评价)。由此，在一个方面中，本发明涉及通式(I)的氟化的2，6-二烷基-3，5-二氰基-4-(1Η-吲唑-5-基)-1，4- 二氢吡啶衍生物本发明涉及具有蛋白酪氨酸激酶抑制活性的新的氟化的2,6-二烷基-3,5-二氰基-4-(1H-吲唑-5-基)-1,4-二氢吡啶衍生物，其制备方法及其用于治疗c-Met-介导的疾病或c-Met-介导的病症，特别是癌症和其它增殖性疾病的用途。