新大环内酯及其制备方法和应用制作方法

宋勇春, 李方, 梅亚宁, 毕淑峰, 谭仁祥, 郭也

2011年9月7日

2011年1月26日

2011年1月26日

南京大学

C12R1/465GK102174438SQ201110027900

大环内酯 应用

1.一种白蚁内生放线菌，菌株编号为BY-4，其特征是在高氏一号平板上，基内菌丝灰褐色，气生菌丝白色，孢子灰褐色，菌落产生花状边缘；在查氏培养基上状态较特殊，基内菌丝浅黄色，气生菌丝亮黄绿色，孢子褐色；经鉴定为链霉菌属Streptoniyces sp.，现保藏在中国典型培养物保藏中心，地址武汉珞珈山武汉大学内，保藏编号为CCTCC M 2010366，保藏日期为2010年12月27日；从其高氏液体发酵提取物中可以分离纯化获得具有抗菌活性的新大环内酉旨deminamicin2.—种权利要求1所述白蚁内生放线菌制备的大环内酯的结构为3.—种权利要求2所述的大环内酯deminamicin的制备方法，其特征是由以下步骤构成步骤1.将新鲜的从黑翅土白蚁Odontotermes formosanus肠道中分离、纯化得到的放线菌BY-4菌体块接种到在高氏1号培养基，培养基组成为可溶性淀粉20 g，KNO3 1 g， NaCl 0. 5 g, K2HPO4 · 3H20 0. 5 g, MgSO4 · 7H20 0. 5 g, FeSO4 · 7H20 0. 01 g, 1 L 蒸馏水，于摇床上，在140 rpm,28 °C条件下培养5天作为种子液；步骤2.然后将种子液接种于高氏1号培养基中，在140 rpm,28 °C条件下发酵14天； 步骤3.将步骤2所得发酵液经纱布过滤，滤液用乙酸乙酯萃取4次，真空浓缩干燥得黑色粗浸膏Fl ；步骤4.将粗浸膏Fl悬浮于水，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，所得乙酸乙酯萃取液经浓缩得浸膏F2 ；步骤5.对浸膏F2进行硅胶柱层析，依次用4倍体积的氯仿、氯仿甲醇=1001、氯仿 甲醇=1002、氯仿甲醇=1004、氯仿甲醇=1008、氯仿甲醇=10016和甲醇进行洗脱，浓缩氯仿甲醇=1004段得到黑色浸膏F3;步骤6.然后对浸膏F3进行kphadex LH-20分离，洗脱液为甲醇，共得11瓶，将7_9 瓶合并得浸膏F4 ；步骤7.对浸膏F4，用反相硅胶柱进行分离，先用20%甲醇一酒精计测量，进行洗脱除去大极性杂质，然后用45%甲醇洗脱，真空浓缩洗脱液得褐色固体F5 ；步骤8.用高压液相色谱法，色谱柱Allsphere 0DS-2. 5 mm —250R4. 6 mm column在流动相为51%甲醇——酒精计测量、波长为210 nm、流速为2. 0 mL/min的条件下对浸膏F5 进行分离，共出现6个主要成分，保留时间为32. 9 min的第4成分为deminamicin4.根据权利要求2所述的大环内酯在制备抗生素药物中的应用

本发明属于微生物工程技术领域，具体涉及从黑翅土白蚁ft/o/ to termes formosanus (Shiraki)内生放线菌的发酵液中提取到的新大环内酯(deminamicin)及其制备方法与应用