专利名称：含有大环内酯类免疫抑制药物的新颖的药物组合物的制作方法含有大环内酯类免疫抑制药物的新颖的药物组合物描述背景本发明涉及大环内酯类免疫抑制剂诸如他克莫司的新颖的药物组合物。本发明还涉及能够溶解难溶的大环内酯类免疫抑制剂并适合局部(topical)施用的药物组合物。在另外的方面中，本发明涉及这种组合物的治疗用途。免疫抑制剂是降低免疫系统活性的药物化合物。其通常用于治疗自身免疫疾病并预防和治疗器官移植。自身免疫疾病被认为是涉及免疫系统过敏症的一些类型的疾患，目前已知的例如克罗恩病、多发性硬化、类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、艾迪生病及很多其它疾患。器官移植之后，由于供者和接受者之间人白细胞抗原单体型的差异，接受者的免疫系统几乎总是将新器官认定为外源的和潜在敌对的物质，并尝试通过攻击和破坏其细胞组分而将其除去。已开发的用于治疗用途的免疫抑制剂可以根据其化学结构和/或其作用机理而分类。在早期的免疫抑制剂之中特别是抗代谢物，诸如硫唑嘌呤(嘌呤合成抑制剂)和甲氨蝶呤(抗叶酸剂)。第一代大环内酯类特别是环孢素及之后的他克莫司的出现给移植接受者带来了重要的治疗利益。具有相关结构和活性的另外的免疫抑制化合物包括吡美莫司、依维莫司、西罗莫司、deforolimus、依维莫司、坦西莫司(temsirolimus)和佐他莫司(zotarolimus)。最近，开发了对抗参与免疫反应的多种细胞和非细胞靶的抗体和融合蛋白诸如英夫利昔单抗、依那西普、利妥昔单抗、托珠单抗(tocilizumab)和阿巴西普 (abatac印t),并弓I入药品市场。虽然大环内酯类免疫抑制剂诸如他克莫司、西罗莫司、依维莫司及类似物被吸收到生物体或靶组织后是高度活性的，但是大环内酯类免疫抑制剂对于配制及递送到作用部位来说是挑战性化合物，特别是由于其差的溶解度和相对大的分子大小。对于通过口腔或静脉内施用途径的全身治疗，其通常以含有大量的增溶赋形剂诸如表面活性剂和有机溶剂的可溶性制剂存在。在本发明的上下文中特别关注的化合物他克莫司首先被开发为用于稀释后静脉内输注的浓缩液，及口服硬胶囊制剂。在用于输注的浓缩液(当前由Astellas销售，例如作为Prograf )中，他克莫司(5mg)被溶解于乙醇(638mg)和聚乙二醇甘油蓖麻油酸酯 (macrogolglycerolricinoleate, 200mg)的混合物中，很多患者不能很好地耐受该赋形剂， 但是鉴于药品极差的溶解性，该赋形剂仍被认为是必要的。这些全身性制剂被用于预防和治疗器官移植排斥，最频繁地是用于接受肾、肝或心脏移植的患者。最近，他克莫司被开发为用于治疗特应性皮炎的软膏。当前销售的制剂(例如， 在德国，自2002年由Astellas以Protopic 销售)为两种供应规格(分别是0. 3mg/g和 lmg/g)，并含有赋形剂凡士林、液体石蜡、固体石蜡、蜡和碳酸亚丙酯。在对美国和欧洲的成人患者(1、4)及对3-6岁的儿童03、25)的不同的安慰剂对照的多中心临床研究中证明了他克莫司在治疗特应性皮炎中的疗效。局部的他克莫司在治疗接触性皮炎中也显示出效果(15、16)。相反，对于银屑病治疗，局部的他克莫司的实验性使用总体来说没有成功，即使银屑病已被清楚地确定为自身免疫疾病，可能是由于银屑病斑块的厚度和结构，该可厚度和结构可表示对活性成分的渗透和吸收相当大的扩散屏障 (11、30)。仅在一些特殊的情况下，获得了相对的阳性结果，例如通过施加封闭条件02)、利用脂质体制剂(8)、或通过治疗相对薄的面部皮肤或在皱纹中施用药物(10、14、17、18、26、 28,29)。
然而，应注意，这种特殊的情况存在许多缺点。例如，皮肤封闭(skin occlusion) 不仅被患者认为是令人不愉快的，而且很难适宜于皮肤的某些区域(例如，面部、褶皱中、 靠近关节处等等)，且在大面积或多发的受侵袭部位的情况下通常是不可接受的。脂质体制剂因其在工业规模上不便于以可重现的方式制造，所以是不利的。此外，其难以灭菌或在无菌状态下生产，而这是所期望的，因为产品不是用在未受损的皮肤上，而是用在不利地受影响的皮肤上。仅治疗受影响的皮肤的某些部位显然存在其它受影响的部位仍然未被治疗或较差地被治疗的缺点。
他克莫司的常规软膏制剂的有限的效果还可通过以下事实表明，当前可获得的局部他克莫司产品(Protopic )仅被批准用于治疗特应性皮炎，而不是银屑病。
其它大环内酯类免疫抑制剂像他克莫司一样是难溶的并且是相对大的分子，其也难于配制且对于渗透银屑病斑块可能具有相同的限制。这些化合物都没有成功地开发为用于银屑病治疗的局部制剂。
因此，对适合于并有效治疗除特应性皮炎外的其它疾患的大环内酯类免疫抑制剂化合物诸如他克莫司的改善的局部制剂存在需求。具体地，对利用不需要封闭、掺入脂质体、便于以大规模制造和/或不具有当今已知的组合物的一种或多种缺点的制剂的用于治疗银屑病的局部药物存在需求。
本发明的一个目的是提供这种组合物。另外的目的是提供大环内酯类免疫抑制剂化合物的组合物的有益用途及用于制备这种组合物的方法。根据说明书和专利权利要求将理解又一些另外的目的。
注意到WO 03/053405A1公开了用于眼科使用并被建议用于治疗干眼综合征的乳液。乳液具有150nm至250nm的液滴大小(第7页，13行)，且因此是常规乳液，与微乳 (microemulsion)相反，常规乳液并不自发地形成，并且是热力学不稳定的且光学上各向异性的。此外，乳液包含大于90%的水和阳离子型表面活性剂。不存在这些组合物可用于向皮肤施用的暗示。
EP 1929996A2也描述了用于眼科使用的水包油型乳液。乳液具有IOOnm至250nm 的优选的粒度(第4页，W038]段)并通过需要能量输入的常规乳化技术制备(第5页，
段)，其产生与微乳相反的热力学不稳定的且光学上各向异性的常规乳液。文件没有公开该乳液用于治疗皮肤的用途。
WO 2006/062334A1公开了所谓的微乳预浓缩物(也称为自微乳化药物递送系统或SMEDDS)，加入水相后该微乳预浓缩物自发地形成微乳。预浓缩物填充到例如胶囊中并用于口服施用。预浓缩物的发明人发现，口服摄入后组合物产生他克莫司的更高的全身性生物利用度。
US 2003/0143250A1描述了含有活性成分环孢素的微乳预浓缩物，口服施用后其实现了所掺入药物的高的全身生物利用度和低的受治疗者间差异性(第18页，W257]至W259]段)。文件没有公开除环孢素外的其它药物。
GB 2315216A涉及用于口服施用的他克莫司的自微乳化及微乳组合物。再次，该组合物实现了所掺入药品的改善的血浆水平。文件没有教导除口服施用外的其它用途。
US 2003/0059470A1教导了由常规方法制备并具有IOOnm高至10 μ m，优选200nm 至500nm的范围内的液滴尺寸且因此是热力学不稳定的且光学上各向异性的水包油乳液 (第 5 页，
段)。
WO 2006/123354A2提供了用于口服使用的疏水性药物的无水自微乳化组合物 (或微乳预浓缩物，或SMEDDS)，加入水相后该组合物可形成微乳。文件没有教导除口服施用外的其它用途。
发明概述
本发明提供了包含选自大环内酯类免疫抑制剂的组的治疗活性成分、亲水性组分、亲脂性组分和两亲性组分的药物组合物。该组合物特征还在于其被配制为微乳。
在特别有用的实施方案中，本发明提供了包含他克莫司作为活性成分的液体微乳。亲水性组分、亲脂性组分和两亲性组分的成分优选地选自被皮肤和/或粘膜很好地耐受的赋形剂。具体地，优选他克莫司微乳包含水。
亲水性组分可包括与一种或多种液体二醇诸如甘油、丙二醇、戊二醇和/或聚乙二醇联合的水。亲脂性组分可包括在化妆品或皮肤制剂中使用的一种或多种油性赋形剂， 诸如十四烷酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、己二酸二丁酯、己二酸二异丙酯和/或甘油三酯。两亲性组分通常包括一种或多种表面活性剂，诸如磷脂、烷基聚葡糖苷、脂肪酸的脱水山梨糖醇酯和/或脂肪酸的聚乙二醇甘油单酯和甘油二酯。
本发明还提供了包含大环内酯类免疫抑制剂的微乳组合物用于局部治疗诸如用于对皮肤、粘膜或眼部施用的用途。此外，其提供了这种组合物用于治疗疾病和疾患诸如特应性皮炎、银屑病、胶原性疾病、炎性肠病、炎性眼病或移植排斥的用途。
在又一个方面中，本发明提供了用于制备这种组合物的方法。该方法特征在于在没有施加高剪切条件或压力均化下合并并混合组合物的成分。
发明详述
根据本发明，提供了包含选自大环内酯类免疫抑制剂的组的治疗活性成分、亲水性组分、亲脂性组分和两亲性组分的药物组合物。该组合物特征还在于其被配制为微乳剂。
如本文所用的，药物组合物表示包含至少一种药物活性化合物和至少一种赋形剂的组合物，其中组合物以适合于向人或动物施用的方式被配制和加工。在本发明的情况下， 活性成分是大环内酯类免疫抑制剂，即抑制免疫系统活性或其至少一种组分且包括大环内酯环结构的化合物，大环内酯环结构通常被定义为可连接一个或多个脱氧糖残基的相对大的大环的内酯环(例如，在大环内酯类抗生素的情况下14-16个成员且在本文关注的大环内酯类免疫抑制剂的情况下通常大于20个环成员)。
对于实施本发明有用的大环内酯类免疫抑制剂包括西罗莫司、依维莫司、他克莫司、吡美莫司、ridaforolimus、坦西莫司和佐他莫司。特别优选的是吡美莫司、西罗莫司、 依维莫司和他克莫司。如本文所用的，理解这些非专有名称以包括相应有效成分的任何盐、 溶剂化物、异构体、缀合物(conjugate)或其它密切相关的衍生物。在一个特定的实施方案中，活性成分是他克莫司一水合物(在下文中也称为“他克莫司”)。
他克莫司(C44H69N012*H20，MW 822.05)是熔点为127_U9°C的大环内酯类内酯。其展现出分别为9. 97士0.7和-2. 38士0.7的两个pks值。其水溶性在1_10的pH范围内极差，且仅在PH 10以上其水溶性增加约两倍04)。其溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯和乙醚中00)。其高度的亲脂性也由其log 纟为3. 96士0. 83的分配系数反映 04)。
1984年在日本首次将他克莫司从细菌筑波链霉菌(Sti^ptomyces tsukubaensis) 中分离出来。名称他克莫司(Tacrolimus)源于其所发现的地点筑波(IsukiAa)、其化学核心结构即大环内酯(macrolide),及其作为免疫抑制剂(inmposuppressant)的活性。其免疫抑制活性在体外比环孢素的免疫抑制活性高50-100倍，而在体内比环孢素的免疫抑制活性高10-20倍。尽管他克莫司和环孢素在化学上并不十分密切地相关，但是显示其作用机制是相同的或至少十分相似的。一般来说，其通过抑制编码相应细胞因子的基因的转录过程而阻断白细介素-1从巨噬细胞中释放及白细胞介素-2从辅助T细胞中释放。
本发明的组合物中活性化合物的含量通常考虑以下来选择化合物在赋形剂混合物或载体中的溶解度，和所期望的产品应用，例如考虑应该施用的制剂的体积，所述制剂的体积可受到施用位点(例如眼部)的性质的限制。在他克莫司的情况下，组合物中的含量或浓度通常在约0. OOOOlwt. 至约20wt. - %的范围内。更优选地，选择在约0. Olwt.-% 至Iwt. 的范围内。在特定的实施方案中，组合物分别包含约0. 03wt.05wt.-%, 0. lwt. 3wt.5wt. 和 1. Owt. -%。
本发明的组合物特征还在于其是微乳。如本文所用的，微乳是亲脂性组分、亲水性组分和两亲性组分的澄清的、热力学稳定的、光学上各向同性的混合物。通常地，微乳在组分彼此合并并混合后自发地形成微乳，而不需要如形成“普通”乳液通常所需要的高能量输入。微乳可具有分散于亲水相中的胶体亲脂相，或胶体地分散于亲脂相中的亲水相。分散相的大小通常在约5nm至约400nm的范围内，且最通常地低于约200nm。在本发明的一个优选的实施方案中，粒度为约5nm至约lOOnm。
根据其流变性质，微乳可以是液体或凝胶的形式，即液体或半固体形式。在优选的实施方案中，微乳是液体形式。
组合物特征还在于其包含亲水性组分。如本文所用的，组分是药学上可接受的赋形剂或赋形剂的混合物，且在本上下文中亲水性表示组分与水可混溶，或至少基本上溶于水。最优选地，亲水性组分是液体。例如，亲水性组分可以包括水本身(包括主要为水的溶液诸如缓冲液等等)、液体极性溶剂或水与一种或多种此类极性溶剂的混合物。有用的极性溶剂包括例如醇，诸如乙醇和液体二醇。特别优选的二醇包括甘油、丙二醇、液体聚乙二醇和 1,2-戊二醇(1,2-pentane diol，本文中还称为戊二醇(pentylene glycol))。
在本上下文中二醇诸如丙二醇和戊二醇是特别优选的剂，因其展现出一些有利的作用。除了作为亲水性组分的成分以外，其极好地被皮肤耐受。此外，二醇具有小的相对亲脂性分子区域，由于该区域，还可在某种程度上认为二醇是两亲性的，因此加强了组合物的两亲性组分的功能性并增强了难溶于水的成分的溶解。二醇对皮肤和毛发高度亲和。此外， 其展现出显著的抗微生物性质，以致其允许在没有任何另外的防腐剂的情况下或以降低的防腐剂水平配制水性局部组合物的制剂。
此外，优选的亲水性组分包括(a)水和(b)液体二醇的混合物，诸如水与丙二醇或水与戊二醇的混合物。对于这种混合物，可以自由地选择水与二醇(或多种二醇)的比。更优选地，比在从约1 10至约10 1的范围内。在另外的实施方案中，比分别在从1 3至 3 1或从1 2至2 1的范围内。有用的亲水性组分的实例包括水与戊二醇O 1)、 水与丙二醇(1:2)。
如所提到的，亲水性组分可包含水。含水量相对于总体组合物的重量优选地为至少约5wt.-%。虽然现有技术中已描述了某些活性药物成分的无水微乳和自微乳化组合物 (self-microemulsiifying composition)，但是难以想象这些组合物用于局部施用。例如， 存在于皮肤或粘膜中的有限量的水通常不能实现自微乳化组合物转化成微乳。无论如何， 发明人已发现，当亲水性组分本身包含水时，诸如相对于总体组合物至少约5wt. 的水， 或甚至分别地至少IOwt.或至少20wt.-%，本发明对于局部施用大环内酯类免疫抑制剂是特别有用的。实际上，展现优良的性质(诸如良好的皮肤渗透和局部耐受性)的制剂可含有多达40wt. -%>45wt. -%>50wt. 或更多的水。因此，组合物的亲水性组分可占总体组合物的显著重量分数的诸如至少约20wt. -%、或甚至在约50wt. 至约80wt. 的范围内。
组合物的另一个基本组分是亲脂性组分。在微乳中，亲脂性组分主要引起胶体分散的亲脂相的形成。亲脂性组分可以包括能够形成亲脂相的任何合适的药学上可接受的亲脂性赋形剂或赋形剂的混合物。可作为亲脂性组分单独使用或彼此组合使用的优选的赋形剂包括被皮肤和/或粘膜良好耐受的油性化合物，诸如甘油三酯油、液体石蜡、液体蜡，且特别是化合物十四烷酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、己二酸二丁酯、己二酸二异丁酯。
优选地，亲脂性组分被选择为在微乳中产生分散的亲脂相，以致组合物为水包油微乳的形式。微乳中分散的亲脂相的粒度优选在5nm至200nm的范围内，且特别是在5nm 至IOOnm的范围内。
还优选亲脂性组分的含量保持在相对于总体组合物的约50wt.-%或低于约 50wt. _%，以允许高含量的亲水性组分。在另外的实施方案中，亲脂性组分分别以不超过约 30wt. 或不超过约20wt. 的量存在。另一方面，亲脂相的量应该足够高以溶解大量或全部活性成分。在他克莫司的情况下，例如，包含0. 的活性成分和显著量的含水的亲水性组分(例如，50-80wt.-% )的稳定的微乳组合物可以由例如IOwt. 的包含己二酸二丁酯的亲脂性组分配制。
根据本发明，组合物包含作为另一个基本特征的两亲性组分。实际上，两亲性组分的存在是形成微乳的基本要求。两亲性组分包含至少一种且任选地至少两种两亲性赋形剂，例如表面活性剂。在优选的实施方案中，两种或更多种表面活性剂的组合存在于两亲性组分中。
应注意，在药物领域或化妆品领域中通常使用的表面活性剂中的一些表面活性剂实际上是化学相关的分子的混合物。还应注意，关于微乳的技术文献经常提到表面活性剂和助表面活性剂，甚至在其间不存在功能差异，而在本发明的上下文中简单地称为表面活性剂，而没有使用术语助表面活性剂。表面活性剂也可被称为乳化剂。
作为两亲性组分的成分，可以选择适合于药物用途的任何两亲性赋形剂。优选地， 两亲性组分包括施用到皮肤和/或粘膜之后生理学上良好耐受的表面活性剂。例如，一种或多种表面活性剂可以选自以下的组磷脂、烷基聚葡糖苷、脂肪酸的脱水山梨糖醇酯、脂肪醇(例如月桂醇、硬脂醇、鲸蜡醇或棕榈醇)的聚烷撑二醇醚和/或脂肪酸的聚乙二醇甘油单酯和甘油二酯。特别适合的表面活性剂的实例是卵磷脂特别是主要由磷脂、纯化或合成的磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油组成的那些，脱水山梨糖醇单油酸酯，聚乙二醇单硬脂酸酯， 脂肪醇的聚乙二醇醚诸如聚氧乙烯(4)月桂醚，烷基(聚)葡糖苷诸如癸基葡糖苷。
优选的表面活性剂的混合物包括(a)卵磷脂与烷基聚葡糖苷的组合、(b)卵磷脂与脱水山梨糖醇单油酸酯的组合和(c)卵磷脂与聚乙二醇单硬脂酸酯的组合。在二元混合物中第一表面活性剂和第二表面活性剂之间的合适的比通常在约1 10至约10 1的范围内，且优选在约3 1至1 3的范围内。
在微乳组合物中两亲性组分的量通常应该选择低于65wt.-%，且更优选地在约 15wt. 至约35wt. 的范围内。实际上，本发明的一个具体的益处是即使在相对低的表面活性剂含量诸如25wt. 或30wt. 下，难溶的大环内酯类诸如他克莫司可被配制成包含溶解形式的活性成分的良好耐受的组合物来局部使用。
在另外的方面中，优选组合物包含亲水性组分的量比两亲性组分的量大，即亲水性组分与两亲性组分的比优选为1 1或更高，诸如在约1 1至3 1的范围内。发明人已发现，这个比调和了在微乳中溶解大环内酯类免疫抑制剂的需求与对患者提供被皮肤和粘膜良好耐受且同时易于被皮肤或粘膜吸收而不留下油性残留物的制剂的需求。
除了被描述为实施本发明必须的组分和赋形剂以外，根据需要，组合物可包含另外的成分。例如，其可含有另外的活性成分，例如皮质类固醇、抗生素、抗霉菌剂和/或抗病毒剂。此外，其可包含一种或多种另外的赋形剂，诸如用于调节PH的剂(例如酸、缓冲盐、碱)、抗氧化剂(例如抗坏血酸、维生素E及其衍生物、ΒΗΤ、BHA, EDTA 二钠，等等)、 防腐剂(例如阳离子表面活性剂诸如苯扎氯铵；苄醇、山梨酸等等)、渗透促进剂(DMS0、 Transcutol 、薄荷醇、油酸、正烷醇、I-烷基-2-吡咯烷酮、N，N-二甲基烷酰胺(N， N-dimethlyalkanamide)和 1，2_ 烷二醇，等等)及类似物。
本发明的组合物因其为微乳形式而易于制造并放大为工业化生产。即使不存在高剪切条件或压力均化，随着成分合并并混合在一起，该组合物形成。因此，可以利用适合于以合适的规模制备液体药物制剂的任何标准混合装置来制备组合物。任选地，超声处理合并的成分可用于加速均勻的微乳的形成。
在另外的方面中，本发明提供了以上描述的组合物作为药物的用途。特别有益的是用于局部治疗的用途，所述局部治疗还包括局部施用，即对皮肤施用或对粘膜诸如口腔或鼻腔粘膜、眼部粘膜，或小肠或大肠粘膜施用。在一个特定的实施方案中，组合物被用于对皮肤施用。
优选地，局部使用不包括封闭条件。实际上，发明人发现，对于组合物将其活性成分有效地递送到皮肤的目标层特别是真皮来说封闭是不需要的。这是本发明重要的且未料想到的益处，并潜在地实现了需要封闭条件时患者通常无法耐受的较大皮肤面积的治疗。
其中组合物的治疗用途是有益的疾病和疾患具体包括涉及炎性过程和/或自体免疫过程的疾患，诸如特应性皮炎、银屑病、胶原性疾病、炎性肠病、炎性眼病和/或移植排斥。与现有技术大环内酯类抑制剂的组合物相比，本发明的组合物具有允许有效治疗银屑病的性质，且这种治疗用途构成了本发明的一个优选的实施方案。另外的可能的用途包括慢性伤口和烧伤。如本文所用的，治疗用途被理解为包括根治疗法和预防疗法两者。
另外的实施方案将从以下实施例中变得明显，以下实施例说明本发明的一些主要方面而不限制其范围。实施例
实施例1 制备含有他克莫司的含水微乳
通过合并并混合各自的成分配制和制备了根据本发明的四种不同的微乳组合物。 表1至表7中显示了该组合物。混合后自发形成了透明的或略微乳色的微乳。在室温下存储三个月之后，视觉上检查三种微乳的样品。未发现物理不稳定性的迹象。
表

本发明提供了大环内酯类免疫抑制剂的新颖的药物组合物。组合物包括亲水性组分、亲脂性组分和两亲性组分。优选地，组合物被配制为液体微乳。此外，本发明提供了这种组合物的用途，诸如用于局部治疗炎性疾病和自身免疫疾病。还提供了用于制备该组合物的方法。