专利名称：：miRNA分子及其应用的制作方法技术领域：，具体是涉及一种miRNA分子及其应用：微RNA(miRNA)是一类自然存在的长度约17_25个碱基，非编码小RNA，在生物中是保守的，小鼠的miRNA序列约三分之一与人的miRNA序列完全一致。miRNA基因在核内经过RNA聚合酶转录为初级前体miRNA(pri-miRNA)，经过初步加工成为前体miRNA(pre-miRNA)，再经过转运蛋白的协助从细胞核进入细胞质，在胞质中经过进一步加工，成为长度约23个碱基的成熟miRNA，成熟miRNA与相关蛋白形成miRISC复合物调控相关蛋白的表达。miRNA广泛参与从细胞到整体的生命全过程，估计超过三分之一的人类基因受miRNA调控。miRNA统一收录在英国Sanger中心的miRNA数据库中(http://www.sanger.ac.ck/),目前在该数据库中注册的人类(Homosapiens)miRNA为1921条，小鼠(Musmusculus)的为1151,大鼠(Rattusnorvegicus)的为680条(Griffiths-JonesS,SainiHK，vanDongenS，EnrightAJ.2008.miRBasetoolsformicroRNAgenomics.NucleicAcidsRes36:D154_158)。肿瘤是严重影响人们生活的重大疾病，据世界卫生组织统计，根据目前癌症的发病趋势，2020年全世界癌症发病率将比现在增加50%，全球每年新增癌症患者人数将达到1500万人。我国卫生部2008年4月29日公布的第三次全国居民死亡原因调查结果显示，中国每年癌症新发病例为220万人，因癌症死亡人数为160万人。近20年来，中国每4-5个死亡者中就有一个死于癌症，居各种因素导致的死亡原因之首，肺癌已取代肝癌成为我国首位恶性肿瘤死亡原因；也是全世界癌症患者的主要死因，近10年来肺癌的治疗未能取得突破性进展，处于平台期(JemalA，SiegelR，WardE，etal.Cancerstatistics，(2008)CACancerJClin.58(2):71-96.；GilliganDiNicolsonMiSmithLetal.(2007)Preoperativechemotherapyinpatientswithresectablenon-smallcelllungcancerresultsoftheMRCLU22/NVALT2/E0RTC08012multicentrerandomisedtrialandupdateofsystematicreview.Lancet.369(9577):1929-37.)。早发现、早治疗是减少癌症死亡率最有效的方法，实施对肠癌、宫颈癌、乳腺癌等的普查制度，可使全世界癌症死亡人数减少三分之一，目前在发展中国家，80%的癌症患者都是在患病晚期才被发现，丧失了最佳治疗时间。成熟miR-139_5p的序列是通过克隆测序获得(LandgrafP，RusuM，SheridanR，SewerA，IovinoN，AravinA，PfefferS，RiceA，KamphorstA0,LandthalerM，LinC，SocciND，HermidaL，FulciV，ChiarettiS，FoaR，SchliwkaJ，FuchsU，NovoselA，MullerRU，SchermerB，BisselsU，InmanJ，PhanQ，Chien，(2007)AmammalianmicroRNAexpressionatlasbasedonsmallRNAlibrarysequencing，MCell.1291401-1414·)，miR-139_5p在结肠癌(ChangKH,MillerN，KheirelseidEA,LemetreC，BallGR,SmithMJ,ReganM，McAnena0J,KerinMJ.MicroRNAsignatureanalysisincolorectalcancer!identificationofexpressionprofilesinstageIItumorsassociatedwithaggressivedisease.IntJColorectalDis.Inpress)、前列腺癌(YoshinoH，ChiyomaruT，EnokidaH，KawakamiK，TataranoS，NishiyamaK，NohataN，SekiN，NakagawaM.2011Thetumour-suppressivefunctionofmiR—1andmiR_133atargetingTAGLN2inbladdercancer.BrJCancer.INpress)、肾脏癌(FridmanEiDotanZ，BarshackI，DavidMB，DovA，TabakS，Zion0，BenjaminS，BenjaminH，KukerH，AviviC，RosenblattK，Polak-CharconS，RamonJ，RosenfeldN，SpectorY.201IAccuratemolecularclassificationofrenaltumorsusingmicroRNAexpression.JMolDiagn.INpress.)、胃癌(GuoJ，MiaoY，XiaoB，HuanR，JiangZ，MengD，WangY.2009DifferentialexpressionofmicroRNAspeciesinhumangastriccancerversusnon-tumoroustissues.JGastroenterolHepatol.24(4):652-7)等组织中低表达，其表达量与这些疾病有一定的相关性。DNA是脱氧核糖核酸组成的，4种主要的组成核酸包括脱氧腺嘌呤核苷酸(dA)，脱氧鸟嘌呤核苷酸(dG)，脱氧胸腺嘧啶核苷酸(dT)，脱氧胞嘧啶核苷酸(dC);RNA是由核糖核酸组成的，4种主要组成核酸包括腺嘌呤核苷酸(A)，鸟嘌呤核苷酸(G)，尿嘧啶核苷酸(U)，胞嘧啶核苷酸(C).DNA与RNA在碱基组成上的主要区别是DNA用的是dT，而RNA用的是U,另外dA,dC，dG分别比A，C，G碱基在核糖2位上少一个羟基-0H.自然存在的核苷酸是由三部分组成的碱基，核糖，磷酸.在分子生物学应用中碱基，核糖，磷酸可以分别被修饰或集团替换，在提高核苷酸的稳定性的同时，而不影响该核苷酸发挥生物学功能.自然存在的RNA形式及常见的修饰方法见下图.权利要求1.一种miRNA分子，其特征在于，其碱基组成为SEQIDNO.I、或SEQIDNO.I和SEQIDNO.2、或SEQIDNO.3、或SEQIDNO.4或SEQIDNO.10。2.一种miRNA分子，其特征在于，其碱基组成为SEQIDNO.I、或SEQIDNO.I和SEQIDNO.2、或SEQIDNO.3、或SEQIDNO.4，且含有修饰的核苷酸类似物，该修饰的核苷酸类似物为糖基修饰或骨架修饰或碱基修饰或末端修饰的核苷酸。3.根据权利要求2所述的miRNA分子，其特征在于，所述核苷酸类似物是糖基修饰的核糖核苷酸，核糖核苷酸的2’-羟基被置换为H、OR、R、卤素、SH、SRI、NH2、NHR、NR2或CN，其中R是C1-C20的烷基、烯基、共轭基、或炔基，所述卤素是F、Cl、Br或I。4.根据权利要求2所述的miRNA分子，其特征在于，所述核苷酸类似物是糖基修饰的核糖核苷酸，核糖被置换为核糖类似物结构为C3_3(l02_15N1^15Sh8Xu，该结构中包括双环或多环核糖，无环核糖，或肽核苷酸，其中X是F、Cl、Br或I。5.根据权利要求2所述的miRNA分子，其特征在于，所述修饰核苷酸类似物是含有修饰的非天然碱基的核苷酸，其碱基结构为(VmOuNuSuXu，该结构中包括有含嘌呤碱基类似物、嘧啶碱基类似物、化学或光交联基团，其中X是F、Cl、Br或I。6.根据权利要求2所述的miRNA分子，其特征在于，所述末端修饰饰的核苷酸的结构为该结构中包括有胆固醇、生物素、胆酸、叶酸、维生素、或荧光分子，其中X是F、Cl、Br或I。7.权利要求1-6任一项所述的miRNA分子在制备治疗肿瘤的药物中的应用。8.根据权利要求7所述的应用，所述肿瘤为肺癌、肝癌、乳腺癌、子宫颈癌、结肠直肠癌。9.利要求1-6任一项所述的miRNA分子作为肿瘤诊断标记物的应用。10.一种治疗肿瘤的药用组合物，其活性成包括有权利要求1-6任一项所述的核酸分子。全文摘要本发明提供一种miRNA分子，其碱基组成为SEQIDNO.1、或SEQIDNO.1和SEQIDNO.2、或SEQIDNO.3、或SEQIDNO.4或SEQIDNO.10；或其碱基组成为SEQIDNO.1、或SEQIDNO.1和SEQIDNO.2、或SEQIDNO.3、或SEQIDNO.4，且含有修饰的核苷酸类似物，该修饰的核苷酸类似物为糖基修饰或骨架修饰或碱基修饰或末端修饰的核苷酸。用该miRNA分子制备得到的治疗肿瘤的药用组合物，能有效抑制肿瘤的形成和发展。文档编号C12Q1/68GK102604952SQ20121007225公开日2012年7月25日申请日期2012年3月16日优先权日2012年3月16日发明者何建行,冯世鹏,张必良,张鑫,王玮申请人:广州市锐博生物科技有限公司