专利名称：一种抗鲍曼不动杆菌的药物组合物及其用途的制作方法鲍曼不动杆菌是引起院内感染的重要致病菌，而多重耐药鲍曼不动杆菌感染的治疗已经成为临床一大难题。抗假单胞菌碳青霉烯类抗生素，如亚胺培南、美罗培南是治疗多重耐药鲍曼不动杆菌感染的最主要药物。但是，有报道指出碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌(carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii，CRAB)已在世界范围内广泛传播，导致了严重的公共卫生问题。而临床可选择的用于治疗CRAB的抗生素非常有限，而新开发的抗菌药物对于该类耐药鲍曼不动杆菌的抗菌活性也不甚理想。因此，合理地运用现有抗菌药物才是更为实际的应对策略。舒巴坦除了众所周知的β -内酰胺酶抑制作用外，它还可作用于鲍曼不动杆菌的 ΡΒΡ2，从而发挥固有的抗菌作用(Corbella X，Ariza J, Ardanuy C, Vuelta M, Tubau F, Sora Μ, et al. Efficacy of sulbactam alone and in combination with ampicillin in nosocomial infections caused by multiresistant Acinetobacter baumannii. J Antimicrob Chemother. 1998 Dec ；42 (6) :793-802)，但是 CRAB 对舒巴坦敏感率较低而中介率较高，限制了舒巴坦的使用(汪复，朱德妹，胡付品，2008年中国CHINET细菌耐药性监测，中国感染与化疗杂志，2009 Dec, 9 (5) :321-29)。研究表明联合应用具有协同作用的抗菌药物有可能成为攻克上述难题的出路。几项回顾性研究结果肯定了联合使用β内酰胺类与β内酰胺酶抑制剂对多重耐药不动杆菌的抗菌作用，它们降低了死亡率与药物的肾毒性。数项体外研究结果显示了舒巴坦与头孢吡肟、阿米卡星、利福平等抗生素联合使用，可增强对鲍曼不动杆菌的抗菌活性，但是活性仍然很有限。
因此，本发明的目的是提供一种抗鲍曼不动杆菌活性增强的药物组合物，从而能够更有效预防和/或治疗由鲍曼不动杆菌引发的感染性疾病。用于实现上述目的的技术方案如下—种抗鲍曼不动杆菌的药物组合物，其中包含美罗培南和舒巴坦，美罗培南和舒巴坦的重量比可以为1 2-4。具体来说，该药物组合物可以包含重量比为1 2-4的美罗培南和舒巴坦，最佳的重量比为1 4。该药物组合物还可以包含药学上可接受的载体和/或赋形剂；该药物组合物可以为选自注射剂、冻干粉针制剂、片剂、胶囊剂，口含剂，滴丸剂的剂型。本发明还提供了上述药物组合物在制备抗鲍曼不动杆菌的药物中的用途。本发明进一步提供了上述药物组合物在制备预防和/或治疗鲍曼不动杆菌引起的疾病的药物中的用途。对于上述用途而言，鲍曼不动杆菌可以为碳青霉烯类抗生素敏感鲍曼不动杆菌和 /或碳青霉烯类抗生素耐药的鲍曼不动杆菌，优选为碳青霉烯类抗生素耐药的鲍曼不动杆菌。上述疾病具体为感染；优选为呼吸机相关性肺炎、败血症、尿路感染和伤口感染中的一种或多种。鲍曼不动杆菌是引起院内感染，尤其是呼吸机相关性肺炎、败血症、尿路感染、伤口感染等的重要病原菌。鲍曼不动杆菌具备从其他种类的病原菌获得耐药基因从而抵抗抗生素的能力，其最终可以形成多重耐药鲍曼不动杆菌，这给临床经验性用药提出了难题。加之其在环境中尤其是医疗设备表面上顽强的生存能力，使得鲍曼不动杆菌对院内感染的威胁日益严重。2008年中国CHINET细菌耐药性监测数据显示鲍曼不动杆菌对亚胺培南及美罗培南的耐药率为分别为48. 和49. 3%，对阿米卡星、米诺环素、头孢吡肟、环丙沙星等的耐药率均在50% 70%。许多文献报道了全世界范围内多重耐药鲍曼不动杆菌的播散流行。本发明应用棋盘法设计，微量肉汤稀释法测定评估了美罗培南与舒巴坦联合使用对碳青霉烯类敏感及耐药的鲍曼不动杆菌的协同抗菌作用。本发明选择了临床分离的美罗培南敏感及耐药的鲍曼不动杆菌，以便更好地说明美罗培南和舒巴坦联合应用的相互作用。棋盘法美罗培南敏感菌株联合药敏试验结果显示协同作用为24. 4% (10/41)，部分协同为68. 3% 08/41)，相加作用为7. 3% (3/41)，无关与拮抗作用均为0%；而美罗培南耐药菌株联合药敏试验结果显示协同作用为27. 5% (11/40)，部分协同为40% (16/40)，相加作用为25% (10/40)，无关为7. 5% (3/40)，无菌株存在拮抗作用。由这些结果可以看出， 无论是美罗培南耐药菌株还是美罗培南敏感菌株，其中大多数对于美罗培南和舒巴坦的联合使用表现出协同和部分协同作用，其中表现为协同作用的(即两种药物MIC值都下降到原来的1/4以下)约占25%。另外，值得注意的是所测试的美罗培南耐药菌株及美罗培南敏感菌株中均无表现为拮抗的。国外研究已有体外实验结果显示亚胺培南联合阿米卡星、氨苄西林舒巴坦联合阿米卡星对鲍曼不动杆菌表现出协同或部分协同的抗菌作用，但其实验菌株数只有1 4株。Carlos等测试了 48株临床分离的鲍曼不动杆菌，其中亚胺培南耐药菌株的比例为22. 9%，其美罗培南与舒巴坦联合药敏结果显示协同与部分协同作用分别为29. 2%和 47.9%，占实验菌株较大比例，与本发明的研究结果较一致。但该实验结果中存在3株表现为拮抗的菌株，最大Σ FIC达到8，而本发明并未发现此类菌株。Ko等用时间杀菌曲线证明了美罗培南联合舒巴坦对一株鲍曼不动杆菌的协同抗菌作用。由此可见，美罗培南联合舒巴坦对于部分鲍曼不动菌株存在协同和部分协同作用。尽管重量比为1 1的美罗培南与舒巴坦的协同作用已经被公开，但是与现有技术相比，本发明的优势在于将重量比为 1 2-4的美罗培南与舒巴坦联合使用，没有表现为的拮抗菌株，实验所用菌株范围更广。 具体地，研究对象包括41株美罗培南敏感鲍曼不动杆菌和40株美罗培南耐药鲍曼不动杆菌，分别对其结果进行统计分析，首次发现无论是在美罗培南敏感还是美罗培南耐药组，都表现出类似的协同、部分协同或相加作用，在我们的实验中，并未发现二者有拮抗现象。(表 1和表3可用于说明上述问题)舒巴坦对鲍曼不动杆菌存在内在抗菌活性，且有研究报道舒巴坦对小部分碳青霉烯类抗生素耐药的鲍曼不动杆菌菌株有效。体外研究及动物实验证实对于舒巴坦敏感菌株，舒巴坦单用或联合头孢哌酮对鲍曼不动杆菌的抗菌能力与碳青霉烯类抗生素相近。临床研究也证明，舒巴坦/β内酰胺抗生素联合治疗多重耐药鲍曼不动杆菌引起的呼吸机相关性肺炎、菌血症，其效能与碳青霉烯类抗生素相似。一项回顾性研究结果显示碳青霉烯类抗生素联合氨苄西林/舒巴坦以治疗多重耐药鲍曼不动杆菌引起的菌血症，其效果优于碳青霉烯类单药和碳青霉烯类联合阿米卡星。虽然体外实验不能完全说明临床效果，但是本发明的试验结果再次提示了舒巴坦联合美罗培南的治疗方案，可作为治疗多重耐药鲍曼不动杆菌的选择之一，此举也可降低临床碳青霉烯类使用的剂量，以延缓革兰阴性杆菌中日益严重的碳青霉烯类耐药的发展。对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。实施例11、材料(1)实验菌株从保存的鲍曼不动杆菌(收集于中国19家医院，时间2005年1 月至2009年9月)中随机选取40株美罗培南耐药及41株美罗培南敏感的鲍曼不动杆菌， 均经生物梅里埃公司VITEK GNI重新鉴定为醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体，再由16S-23S rRNA间区序列测序鉴定到种。质控菌株为ATCC25922。(2)主要试剂与仪器美罗培南(深圳市海滨制药有限公司，批号20090903。以无水物计，实际含量87.0%)；舒巴坦(深圳市海滨制药有限公司，批号0030009072。以无水物计，实际含量89.3% )。多黏菌素E、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/三唑巴坦，3种抗菌药物Etest条为瑞典AB Biodisk公司产品。头孢吡肟、头孢他啶、哌拉西林、阿米卡星、 庆大霉素、环丙沙星、米诺环素纸片采用OXOID纸片。2、方法(1)药物敏感性测定根据各菌株的美罗培南和舒巴坦单药最小抑菌浓度(MIC) 值测定范围将抗菌药物用阳离子调整MH肉汤在灭菌的96空平板上对比稀释成一系列浓度，每孔稀释药液为100 μ L。用接种环挑取生长于MH平板的新鲜菌落置于生理盐水中，调整浊度至0.5麦氏浊度，用MH肉汤1 10稀释后接种5μ L至孔中。微量肉汤稀释试验方法及结果判读遵循CLSI 2009年指南。头孢吡肟、头孢他啶、哌拉西林、阿米卡星、庆大霉素、环丙沙星、米诺环素采用纸片扩散法测定药物敏感性，多黏菌素Ε、氨苄西林/舒巴坦、 哌拉西林/三唑巴坦，3种抗菌药物采用Etest测定MIC值。纸片扩散试验方法遵循CLSI 2009指南，纸片扩散法结果及MIC结果按照CLSI 2009判定。(2)棋盘法测定联合药敏两种药物按微量肉汤稀释法分别在96孔板纵列和横列进行稀释，每孔加入美罗培南药液50 μ L和舒巴坦药液50 μ L，稀释度根据各菌株对美罗培南和舒巴坦的MIC值结果确定，最终得到两种药物从最高浓度为其MIC的2倍至最低浓度为其MIC的1/32的不同组合。并随板留孔做单药微量肉汤的MIC值测定。接种以1 10 比例的MH肉汤稀释至0. 5麦氏浊度的菌液5 μ L，最终菌液浓度为5Χ 105CFU/ml。35°C孵5育M小时，观察结果。(3)部分抑菌指数(Σ FIC)计算和判读标准Σ FIC = MIC美罗培南联合/MIC美罗培南单药+MIC舒巴坦联合/MIC舒巴坦单药Σ FIC ( 0. 5为协同作用，0. 5 <Σ FIC < 1为部分协同作用，Σ FIC = 1为相加作用，1 < Σ FIC < 4为无关作用，Σ FIC彡4为拮抗作用。3、结果(1)药敏结果美罗培南和舒巴坦单药对40株美罗培南耐药和41株美罗敏感的鲍曼不动杆菌的MIC值范围结果见表1。表1 81株鲍曼不动杆菌美罗培南和舒巴坦单药MIC值结果(μ g/ml)—美罗培南敏感菌林美罗培南耐药菌林
_ 舒巴坦美罗培南_ 舒巴坦美罗培南
MIC 范围 0.5-256 0.032-48-128 16-128
MIC5020.253264
MIC903216412840株美罗培南耐药和41株美罗敏感的鲍曼不动杆菌对其他抗菌药物的药物敏感性结果见表2。表2 10种抗菌药物对鲍曼不动杆菌的敏感性
头孢头孢哌拉阿米庆大环丙米诺氨苄西林多粘哌拉西林/ 吡肟他啶西林卡星霉素沙星环素 /舒巴坦菌素E 他唑巴坦
美罗敏感
61.0 53.7 26.8 70.7 65.9 58.5 9.8 70.7 100.0 43.9
培南 (％) 敏感耐药
36.6 34.1 41.5 29.3 34.1 36.6 22.0 22.0 0.0 39.0
菌株 (%)
美罗敏感
0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 2.5 12.5 10.0 85.02.5
培南 (％) 耐药耐药
97.5 92.5 92.5 100.0 100.0 97.5 85.0 57.5 15.0 97.5
菌株 (。/。)(2)联合药敏结果棋盘法测定美罗培南和舒巴坦联用对40株美罗培南耐药和 41株美罗培南敏感的鲍曼不动杆菌联合药敏结果及Σ FIC最大值和最小值如表3所示。 美罗培南和舒巴坦联用对美罗培南敏感菌株多数表现为协同和部分协同，所占比例分别为
6Μ. 4%和68.3%，即多数菌株的Σ FIC小于1。美罗培南和舒巴坦联用对美罗培南耐药菌株表现为协同的菌株数与美罗培南敏感菌株相近，比例为27. 5%，但表现为部分协同和相加的菌株比例分别40%和25%。美罗培南耐药和敏感的鲍曼不动杆菌对美罗培南和舒巴坦联合均无表现为拮抗作用的菌株。表3 81株鲍曼不动杆菌美罗培南和舒巴坦联合作用结果及FIC值


本发明提供一种抗鲍曼不动杆菌的药物组合物及其用途，该药物组合物包含美罗培南和舒巴坦，美罗培南和舒巴坦的重量比为1∶2-4。本发明应用棋盘法设计、微量肉汤稀释法测定发现了美罗培南与舒巴坦联合使用对碳青霉烯类敏感及耐药的鲍曼不动杆菌的协同抗菌作用。试验结果可以看出，无论是美罗培南耐药菌株还是美罗培南敏感菌株，其中大多数对于美罗培南和舒巴坦的联合使用表现出协同和部分协同作用，其中表现为协同作用的约占25％。