专利名称：用于施用EpCAMxCD3双特异性抗体的给药方案的制作方法基于抗体的癌症疗法需要具有与癌细胞的表面紧密结合的靶抗原才能起效。通过与表面靶标结合，抗体能向癌细胞传递死亡信号。在理想治疗方案中，靶抗原在每个癌细胞上大量存在且容易接近，而在正常细胞上不存在、被屏蔽的或少量存在。这种情况就为一个治疗窗提供了基础，其中一定量的基于抗体的治疗药物避开正常细胞而有效地攻击癌细胞。EpCAM可见于大部分人腺癌，包括具有结肠直肠、乳腺、肺、胃、膀胱、前列腺、卵巢和胰腺起源的癌症。比如在结肠直肠癌中，98%以上患者的原发肿瘤癌细胞显现出EpCAM大量频繁的表达(P. Went等人，Br. J. Cancer 94: 128 (2006) XEpCAM在癌细胞去分化发展到转移阶段时不会丢失。在一些癌症如乳腺癌、卵巢癌及某些鳞状细胞癌中，EpCAM的表达与正常上皮组织相比，要么从头开始，要么显著上调。当癌细胞中EpCAM表达被反义RNA或siRNA敲除时，细胞在软琼脂中停止增殖、移动和侵入生长。相反地，休眠细胞中EpCAM的异位表达具有这些性能，从而导致了它们不依赖于血清生长因子的生长(M. Munz等人，Oncogene 23: 5748 (2004))。EpCAM已经加入癌症干细胞标记物列表(J. Ε· Visvader和G. J. Lindeman, Nat. Rev. Cancer 8: 755 (2008))。据信,癌症干细胞不断迁入肿瘤,且是导致耐药性产生及肿瘤复发的原因。已经在源自乳腺、结肠、前列腺、肝及胰腺肿瘤的癌症干细胞中发现EpCAM的表达。EpCAM现在正成为若干基于抗体的治疗方法的目标，而这些方法处于不同的临床开发阶段。已报道了用这些EpCAM抗体对患者进行治疗的以下不良反应。Catumaxomab 全身细胞因子释放导致发热、心动过速淋巴细胞减少高剂量使用且结合低剂量的地塞米松时，肝功能的转氨酶参数升高至4级VB4-845 低烧、恶心、呕吐转氨酶升高MTllO是一种双特异性单链抗体构建体(BiTE)，其与在多数上皮来源的实体癌症中表达的上皮细胞粘附分子(EpCAM)结合，也与T细胞上的⑶3结合。MTllO在各种临床前期模型中，包括人结肠直肠癌(CRC)异种移植物中，显示具有很高的抗肿瘤活性。已在具有B细胞淋巴瘤的患者(pt)中采用blinatumomab (⑶19xCT3 BiTE),证实了 BiTE抗体概念的临床检验(Bargou R等人(2008) Science 321:9741)。目前，MTllO正处于对(转移性)胃肠癌和胃癌患者进行剂量递增I期试验的研究阶段。为了评估抗EpCAM X抗CD3双特异性单链抗体的安全性和耐受性，通过长期连续输注施用该化合物。开始输注后，没有患者出现发热、发冷或其他输注反应。未能发现显著的全身细胞因子水平。然而，一开始进行EpCAMxCD3双特异性单链抗体输注，就检测到肝酶的短暂升高。要设计一个基于抗EpCAM抗体的、又不影响所治疗患者的肝功能参数如肝酶等的疗法，明显是有难度的。
因此，本发明的基础技术问题是要提供解决上述难题的方法。 本发明解决了这种需要，并就此提供了关于给人类患者施用EpCAMx⑶3双特异性抗体的方法及给药方案的实施方案。本文将对这些实施方案进行表征和描述，权利要求中也会有所反映。应注意，除非上下文另有清楚说明，文中所用的单数形式“一个”、“一种”及“某个(种)”均涵盖复数形式。因此，例如，提及“一个试剂”，包括一个或多个不同该试剂；而提及“该方法”，就包括本领域普通技术人员已知的等效步骤及方法，这些步骤和方法是可被改变的或可取代本文所述方法。本发明所引用的所有出版物及专利都以其整体引用的形式并入。如通过引用形式并入的资料与本说明书相抵触或不一致，本说明书将优先于任何此类资料。除非另有指代，在一系列元素之前的术语“至少”应理解为指代该系列中每一个元素。本领域的技术人员将识别，或仅利用常规实验就能确定本文描述的本发明的具体实施方案的许多等同物。本发明意图包含这些等同物。除非上下文另外规定，贯穿本说明书始终以及下文的权利要求中的词语“包含”和变型如“含有”和“包含着”应理解为指代含有某个指定的整体或步骤，或某些整体或步骤的集合，但不排除任何其他整体或步骤或者整体或步骤的集合。本说明书全篇引用了多篇文件。无论上文或下文本文所引用的每篇文件(包括所有专利、专利申请、科学出版物、制造商的说明书、说明书等)，均以整体引用的形式并入本说明书。这些均不能解释为承认本发明由于在先发明而无权早于此类公开。一旦根据本发明所提供的给药方案给药，EpCAMxCD3双特异性抗体就能被患者很好的耐受，鉴于用EpCAM特异性抗体观察到的不良事件，尤其是肝功能参数如ALT、AST、AP等(“ALT、AST、AP等”这些术语在文中别处有所解释)的惊人升高，这一发现肯定是有显著意义的。具体地，本发明人观察到肝酶的血清水平显著升高到一个不希望的水平，因为这可能对接受EpCAM特异性抗体如EpCAMxCD3双特异性抗体治疗的患者来说是一个额外的负担。然而，引人注意的是，只要根据文中所公开的的方法/给药方案施用抗体，再次接受EpCAMxCD3双特异性抗体时，未出现转氨酶升高。总之，本发明人发现，在用EpCAMxCD3双特异性抗体治疗之前让患者“适应"EpCAMx⑶3双特异性抗体有助于避免不希望的不良反应发生(尤其是肝功能参数的不希望的升高)。因此，本发明的第一方面涉及一种用于给人类患者施用EpCAMx⑶3双特异性抗体的方法(给药方案)，所述方法包括(a)在第一时间段连续施用第一剂量的所述抗体；以及不间断地(b)在第二时间段连续施用第二剂量的所述抗体；其中所述第二剂量高于所述第一剂量。在本发明的背景下，人类患者优选具有或被假设具有EpCAM阳性上皮癌细胞。应理解在本发明的背景下，术语“方法”包括本发明方法中所用的“给药方案”。 在本发明的背景下，“EpCAMx⑶3双特异性抗体的给药”或“施用EpCAMx⑶3双特异性抗体”或其任何其它语法形式意味着EpCAMxCD3抗体为药物组合物的形式，所述药物组合物任选地包含药学上可接受的载体。因此，应理解为给人类患者施用包含EpCAMx⑶3双特异性抗体的药物组合物。在本发明的背景下，术语“患者”是指需要治疗EpCAM阳性上皮癌细胞的受试者或个体。患者是哺乳动物，优选是人类。术语“施用”的所有语法形式是指EpCAMx⑶3双特异性抗体(以药物组合物的形式)作为单独治疗药剂或与其他治疗药剂相结合的给药。因此预见到，本发明的药物组合物还可用于协同治疗方法，即与其他药剂或药物一起协同给药，例如，其他用于治疗人类患者的EpCAM阳性上皮癌细胞的药物，和/或糖皮质激素，和/或在本发明所述方法的背景下可能有利的任何其他治疗药剂。文中提及的药物组合物的优选为静脉内给药。由此而知，本发明方法中的步骤(a)的给药途径和/或步骤(b)的给药途径是静脉内给药。EpCAMx⑶3双特异性抗体(例如是药学组合物的形式)的给药是连续的或在此也可采用用的持续的。连续给药是指基本上无间断的给药。“基本上无间断”包括连续给药但通常不含连续流动或空间延伸。本发明的一个优选实施方案中，第二剂量具有治疗活性。优选地，有效剂量影响⑶8+T细胞的激活。被激活的⑶8+T细胞的优选特征为⑶25和/或⑶69表型。术语“被激活的CD8+T细胞”和“CD25和/或CD69表型”在本文别处有所描述。“治疗有效量”或“具有治疗活性”是指给所施用的目标产生疗效的EpCAMx⑶3双特异性抗体的剂量。确切剂量取决于治疗的目的，是本领域技术人员运用已知技术可以确定的。如本领域所熟知的以及上文所述，可能需要根据年龄、体重、基本健康状况、性别、饮食习惯、药物相互作用以及情况的严重性进行调整，该调整是本技术领域技术人员通过常规实验可以确定的。“具有治疗活性”包括在本发明的背景下，至少是上文所述CD8+T细胞的激活，这是治疗方法的一个先决条件。本发明所述的各方法或方法步骤的疗效可另通过所有已有的指示疗效的方法和途径检测。例如预见到，可以通过外科切除或活体检查受影响的组织/器官，随后用免疫组化(IHC)或比较免疫学技术分析的方法检测疗效。或者还预见到，检测患者血清内肿瘤标记物(如果存在)，来判定治疗方法是否已产生疗效。此外或可选地，还可以分别评估相应患者的整体状况(身体健康、有幸福感、肿瘤介导的小病的减少等)，从而帮助技术从业者评价是否已产生疗效。技术人员知道许多能让他或她观测本发明所述化合物疗效的其他方法。本发明的另一方面涉及一种用于治疗人类患者的EpCAM阳性上皮癌细胞的方法，所述方法包括(a)在第一时间段连续施用第一剂量的EpCAMx⑶3双特异性抗体；以及不间断地，(b)在第二时间段连续施用第二剂量的所述抗体其中所述第二剂量高于所述第一剂量。本发明的又一方面涉及一种用于缓解和/或预防病况、优选不良反应的方法，所述病况是由给人类患者(治疗性地)连续施用EpCAMx⑶3双特异性抗体而介导的，所述方法包括(a)在第一时间段连续施用第一剂量的所述抗体；以及不间断地，(b)在第二时间段连续施用第二剂量的所述抗体其中所述第二剂量高于所述第一剂量。所述人类患者优选地具有或被假设具有EpCAM阳性上皮癌细胞。在该用于缓解和/或预防病况、优选不良反应的方法的一个优选实施方案中，其中所述病况是由给人类患者施用EpCAMxCD3双特异性抗体而介导的，所述病况的特征在于至少一种肝酶的血清水平的升高。所述至少一种肝酶的血清水平的升高最高会达到根据通用不良反应术语标准(Common Terminology Criteria for Adverse Events, CTCAE)3. 0 版所划分的 4 级，所述标准将在下文进一步描述。因此，所述至少一种肝酶的血清水平的升高会达到I级、2级或3级，而4级为最闻。所述升高优选地是暂时性的。所述至少一种肝酶的血清水平的升高中所用的“暂时性”是指所述升高并不是永久的，而是在停止治疗后或在连续的进一步输注过程中会消失的。还预见到，肝酶血清水平的暂时升高不一定伴随病理学的影像结果、实质组织损伤或肝脏合成功能参数受损。其示例显示在图7中，该图描述了用MTllO (即本发明的抗体)治疗的患者的肝实质。如图中可见，肝实质在转氨酶峰值时没有实质细胞损伤的迹象(HE染色)。一般来说，肝酶活性由于提供了关于肝脏状况/状态的指南，因此通常被用作一个肝脏的“窗口”。例如，如果肝脏被如酒精或其他药物损伤，或因任何其他原因出现异常功能，则肝酶将泄露进入正常情况下不存在肝酶的血液中。因此，肝酶的血清水平可通过肝酶活性进行测定。高于(即增加的或升高的)通常公认的参考值的肝酶活性一般指示肝脏潜在的异常功能和/或损伤。所以，肝酶活性可以通过肝功检查(LFT或LF)进行测量，所述肝功检查即设计为提供关于患者肝脏状态的信息的临床生化实验室的血液试验。对于肝酶，其参考值(正常值)是已知的且是通常公认的。参考值是健康专家用于解释一组医学检测结果的一组数值。参考值通常定义为95%的正常人群落入其中的一组数值，或平均值的两个标准偏差。其是 通过收集来自大量实验室试验的数据而确定的。就肝酶而言，其参考值是以国际单位(IU)给出。国际单位以测定的生物活性或作用为基础。经测定，肝酶血清水平的(优选暂时)升高值是正常上限(ULN)的数倍。ULN的倍数根据NCI通用不良反应术语标准(CTCAE)3.0版(出版日2003年12月12日)进行分级。级别是指不良反应的严重性。3. O版CTCAE分为I到5级，对每种不良反应严重性的临床描述是特定的I级轻微不良反应2级中度不良反应3级严重不良反应4级致命或致残的不良反应5级患者死亡肝转氨酶如天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)针对肝脏细胞完整性的状态提供，因为如果肝脏损伤或发生故障，这些酶会从损伤或发生故障的肝细胞中泄漏进入血液。因此，本发明方法的上下文中AST和/或ALT为优选的肝酶(肝脏标记物)。在一些优选实施方案中，所述至少一种肝酶包括AST和/或ALT，且任选地包括GGT和/或AP。天冬氨酸转氨酶(AST)也称为血清谷草转氨酶(SGOT)或天冬氨酸氨基转移酶(ASAT)，类似于丙氨酸转氨酶(ALT)，因为它是另一种与肝实质细胞相关的酶。它在急性肝损伤中升高，但也存在于红血球、心脏及骨骼肌肉中，因此并不是肝脏中特有的。AST与ALT的比值有时可用于区分肝损伤的成因。AST水平的升高并不是肝损伤特异的。AST的正常参考值是10至50 IU/I。根据通用不良反应术语标准3. O版，AST的分级如下所示本发明涉及一种用于给人类患者施用EpCAMxCD3双特异性抗体的方法(给药方案)，其包括(a)在第一时间段连续施用第一剂量的所述抗体；以及不间断地(b)在第二时间段连续施用第二剂量的所述抗体，其中所述第二剂量超过所述第一剂量。本发明的方法(以及本发明的给药方案)还适合用于治疗人类患者的EpCAM阳性上皮癌细胞，或用于缓解和/或预防病况，所述病况是由给人类患者连续施用EpCAMxCD3双特异性抗体而介导的。本发明还涉及EpCAMxCD3双特异性抗体在制备将被用于如前述权利要求中任一项所限定的方法的药物组合物中的用途。本发明还公开了一种药物包或试剂盒，其包括如本发明的方法/给药方案中所限定的第一剂量和第二剂量。