专利名称：一种应用黄原胶菌株提高黄原胶产量的方法黄原胶的产量取决于黄原胶菌株的产胶率，为了获得高产菌株，需要对菌种进行选育。菌种的选育有几种方法，包括自然选育、诱变育种，其中自然选育方法比较缓慢，而且过程比较的被动，在制备过程中有很大的局限性，诱变育种则具有速度较快、收效较为明显的特点，但产率低，因而现有黄原胶的产量很低。
为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种应用黄原胶菌株来提高产量的方法，可以提高黄原胶的产胶率，降低成本，同时缩短了生产时间。为了解决上述技术问题，本发明采取如下方法 1、菌种选育包括培养基的制备和菌株的选育方法。斜面培养基的制备向试管中加入蔗糖、氯化钠、蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、琼脂， 搅拌均勻，将试管倾斜保存，制备成斜面培养基，各成分的百分比为蔗糖1-2. 5%、氯化钠0.6-1. 0%、蛋白胨 0. 5-3%、牛肉膏 0. 1-0. 5%、酵母膏 0. 4-0. 8%、琼月旨 2-3. 5%，用 0. 1%HC1 溶液培养基的PH值调整为7. 2-7. 4 ；其中成分最佳百分比为蔗糖1. 5%、氯化钠0. 8%、蛋白胨1.5%、牛肉膏0. 3%、酵母膏0. 65%、琼脂2. 5%，培养基的PH为7. 2。发酵培养基的制备在斜面培养基中加入淀粉、碳酸钙、豆粉，搅拌均勻，制备成发酵培养基，各成分的百分比为淀粉3-5%、碳酸钙0. 6-1. 1%、豆粉0. 4-0. 8%，用0. 1%HC1溶液将培养基PH值调整为7. 2-7. 4 ；成分的最佳百分比为淀粉4%、碳酸钙0. 8%、豆粉0. 6%， 培养基PH为7. 2。(2)、选育菌株的方法①、用原始菌液制备黄单胞菌悬液首先用浓度为100-300微克/毫升的亚硝酸盐对原始菌液处理30分钟，然后将处理过的菌液采用平板稀释的方法进行分离，并于25-35°C的条件下，在无菌室的斜面培养基内培养2-4天，筛选其中个大、饱满的菌落，并移植到另一个斜面培养基上培养，待其成熟后，放入备摇瓶中；其中亚硝酸盐的最佳浓度为200微克/ 毫升，培养的最适温度为30°C。②、筛选菌落从备摇瓶中选取8-10个黄单胞菌落在发酵培养基中进行初步筛选，而后经复筛，在选取4-6个质量优良的菌落，进行上罐反复实验，选取所需的黄单胞菌 (Xanthomonas SP)X.C_237。本发明所筛选的黄原胶菌株为黄单胞菌(Xanthomonas SP)X. C-237，已于2010年 02月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，登记入册编号为CGMCC No. 3625，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。黄单胞菌的生理特性为微黄色、短杆状，适宜生长温度为27-30°C，高于50摄氏度死亡，适宜的PH值范围在6. 8-7. 1。2、菌株发酵(1)、在一级种子罐进行发酵
将斜面培养基各组分按配比依次投入加好水的一级种子罐中，搅拌均勻使其溶解，在温度120-123°c、压力0. 1-0. 12Mpa的条件下采用酒精溶液进行实消，时间为42-50 min，然后降温至27-^TC，在无菌条件下，由接种口接入黄单胞菌种，培养17-20h，当菌体数量较多、生长饱满时转种。(2)、在二级种子罐进行发酵
将斜面培养基各组分按配比要求依次投入加好水的二级种子罐中，搅拌均勻使其溶解，在温度120-123°C、压力0. 1-0. 12Mpa的条件下采用酒精溶液进行实消，时间为42-50 min，然后降温至27-29°C，在无菌条件下，将无杂菌的一级种子罐中的种液按1 :10比例压入二级种子罐中，接种黄单胞菌后在27-29°C的条件下培养17-20h，当菌体数量较多、生长饱满时转种。(3)、在发酵罐内进行发酵
按发酵培养基配比的要求进行配料，将配好的物料压入发酵罐中，在温度120-123 、 压力0. 1-0. 12Mpa的条件下采用85%的酒精进行实消，时间为42-50min，然后降温至 27-29°C，在无菌条件下，将二级种子罐中的种液压入发酵罐中，2719°C的条件下培养 63-6 ，用NDJ-I粘度计测定粘度，当粘度不再升高时停罐。3、提取
将发酵液升温到80°C维持25-35min，然后将发酵液降温到40°C后，加入到浓度为85% 的酒精溶液中，使黄原胶呈纤维状沉淀析出，用离心机分离，多次酒精沉淀脱水后真空干燥，然后粉碎制得产品。本发明所带来的有益效果是由于采用筛选出的黄单胞菌(Xanthomonas SP) X. C-237应用到上述工艺方法，既可以使得产品的小样产率由原来的3. 10克/IOOml提高到 3. 60克/100ml，提高了 33. 3%，同时缩短了生产的时间，节约材料，降低了成本。

下列
是对本发明的进一步说明，但本发明不仅限于此。一种应用黄原胶菌株提高黄原胶产量的方法包括以下几步；
1、菌种选育包括培养基的制备和菌株的选育方法，先向试管中加入1. 5%蔗糖、0. 8%氯化钠、1. 5%蛋白胨、0. 3%牛肉膏、0. 65%酵母膏、2. 5%琼脂，搅拌均勻后，用0. 1%HC1溶液将培养基的PH调节至7. 2，并保持试管倾斜保，制成所需的斜面培养基；再向斜面培养基中加入4%淀粉、0. 8%碳酸钙、0. 6%豆粉后，搅拌均勻，并用0. 1%HC1将培养基的PH也调整至7. 2， 制成所需的发酵培养基。然后用浓度为200微克/毫升的亚硝酸盐处理30分钟原始菌液，并采用平板稀释的方法将其分离，于30°C的条件下，在无菌室的斜面培养基内培养3天，筛选其中个大、饱满的菌落，并移植到另一个斜面培养基上培养，待其成熟后，放入备摇瓶中。而后在从备摇瓶中选取8-10个菌落在发酵培养基中进行初步筛选，后经复筛， 在、选取4-6个质量优良的菌落，进行上罐反复实验，选取所需的黄单胞菌(Xanthomonas
5SP) X. C-237。2、进行菌株发酵，首先在加好水的一级种子罐内，将斜面培养基内的各组分按照配比投入其中，搅拌均勻，使其溶解，在温度121 °C、压力0. IMpa的条件下采用85%的酒精溶液进行实消，时间为45min，然后降温至^°C，在无菌条件下，由接种口接入黄单胞菌种，然后在的条件下，培养18h，当菌体数量较多、生长饱满时进行转种。其次，将斜面培养基各组分按配比要求依次投入加好水的二级种子罐中，搅拌均勻使其溶解，在温度121°C、压力0. IMpa的条件下采用85%的酒精进行实消，时间为45 min, 然后降温至^°C，在无菌条件下，将无杂菌的一级种子罐中的种液按1 :10比例压入二级种子罐中，接种黄单胞菌后，在的条件下培养18h，当菌体数量较多、生长饱满时进行转种。最后，按发酵培养基配比的要求进行配料，将配好的物料压入发酵罐中，在温度 121°C、压力0. IMpa的条件下采用85%的酒精进行实消，时间为45min，然后降温至^°C，在无菌条件下，将二级种子罐中的种液压入发酵罐中的条件下培养65h，用NDJ-I粘度计测定粘度，当粘度不再升高时停罐。3、提取，先将发酵液升温到80°C维持30min，然后将发酵液降温到40°C后，加入到浓度为85%的酒精溶液中，使黄原胶呈纤维状沉淀析出，用离心机分离30min，经过5次酒精沉淀脱水后真空干燥，然后进行粉碎，制得黄原胶产品，并将黄原胶的产量提高了 33. 3%。


本发明公开了一种应用黄原胶菌株提高黄原胶产量的方法。所筛选采用的黄原胶菌株为黄单胞菌(XanthomonasSP)X.C-237，通过在一级种子罐，二级种子罐及其发酵罐内的发酵后，加入的酒精溶液，使黄原胶呈纤维状沉淀析出，经过分离提取，得到黄原胶产品。通过应用本发明方法，可以使黄原胶产量提高33.3%，同时缩短了生产的时间，节约材料，降低了成本。