专利名称：一种罗非鱼免疫增强剂及其制备方法罗非鱼(Tilapia)，俗称非洲鲫鱼，隶属于鲈形目、鲈形亚目、丽鱼科Cichlidae、 罗非鱼属Tilapia(亦称丽鲷科，丽鲷属)。该属原产于非洲，有600多种，目前被养殖的 有15种。罗非鱼是一群中小型鱼类，它的外形、个体大小有点类似鲫鱼，鳍条多荆似鳜鱼。 广盐性鱼类，海淡水中皆可生存，具有生长快，产量高，抗病力强，易于饲养，经济价值和市 场潜力巨大，同时具有出肉率多，肉质丰满、细嫩，味道鲜美等特点，是水产养殖的一个新品 种。近年来，罗非鱼消费需求的数量和质量有逐年上升之势，为了追求高的效益，集约 化、高密度的养殖下，特别高温应激条件下，病害频繁发生，特别罗非鱼链球菌病首度大面 积流行，病鱼呈现出病鱼眼睛浑浊、凸出，在水中打转的病征，消化系统受到严重破坏，肝胆 肿大，肠道充血、溃烂等，影响罗非鱼的经济效益，给养殖业带来巨大的经济损失；为防治病 原菌，抗生素及抗菌药物得到了大量使用，并造成药物残留、耐药性增强、引起动物免疫力 下降、微生态失调以及致畸、致癌、环境污染等一系列不良后果，同时抗生素与抗菌药物本 身也是一种药物应激源，影响鱼体的生长。因此，一些绿色、安全、高效饲料添加剂的开发与应用应运而生。植物提取物具有 天然、高效、毒副作用少、资源丰富等优点，含有与动物的免疫功能密切相关的生物碱、茶多 酚、皂甙、低聚糖、黄酮类、挥发油类等，可促进机体的生长发育，并通过影响非特异性免疫 系统，激活和诱生多种细胞因子等途径提高水产动物机体免疫力。姜黄素(Curcumin；是从 姜科姜黄属iPurmtm longa L.)植物姜黄、莪术、郁金等的根茎中提取的一种天然的黄色 酸性酚类物质，是姜黄发挥药理作用的最主要的活性成分，具有抗氧化、抗菌、降肝脏脂肪、 保肝利胆等功能，提高免疫功能，维持动物机体健康，促进鱼体生长，。谷氨酰胺是L-谷氨酸的Y-羧基酰胺化物，是体液中最丰富的氨基酸之一，可增 强鱼体免疫功能、维持酸碱平衡、增加细胞的吞噬作用和淋巴细胞的增殖、增加细胞体积、 增强肌肉细胞内蛋白质的合成等，是一种极有发展前景的新型药物和动物营养性饲料添加 剂。甜菜碱又名甘氨酸三甲基内盐，是一种最早从甜菜糖蜜中分离出来的季氨型生物 碱，是一种高效的甲基供体。甜菜碱具有活性甲基和两性电解质的结构，可为机体高效提供 活性甲基，参与蛋白质与脂类代谢、胆碱、肉碱、肾上腺素的合成及DNA、RNA的甲基化，具 有维持维生素的稳定性、调节渗透压、缓和应激的作用。甜菜碱还可作为一种生物体系细胞 渗透保护剂，提高生物体细胞对干旱、高温、高盐和高渗环境下的耐受力，具有稳定酶活性 和生物大分子功能的作用。目前已有一些关于姜黄素、谷氨酰胺、甜菜碱的在水产养殖的少量使用，但是有关与姜黄素、谷氨酰胺、甜菜碱的配伍使用，还未见报道。因此研制一种罗非鱼免疫增强剂，提 高罗非鱼抗病能力，抗应激能力，对水产健康养殖和可持续发展具有重要意义。
本发明的目的在于克服上述的一些不足之处，从而提供一种罗非鱼免疫增强剂及 其制备方法，其能耗低、工艺简单、生产成本低，能提高罗非鱼免疫与抗氧化能力，提高罗非 鱼体抵抗链球菌感染能力，且可促进罗非鱼生长的免疫增强剂。按照本发明提供的技术方案，一种罗非鱼免疫增强剂包含下列组份，其组分配比 以重量份数计取姜黄素为0. 25 1. 0份、谷氨酰胺二肽为0. 25 0. 75份、甜菜碱为2. 5 7. 5 份、载体为92. 0-95. 75份；将上述各组份在混合机内混合后，经粉碎机粉碎，制成800 120目干粉的免疫增强剂。所述载体选自玉米粉、麸皮、小麦粉、大豆粉、米糠或沸石粉等。一种罗非鱼免疫增强剂及其制备方法采用以下制备步骤，其组分配比以重量份数 计取姜黄素为0. 25 1. 0份、谷氨酰胺二肽为0. 25 0. 75份、甜菜碱为2. 5 7. 5 份、载体为92. 0-95. 75份；将上述各组份在混合机内混合后，经粉碎机粉碎，制成800 120目干粉的免疫增强 剂。粉碎转速为300-400转/分。所述姜黄素，含大黄素为99. 2%，由河南中大生物工程有限公司提供。所述谷氨酰 胺二肽，由浙江安木化工有限公司提供。所述甜菜碱，含甜菜碱96%，由丹尼斯克(芬兰)动 物营养提供。所述免疫增强剂在鱼饲料中的添加量为1%1%。此免疫增强剂直接清除罗非鱼体内的自由基，消除自由基对机体组织器官正常功 能的负面影响，加快修复被破坏的免疫系统，减缓机体对应激条件的反应，能提高鱼体的免 疫与抗氧化能力、抵抗链球菌感染能力，改善饲料适口性，促进鱼体生长。本发明与已有技术相比具有以下优点1、使用姜黄素、谷氨酰胺、甜菜碱等配伍制剂后，能克服上述的某一种产品的不足之 处，相互补充，促进团头鲂鱼体生长。2、本发明原料来源稳定，制备简单，取材广泛，成本低廉。3、本发明从鱼体免疫的机理出来，免疫增强剂既补充中草药，又补充西药谷氨酰 胺二肽；从中西结合药物提高鱼体的免疫能力，促进鱼体生长。4、本发明免疫增强剂通过动物试验，表明免疫增强剂能提高罗非鱼免疫与抗氧化 能力，提高罗非鱼抵抗链球菌感染能力，促进鱼体生长。
实施例一本发明一种罗非鱼免疫增强剂及其制备方法，采用以下制备步骤，其组份配 比以重量份数计取姜黄素为0. 25份、谷氨酰胺二肽为0. 25份、甜菜碱为7. 5份、玉米粉载体为 92.0份；将上述各组分充分在混合机(V型混合机，溧阳市汇达机械有限公司)内混勻；后超 微粉碎机(ZNC-300小型超微粉碎机，北京兴时利和科技发展有限公司)粉碎，并通过120目 的筛网制成免疫增强剂干粉；超微粉碎机粉碎速度400转/分；混合机投料转速18转/ 分；
上述免疫增强剂在鱼饲料中的添加量为1%_3%。免疫增强剂的添加量与使用的周期有 关，当使用周期在30天以上，在饲料中添加量为1%- ；当使用周期在60天以上，在饲料中 添加量为0. 5%-1. 0%。生长实验罗非鱼由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、 规格、重量基本一致的鲫鱼，个体初均重约log。随机分组，设有对照组与对照组，每组设3 个平行试验，每平行组30尾试验鱼，共6个网箱(规格为IOOOcmX IOOcmX 100cm)。鲫鱼驯 化30天后投喂对照组基础日粮和1. 0%免疫增强剂60天，测定其生长、免疫等影响。结果表明与对照组相比，1.0%免疫增强剂增重率显著(P<0.(^)分别提高了 10. 66% ；病原菌链球菌感染鱼体7d，鱼体内脏出血、肝胆溃烂、肠道溃烂等现象，对照组死 亡率为85. 0%，1. 0%免疫增强剂鱼死亡率为38. 0% ；与对照组相比，1. 0%免疫增强剂显著 (P<0. 05)降低血液皮质醇浓度8. 17%，及丙二醛浓度8. 55%，增加了血液溶菌酶活性9. 87%、 超氧化物歧化酶活性6. 12%。因此，该免疫增强剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高罗非 鱼抵抗链球菌感染能力，促进鱼体生长。实施例二 本发明一种罗非鱼免疫增强剂及其制备方法，采用以下制备步骤，其组 份配比以重量份数计
取姜黄素为0. 5份、谷氨酰胺二肽为0. 5份、甜菜碱为5. 0份、大豆粉载体为94. 0 份；将上述各组分充分在混合机(V型混合机，溧阳市汇达机械有限公司)内混勻；后超微粉 碎机(ZNC-300小型超微粉碎机，北京兴时利和科技发展有限公司)粉碎，并通过100目的筛 网制成免疫增强剂干粉；超微粉碎机粉碎速度350转/分；混合机投料转速16转/分；
生长实验罗非鱼由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、规 格、重量基本一致的鲫鱼，个体初均重约10g。随机分组，设有对照组与对照组，每组设3个 平行试验，每平行组30尾试验鱼，共6个网箱(规格为IOOOcmX IOOcmX 100cm)。鲫鱼驯化 30天后投喂对照组基础日粮和1. 0%免疫增强剂60天，测定其生长、免疫等影响。结果表明与对照组相比，1.0%免疫增强剂增重率显著(P<0.(^)分别提高了 9. 21% ；病原菌链球菌感染鱼体7天，鱼体内脏出血、肝胆溃烂、肠道溃烂等现象，对照组 死亡率为86. 0%，1. 0%免疫增强剂鱼死亡率为45. 0% ；与对照组相比，1. 0%免疫增强剂显 著(P<0.(^)降低血液皮质醇浓度9. 88%，及丙二醛浓度12. 34%，增加了血液溶菌酶活性 12. 33%、超氧化物歧化酶活性8. 11%。因此，该免疫增强剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提 高罗非鱼抵抗链球菌感染能力，促进鱼体生长。实施例三本发明一种罗非鱼免疫增强剂及其制备方法，采用以下工艺步骤，其组 份配比以重量份数计
取姜黄素为1. O份、谷氨酰胺二肽为0. 75份、甜菜碱为2. 5份、麸皮载体为95. 75 份；将上述各组分充分在混合机(V型混合机，溧阳市汇达机械有限公司)内混勻；后超微粉 碎机(ZNC-300小型超微粉碎机，北京兴时利和科技发展有限公司)粉碎，并通过80目的筛网制成免疫增强剂干粉；超微粉碎机粉碎速度300转/分；混合机投料转速17转/分；
生长实验罗非鱼由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、规 格、重量基本一致的鲫鱼，个体初均重约10g。随机分组，设有对照组与对照组，每组设3个 平行试验，每平行组30尾试验鱼，共6个网箱(规格为IOOOcmX IOOcmX 100cm)。鲫鱼驯化 30天后投喂对照组基础日粮和1. 0%免疫增强剂60天，测定其生长、免疫等影响。
结果表明与对照组相比，1.0%免疫增强剂增重率显著(P<0.(^)分别提高了 7. 58%;病原菌链球菌感染鱼体7d，鱼体内脏出血、肝胆溃烂、肠道溃烂等现象，对照组死 亡率为84. 0%，1. 0%免疫增强剂鱼死亡率为52. 0% ；与对照组相比，1. 0%免疫增强剂显著 (P<0. 05)降低血液皮质醇浓度6. 75%，及丙二醛浓度6. 33%，增加了血液溶菌酶活性8. 78%、 超氧化物歧化酶活性8. 22%。因此，该免疫增强剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高罗非 鱼抵抗链球菌感染能力，促进鱼体生长。


本发明涉及一种罗非鱼免疫增强剂及其制备方法，属于水产配合饲料添加剂技术领域。特征是取姜黄素、谷氨酰胺、甜菜碱及载体；将上述各组份充分混合后粉碎，制成干粉。本发明原料来源稳定，制备简单，取材广泛，成本低廉；从鱼体免疫的机理出来，免疫增强剂既补充中草药，又补充西药谷氨酰胺二肽；从中西结合药物提高鱼体免疫能力。使用时能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高罗非鱼抗病原菌链球菌的感染能力，且可促进罗非鱼生长。