专利名称：支架的制作方法一直以来采用支架留置法，该支架留置法是在产生于血管、胆管、食道、气管、尿道及其他内脏器官等的生物体内的管腔或体腔的狭窄部或阻塞部等病变部，留置中空管状的作为医疗用具的支架，将病变部维持为通畅状态。 治疗例如缺血性心脏病的经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)为如下手术在患者的脚或手腕的动脉上切开小口，将导引鞘(intiOducer sheath)(导入器)留置在该动脉中，使导引钢丝先穿入导引鞘的内腔并于内腔中行进，并且在将称作导引导管的较长的中空的软管插入到血管内并配置在冠状动脉的入口处后，抽出导引钢丝，将预先插入有另一较细的导引钢丝的球囊导管插入到导引导管的内腔中，使导引钢丝先行行进，并且基于X射线造影使球囊导管前进至患者的冠状动脉中的病变部(狭窄部或阻塞部)，使球囊位于病变部内，医生利用规定的压力使球囊在该位置膨胀I次或多次。由此，病变部的血管内腔维持被扩张了的通畅状态，由此在血管内腔中通过的血流增加。但是，现得到以下报告当血管壁被导管损伤时，引起作为血管壁的治愈反应的血管内膜的增殖，容易发生再狭窄。因此，为了降低再狭窄率，采用将支架留置在利用球囊扩张了的病变部的支架留置法。利用支架留置法虽然能够降低再狭窄率，但却不能完全预防再狭窄。因此，近年来人们积极地提出了如下尝试作为该支架，用承载有免疫抑制剂和抗癌剂等生物学的生理活性物质的药剂溶出性支架(DES)，在留置有支架的病变部的局部缓慢释放该生物学的生理活性物质，抑制被认为是再狭窄的原因的血管内膜的增殖，从而谋求降低再狭窄率。DES的出现大大降低了再狭窄率。另一方面，最近作为DES的问题，得到以下报告在留置于病变部的支架的内腔中，容易产生由血管内皮细胞覆盖的延迟所引发的迟发性支架血栓症。为了解决该种问题，例如在专利文献I中提出了在支架的内侧表面上将具有促进血管内皮细胞的附着的细胞附着能力的物质固化而成的支架。该支架通过使血管内皮细胞在支架的内侧表面上长大，抑制迟发性支架血栓症、再狭窄。专利文献I :日本特开2005 - 118123号公报另外，血管内皮细胞通常将沿血流方向具有长轴的纺锤形视作成熟形，通过形成为该种纺锤形，成为功能性的细胞。但是，在上述专利文献I所述的支架中，由于在支架的大致整个内侧表面上设有具有细胞附着能力的物质，所以所附着的血管内皮细胞随机长大，难以成为纺锤形。
本发明是鉴于上述这样的问题而做成的，目的在于提供一种支架，该支架通过使细胞在支架的内侧表面上有方向性地增殖，能够迅速地用细胞覆盖支架表面，且能抑制迟发性支架血栓症、再狭窄的发生。用于达到上述目的的本发明的支架包括圆筒状的支架主体，其在两端具有开口部，且在上述两端的开口部之间沿长度方向延伸；覆盖层，其设在上述支架主体的内侧表面上，含有具备能促进细胞的附着的细胞附着能力的物质，通过以条纹状排列多个呈线状延伸的线状覆盖部，形成上述覆盖层。以上述方式构成的本发明的支架通过以条纹状排列多个具有细胞附着能力的线状的线状覆盖部，形成支架主体的内侧表面的覆盖层，所以能够使细胞具有期望的方向性地在支架主体的内侧表面上长大，促进细胞的长大而迅速地利用细胞覆盖支架表面，且能抑制迟发性支架血栓症、再狭窄的发生。上述线状覆盖部若设置为在上述支架主体扩开时沿该支架主体的长度方向延伸，则能够使细胞在线状覆盖部上沿支架主体的长度方向具有方向性地增殖。特别是，就血管 内皮细胞而言，将沿血流方向具有长轴的纺锤形视作成熟形，通过形成为这种纺锤形而成为功能性的细胞，通过使血流方向与线状覆盖部的延伸方向一致，能够使血管内皮细胞以沿支架主体的长度方向具有长轴的功能性的纺锤形长大。上述线状覆盖部若设置为在上述支架主体扩开时沿该支架主体的周向延伸，则能够使细胞在线状覆盖部上沿支架主体的周向具有方向性地增殖。特别是，血管平滑肌细胞呈螺旋状排列而构成血管，螺旋是沿支架主体的周向缠绕，所以螺旋与线状覆盖部的延伸方向大概一致，由此能够使血管平滑肌细胞沿支架主体的周向排列而长大。上述线状覆盖部若填充设置在形成于上述支架主体的内侧表面的槽中，则能够在进行向球囊安装支架的操作或球囊的扩张操作时，抑制覆盖层损坏。当具有上述细胞附着能力的物质是合成肽时，能够使细胞良好地附着。图I是表示第I实施方式的支架的立体图。图2是表不第I实施方式的支架的内侧表面的局部放大俯视图。图3是图2的3 - 3剖视图。图4是表示覆盖层以平面状设在支架主体上的情况下的细胞的增殖例的轮廓图。图5是表示第I实施方式的支架上的细胞的增殖例的轮廓图。图6是表示第I实施方式的支架的变形例的剖视图。图7是表不第2实施方式的支架的内侧表面的局部放大俯视图。图8是图2的8-8剖视图。图9是表示第2实施方式的支架的变形例的剖视图。图10是表不参考例的覆盖基材的一部分的俯视图。图11是表示参考例的覆盖基材的一部分的剖视图。图12是表示参考例的覆盖基材和未加工基材所附着的血管内皮细胞数量的图表。
下面，参照

本发明的实施方式。另外，为了方便说明，附图的尺寸比率有时被夸大而与实际的比率不同。第I实施方式如图I 图3所示，本发明的第I实施方式的支架10包括筒状的支架主体12，其由多个环状部11沿轴线方向排列连结而成，这些环状部11由被压曲成波浪状而形成为环状的线材构成；覆盖层13，其设在各环状部11的内侧表面上。支架10为球囊扩张型结构，通过将支架10设置在球囊导管的球囊上并使球囊扩张，从而支架主体12沿径向扩开。在支架主体12扩开时，发生各环状部11的压曲的角度增大的塑性变形，维持用外侧表面撑开生物体组织等的状态地将支架10留置在病变部。这里，支架主体12的与生物体组织相接触的外侧表面是指在将支架10留置在病变部时，与形成病变部的生物体组织、详细而言例如血管的内壁等相接触的一侧的表面。另一方面，支架主体12的内侧表面是指在将支架10留置在病变部时，与血液等体液相接触的一侧的表面。 含有具备细胞附着能力的物质的覆盖层13形成为固相而设在支架主体12的内侧表面上，该细胞附着能力促进细胞的附着。覆盖层13用于在支架主体12扩开而留置在病变部后，利用血管内皮细胞覆盖支架主体12的内侧表面。如图2和图3所示，覆盖层13排列有多个呈线状延伸的线状覆盖部14而形成为条纹状。线状覆盖部14设置为，在支架主体12被球囊等扩开而留置在病变部的状态下，线状覆盖部14成为沿支架主体12的长度方向X延伸的状态。即，根据设想的扩开状态，将线状覆盖部14覆盖在支架主体12的内侧表面上。另外，扩开状态依据使用状况而改变，所以扩开状态下的线状覆盖部14不必完全与支架主体12的长度方向X平行。另外，各线状覆盖部14也不必彼此平行，甚至，各线状覆盖部14也可以设置为曲线状而非直线状。覆盖层13由于以固相形成在支架主体12的内侧表面上，所以在进行向球囊安装支架10的操作或球囊的扩张操作时，能够对形成在与球囊相接触的一侧的表面上的覆盖层13的受损进行抑制。另外，在本发明中，支架主体12并不限定于图示的结构，只要是能沿径向扩开的筒体即可，也可以为其他结构。构成支架主体12的线材的截面形状也不限定于图3所示那样的矩形，也可以是圆形、椭圆形、除矩形以外的多边形等其他形状。另外，支架10的扩张方式并不特别限定于球囊扩张型，也可以是自扩张型，即，通过解除对折叠成细小的支架进行保持的力，利用本身的复原力沿径向扩张的类型。作为支架主体12的材料，可以是高分子材料、金属材料、碳纤维和陶瓷等，只要是具有某一程度的刚性和弹性的材料即可，没有特别限制，但优选具有生物相容性的材料。详细而言，作为高分子材料，例如可以使用聚乙烯、聚丙烯等聚烯烃、聚对苯二甲酸乙二醇酯等聚酯、醋酸纤维素、硝酸纤维素等纤维素系聚合物以及聚四氟乙烯、四氟乙烯-乙烯共聚物等含氟聚合物等。作为金属材料，例如可以使用不锈钢、钽、钛、镍钛合金、钽钛合金、镍铝合金、镍基合金(Inconel· 合金)、金、钼、铱、钨、钴铬合金等钴系合金等。在不锈钢中，使用耐腐蚀性最佳的SUS316L (SUS为日本钢号)较好。可以利用从上述例示的材料中依据该材料的应用场所或扩张方式而适当地选出的材料，较佳地形成支架主体12。例如在利用金属材料形成了支架主体12的情况下，由于金属材料的强度优异，所以能够将支架10可靠地留置在病变部。另外，在利用高分子材料形成了支架主体12的情况下，由于高分子材料的柔软性优异，所以在支架10的向病变部的到达性(输送性)的这一点上，发挥优异的效果。另外，在支架10是自扩张型的情况下，由于需要向原来的形状复原的复原力，所以优选使用镍钛等超弹性合金等，在支架10是球囊扩张型的情况下，由于优选在扩张后不易进行形状复位的材料，所以优选使用不锈钢、钴铬合金等。另外，在利用碳纤维形成了支架主体12的情况下，在高强度且柔软性优异、而且在生物体内的安全性高的这一点上，发挥优异的效果。支架主体12的大小可以根据应用场所而适当地选择。例如在用在冠状动脉中的情况下，通常优选支架主体12的扩张前的外径为I. Omm 3. Omm,长度为5mm 50mm。支架主体12的制造方法没有特别限定，可以依据支架10的构造和材料从通常使用的制造方法中适当地选择。 覆盖层13所含有的发挥细胞附着能力的物质例如可以使用以聚L-精氨酸等多肽、精氨酸(Arg)-甘氨酸(Gly)-天冬氨酸(Asp) (RGD)、精氨酸 丙氨酸 天冬氨酸这三种物质为主要成分的BD PuraMatrix 肽段水凝胶(注册商标)等具有细胞附着性的合成肽、或具有十八烷基、油稀基等具备白脘等蛋白质的吸附能力的基的合成物质等。覆盖层13的厚度也根据支架10的形状及尺寸、以及形成为固相的物质的种类的不同而不同，但优选设在如下范围内在将支架10留置在病变部时，充分地发挥通过使上述物质固相化而产生的效果，且在进行向球囊安装支架10的操作或球囊的扩张操作时，覆盖层13不会被破坏，而且能够获得支架10对球囊施加充分的夹紧力。作为覆盖层13的具体的厚度，优选为3μπι以下，更优选为2μπι以下，进一步优选为Ιμπι以下。只要覆盖层13的厚度在3μπι以下，则在进行向球囊安装支架10的操作或球囊的扩张操作时，覆盖层13就不会被破坏，而且能够获得支架10对球囊施加充分的夹紧力。优选线状覆盖部14的宽度W是易于使被附着的血管内皮细胞形成为纺锤形的尺寸。在血管内，血管内皮细胞将沿血流方向具有长轴的纺锤形视作成熟形，通过形成为该种纺锤形，从而成为功能性的细胞。因而，线状覆盖部14的宽度W只要是易于使所附着的血管内皮细胞形成为纺锤形的尺寸，则就能使近似于本来的血管内皮细胞的功能性的血管内皮细胞增殖。线状覆盖部14的宽度W优选为50 μ m以下，更优选为25 μ m以下，进一步优选为12. 5 μ m以下。相邻的线状覆盖部14间的间隔S优选为易于使增殖的血管内皮细胞形成为纺锤形的尺寸。当血管内皮细胞在线状覆盖部14上增殖后，血管内皮细胞在相邻的线状覆盖部14间增殖。因而，线状覆盖部14间的间隔S只要是易于使血管内皮细胞形成为纺锤形的尺寸，则就能使近似于本来的血管内皮细胞的功能性的血管内皮细胞增殖。相邻的线状覆盖部14间的间隔S优选为50 μ m以下，更优选为25 μ m以下，进一步优选为12. 5 μ m以下。下面，对制造上述本实施方式的支架10的方法进行说明。首先，准备支架主体12，在支架主体12的内侧表面上使具有细胞附着能力的物质固相化。使具有细胞附着能力的物质固相化的方法是，只要在将支架10留置在病变部时，覆盖层13不脱离支架主体12地在支架主体12的表面上形成为固相，则没有特别限定。因而，可以利用共价键使覆盖层13在支架主体12的表面上固相化，或者也可以利用离子键使覆盖层13在支架主体12的表面上固相化。此外，只要在将支架10留置在病变部时，覆盖层13能够不脱离支架主体12即可，也可以当在支架主体12的表面上以条纹状涂敷了具有细胞附着能力的物质后，或在形成条纹状的掩模后通过喷涂、浸溃而涂敷了具有细胞附着能力的物质后，进行烘干或热处理，使覆盖层13固化而以条纹状形成为固相。采用本实施方式的支架10，由于在支架主体12的内侧表面上以条纹状排列形成有多个线状覆盖部14，这些线状覆盖部14含有具备细胞附着能力的物质，所以当支架10在病变部扩开时，能够利用呈线状延伸的线状覆盖部14使细胞具有方向性地附着。由此，通过使细胞具有期望的方向性地附着，能够促进细胞的长大，利用细胞迅速地覆盖支架10的表面，从而能够抑制迟发性支架血栓症、再狭窄的发生。特别是在血管内，就血管内皮细胞而言，将沿血流方向具有长轴的纺锤形视作成熟形，通过形成为该种纺锤形而成为功能性的细胞。并且，在例如覆盖层13设置成平面状(例如设在支架主体的整个内侧表面上)而非线状的情况下，如图4所示，血管内皮细胞C随机地增殖，难以形成为纺锤形。针对该问题，本实施方式的支架10的具有细胞附着能力的线状覆盖部14设置为在支架主体12扩开时，沿支架主体12的长度方向X延伸，所以如 图5所示，血管内皮细胞C在线状覆盖部14上增殖，易于以在长度方向X上具有长轴的功能性的纺锤形长大。当血管内皮细胞C在线状覆盖部14上增殖后，进一步以填入相邻的线状覆盖部14间的方式在支架主体12上增殖，最后支架主体12的整个内侧表面(或一部分)由血管内皮细胞C覆盖。即，通过预先限定血管内皮细胞C的增殖范围，能够使增殖的血管内皮细胞C增殖为近似于本来形态的功能及所期望的形态，所以能够更加快速地修复细胞，且能抑制迟发性支架血栓症、再狭窄的发生。另外，在本实施方式中，在相邻的线状覆盖部14间未设有具有细胞附着能力的物质，但不一定限定于这种结构，例如也可以设置具有比线状覆盖部14的细胞附着能力弱的物质的层。在形成为这种结构时，当血管内皮细胞在线状覆盖部14上增殖后，以填入相邻线状覆盖部14间的方式增殖时，能够使细胞更加迅速地增殖。另外，图6表示第I实施方式的支架10的变形例，也可以将线状覆盖部14填入多个槽15中，这些槽15形成在支架主体12的内侧表面上。在形成为这种结构时，当进行向球囊安装支架的操作或球囊的扩张操作时，能够更加降低覆盖层13被破坏的可能性。另外，在形成为这种结构时，即使不使线状覆盖部14在支架主体12上固相化，也能降低覆盖层13被破坏的可能性。第2实施方式如图7和图8所示，本发明的第2实施方式的支架20与第I实施方式的支架10的不同之处仅在于，线状覆盖部24的延伸方向不同。另外，对于具有与第I实施方式相同的功能的部位，标注与第I实施方式相同的附图标记，省略说明，以避免重复。与第I实施方式相同，在支架主体12的内侧表面上以固相设有覆盖层23，该覆盖层23含有具备能促进细胞的附着的细胞附着能力的物质。覆盖层23用于在支架主体12扩开而留置在病变部后，利用血管平滑肌细胞覆盖支架主体12的内侧表面。血管平滑肌细胞通常呈螺旋状排列而构成血管。因而，为了使线状覆盖部24沿血管平滑肌细胞的排列方向极力与该血管平滑肌细胞类似，将线状覆盖部24设置为在支架主体12在球囊等的作用下扩开而留置在病变部的状态下，成为沿支架主体12的周向Y延伸的状态。另外，血管平滑肌细胞呈螺旋状排列而构成血管，但在直径大的血管中，螺旋间距相对于直径较小，相对于周向Y的螺旋的倾斜角度也变小(与周向Y平行地靠近)。因而，优选依据所应用的血管，设定线状覆盖部24的相对于周向Y的倾斜角度，根据情况的不同，有时也可以不倾斜(与周向Y平行)。在血管中，在呈螺旋状排列的血管平滑肌细胞上配置有血管内皮细胞。并且，本实施方式的支架设置为在支架主体12扩开时，具有细胞附着能力的线状覆盖部24沿支架主体12的周向Y延伸，所以血管平滑肌细胞在线状覆盖部24上沿周向Y排列地增殖。血管平滑肌细胞在线状覆盖部24上增殖后，进一步以填入相邻的线状覆盖部24间的方式增殖。并且，最后，血管内皮细胞进一 步在血管平滑肌细胞上增殖，使支架主体12的整个内侧表面由血管内皮细胞覆盖。即，通过预先限定血管平滑肌细胞的增殖范围，能够使增殖的血管平滑肌细胞以近似于本来的形态的期望形态增殖，能够更加快速地修复细胞，且能抑制迟发性支架血栓症、再狭窄的发生。线状覆盖部24的宽度W优选易于使被附着的血管平滑肌细胞呈螺旋状排列的尺寸。线状覆盖部24的宽度W优选为50 μ m以下，更优选为25 μ m以下，进一步优选为12. 5 μ m以下。在相邻的线状覆盖部24间，当血管平滑肌细胞在线状覆盖部24上增殖后，血管平滑肌细胞进一步以填入相邻的线状覆盖部24间的方式增殖，所以相邻的线状覆盖部24间的间隔S优选易于使增殖的血管平滑肌细胞呈螺旋状增殖的尺寸。相邻的线状覆盖部24间的间隔S优选为50 μ m以下，更优选为25 μ m以下，进一步优选为12. 5 μ m以下。另外，图9表示第2实施方式的支架20的变形例，也可以将线状覆盖部24填入多个槽25中，这些槽25形成在支架主体12的内侧表面上。在形成为这种结构时，当进行向球囊安装支架的操作或球囊的扩张操作时，能够更加降低覆盖层23被破坏的可能性。另外，在形成为这种结构时，即使不使线状覆盖部24在支架主体12上固相化，也能降低覆盖层23被破坏的可能性。实施例下面，利用实施例更加详细地说明本发明，但本发明并不限定于此。参考例对于通过在基材(CoCr合金)(HIGHTEMPMETALS公司生产，型号L605)上如图10和图11所示地呈条纹状设置BD PuraMatrix 肽段水凝胶(注册商标)而形成有多个线状的线状覆盖部34的覆盖基材30，通过培养细胞对该覆盖基材30和原料与上述(CoCr合金)基材相同且完全没设置覆盖部的基材(未加工基材)进行了比较实验。线状覆盖部34的宽度W设为200 μ m，相邻的线状覆盖部34间的间隔D设为200 μ m。细胞培养使用的是来自正常人体大动脉的血管内皮细胞。培养细胞用添加了 10%胎牛血清(FBS)的CSC-C培养基，在CO2保温箱(5% CO2,37 °C)内以每周更换2次培养基的方式进行了培养。在放入有该覆盖基材30和未加工基材的12wellplate (孔板)上以5X104cells/well的条件播种了来自正常人体大动脉的血管内皮细胞，培养了 72个小时。在培养了 72个小时后，将各基材转移到新的12well plate上，在每个孔中添加Iml的以10%的浓度添加了活细胞数量测量试剂SF的培养基。在以37°C、5%的CO2的条件保温了 3个小时后,使用酶标仪(microplate reader)测量各孔的吸光度,从而测量了活细胞数量。
结果如图12所示，确认了与未加工基材相比，覆盖基材30的活细胞数量较多。由此确认了覆盖基材的覆盖部的BDTMPUraMatrix 肽段水凝胶(注册商标)能够促进血管内皮细胞的增殖。实施例在由金属(CoCr合金)制成且外径为3. 0mm、长度为15mm的圆筒形状的支架主体的内侧表面上，设置由BDTMPUraMatriXTM肽段水凝胶(注册商标)构成的线状覆盖部，制成支架。该支架的线状覆盖部的延伸方向为支架的长度方向X，线状覆盖部的宽度W为50 μ m，相邻的线状覆盖部间的间隔S为50 μ m。将上述支架留置在兔子的冠状动脉内，在将支架留置了 14天后进行了解剖检查，自兔子冠状动脉取出支架，用剪子沿长轴方向将支架剪成两半。利用扫描型电子显微镜(SEM)对覆盖在两半的支架的内腔上的血管内皮细胞进行了观察。比较例I 利用除了在支架主体的整个内侧表面上设有BD PuraMatrix 肽段水凝胶(注册商标)以外，其他结构与上述实施例相同的支架，进行了与实施例同样的观察。比较例2利用除了在支架主体上完全未设有BD PuraMatrix 肽段水凝胶(注册商标)以夕卜，其他结构与上述实施例相同的支架，进行了与实施例同样的观察。结果观察到在留置的支架中，具有线状覆盖部的实施例的支架最佳地覆盖血管内皮细胞。由此确认了进行覆盖的BD PuraMatrix 肽段水凝胶(注册商标)和线状覆盖部这一构造能够促进血管内皮细胞的增殖。另外，本发明并不限定于上述实施方式，可以在权利要求的范围内进行各种改变。例如也可以在支架上设置具有细胞附着能力的除覆盖层以外的层，也可以在支架主体的与生物体组织相接触的外侧表面上，形成具有抑制再狭窄效果的生物学的生理活性物质的层。另外，线状覆盖部也可以不设在支架主体的整个内侧表面上。另外，第I实施方式以促进血管内皮细胞的增殖为目的，第2实施方式以促进血管平滑肌细胞的增殖为目的，但本发明并不限定于这两个目的，可以根据支架的设置部位的细胞适当地进行设计变更而使用该支架。此外，本申请基于2010年3月30日提交的日本特许出愿番号2010-076616号，且参照并引用了该文献的所有记载内容。附图标记说明10、20、支架；11、环状部；12、支架主体；13、23、覆盖层；14、24、线状覆盖部；15、
25、槽；S、D、间隔；W、宽度；X ;长度方向；Y、周向。


本发明提供一种支架。通过使细胞在支架的内侧表面上具有方向性地增殖，能够利用细胞迅速地覆盖支架表面，抑制或者减少迟发性支架血栓症、再狭窄的发生。支架(10)包括圆筒状的支架主体(12)，其在两端具有开口部，且在上述两端的开口部间沿长度方向X延伸；覆盖层(13)，其设在上述支架主体(12)的内侧表面上，含有具备能促进细胞的附着的细胞附着能力的物质，通过以条纹状排列多个呈线状延伸的线状覆盖部(14)，形成上述覆盖层(13)。