一种治疗器官纤维化的药物组合物及其制备方法和用途[0002]肺纤维化(Pulmonary fibrosis/PF)疾病是多种原因引起肺部炎症和肺泡持续性损伤及细胞外基质的反复破坏、修复、重建和过度沉积从而导致正常的肺组织结构改变和功能丧失的一类疾病谱，是多种原因引起慢性肺疾病的共同结局，是呼吸衰竭的主要病理基础，其病因和发病机制复杂，其确切的发病机制虽然目前尚未彻底阐明，但多种细胞因子及其网络的调控是其发生发展病理机制的极重要因素。[0003]肺纤维化属于国际关注度极高的一类难治性重大病种，国内外研究认为:纤维化是慢性病久治不愈的根本原因，也是其致残、致死的主因，有近50%的死亡与纤维化有关，而各种慢性肺病久治不愈的根本原因即在于其有纤维化病变。肺纤维化(PF)是器官纤维化中最具代表性、最典型最常发者，其病因复杂，除非典型肺炎可致PF外，很多肺系疾病均可导致PF，至少有150种以上病因与之相关。治疗上，目前尚仅限于非特异性抗炎、免疫抑制剂及糖皮质激素等方法，其共同特点是缺少特异性治疗，且大量使用抗生素和激素，这本身就是导致纤维化和加重纤维化的重要原因。随着其发病率、死亡率的不断上升，PF研究已成为世界关注热点，故寻求中医药等其他疗法已成当务之急。[0004]过去认为器官的纤维化一旦形成，就不能逆转。然而，上世纪九十年代以来，大量实验研究结果表明，包括肺纤维化在内的器官纤维化是可以逆转的。各种器官纤维化之所以都可以经过正确的治疗和调理发生过程相似的逆转，是因为在细胞水平和分子水平上各种纤维化形成的过程就非常相似，具有殊途同归的特点。这些相似的发生过程提示，一种器官纤维化发生机制的研究结果，也适用于其他各种器官纤维化；对一种器官纤维化的有效治疗方法，对阻止、减轻其他各种组织器官纤维化也是有益的(Border WA.Evidencethat TGF-β should be a therapeutic target in diabetic nephropathy.KidneyInt, 1998，54:1390-1391.)。有鉴于此，国内外许多学者集中力量从一种器官纤维化的逆转开始，逐渐扩展到多种器官纤维化逆转的研究，获得了器官纤维化可以逆转的大量证据，其中包括肺纤维化。[0005]虽然肺纤维化具有治疗可逆性，但目前尚缺乏满意的西医药防治手段，这可能与肺纤维化发病的多因素、病变的多靶点、病理进程的多样性等相关。作为一种典型的复杂性疾病，以单靶点为主的西医化学药物经常显得无能为力，中医药等传统医学在器官纤维化的治疗方面拥有很大的潜力和优势，基于疗效确切的中医药开发抗器官纤维化的药物，特别是开发抗肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化的药物，前景日益广阔。[0006]中医认为肺纤维化属于典型的“本虚标实”病证，其病机为“病已久一本已虚”、“虚、阻相夹”，可归属中医络病范畴(李戎.论艾灸肺俞膏肓俞治疗肺纤维化的中医理论基础与施治依据.辽宁中医杂志，2004，31 (4):291-293.)。杨珂等报道了一种扶正化瘀方，主要成分为绞股蓝、丹参、冬虫夏草，用于抗大鼠肺纤维化，效果明显；常继亭报道了一种抗纤汤，主要成分为太子参、黄芪、沙参、麦冬、丹参、当归、蛤蚧等10味中药组成，临床上用于治疗特发性肺纤维化，疗效显著。
[0007]本发明的目的在于提供一种治疗器官纤维化的药物组合物及其制备方法和用途。
[0008]本发明提供了一种治疗器官纤维化的药物组合物，它是由如下重量配比的原料药制备而成的制剂:
[0009]鱼腥草干品24~36份或鱼腥草生品75~105份，虎杖8~12份，红景天20~28份，人参8~12份，黄芪20~28份，丹参16~24份，当归9~15份，三七3.5~6.5份，川牛膝8~12份,石斛15~21份,麦冬16~24份，甘草4.5~7.5份。
[0010]进一步地，它是由如下重量配比的原料药制备而成的制剂:
[0011]鱼腥草干品30份或鱼腥草生品90份，虎杖10份，红景天24份，人参10份，黄芪24份，丹参20份，当归12份，三七5份，川牛膝10份，石斛18份，麦冬20份，甘草6份。
[0012]其中，所述黄芪为炙黄芪；所述甘草为炙甘草。
[0013]其中，所述药物组合物是由所述重量配比的原料药的水或有机溶剂提取物为活性成分，加上药学上常用的辅料或者辅助性成分制备而成的制剂。
[0014]进一步地，所述制剂为经胃肠道吸收制剂。
[0015]所述制剂包括口服给药途径所用制剂，如胶囊剂、颗粒剂、散剂、片剂、口服液、丸剂等剂型。
[0016]本发明还提供了上述药物组合物的制备方法，它包括如下步骤:
[0017](1)按所述重量配比称取原料药；
[0018](2)加水或有机溶剂提取，合并提取液，浓缩后，加上药学上可用的辅料或辅助性成分制备成常规制剂。
[0019]本发明进一步提供了上述药物组合物在制备治疗器官纤维化的药物中的用途。
[0020]进一步地，所述药物是治疗肺纤维化的药物。
[0021]更进一步地，所述药物是提高肺组织内IFN-Y含量的药物。
[0022]更进一步地，所述药物是治疗气血俱虚、热毒盛而阴已伤证型的肺纤维化的药物。
[0023]目前已公认“整体观念”、“辨证施治”、“复方使用”、“复方配伍用药如用兵”是中医最科学最有效的几大优势，其中“复方配伍用药如用兵”是非常科学的中医药原创理论。中医组方中各药如行兵布阵那样环环相扣的严密配伍，是其优于西医化学药配方的有效手段。中医方剂理论认为，每一方剂，不仅需要根据病因病机选择合适的药物妥善配伍，同时也应符合组方的基本结构，即“君、臣、佐、使”的组方配伍理论，所谓“君、臣、佐、使”的组方配伍，就是其建立在对疾病病机的全方位判断基础上的科学配比。中医用方通过多环节、多靶点整合调节的生物学机制，对肺纤维化这样具有发病多因素、病变多靶点、病理进程多样性(“三多”)等复杂特点、治疗困难的疾病或其症状进行调控，可以取得比西医化学药更好、更持久的治疗效果，且避免了西医化学药的毒副作用，而这种疗效是建立在上述中医传统原创理论的正确指导之上的，本发明组方正遵循了这一原则。
[0024]本发明药物组合物中，重用鱼腥草为君药，急清其肺热解其热毒，虎杖亦善清热解毒，其与红景天均有杀灭或抑制病菌、消缓炎症的功效，故将二味用为臣药，以辅君药清解之劳。川牛膝、红景天、丹参、当归、三七用为左路之佐药，从一个侧面辅佐君臣增效。人参、黄芪补气固本；三七富含人参皂苷，具有补气养血作用；红景天也是增强人体免疫功能的妙品；当归养血；丹参补血活血；石斛、麦冬滋养肺阴。以上补气、养血、滋阴的八味药，共同扶助正气，顾养本真，以防君臣急清亟解可能伤正之弊，所以一起遣作右路之佐药，从另一侧面襄助君臣收工。甘草亦有清热解毒之效，更擅调和诸药，因而以之为使药。
[0025]以上君臣佐使各组药味职司分明，相辅相成，充分发挥了中医学所独有的复方配伍用药如排军布阵般的思辨性科学研究方法论精髓，对于可以提高纤维化器官内IFN-Y含量，对器官纤维化特别是肺纤维化有着良好的治疗效果，为临床用药提供了一种新的选择。

[0026]实施例1本发明药物组合物的制备
[0027]取鱼腥草干品30克，虎杖10克，红景天24克，人参10克，黄芪24克，丹参20克，当归12克，三七5克，川牛膝10克，石斛18，麦冬20克，甘草6克。各药味按量称取，掺以足量的净水，武火煎沸后改文火再煎煮10分钟至15分钟，收集水煎液，再加水煎煮2次，合并各次水煎液，即得汤剂。
[0028]实施例2本发明药物组合物的制备
[0029]取鱼腥草生品90克，虎杖10克，红景天24克，人参10克，炙黄芪24克，丹参20克，当归12克，三七5克，川牛膝10克，石斛18，麦冬20克，炙甘草6克。先以70%v/v乙醇提取2次后，合并醇提液，药渣再以水煎煮2次，合并水煎液。分别将醇提液、水煎液浓缩后，混合，再加入适当糊精、可溶性淀粉，制粒，即得颗粒剂。
[0030]实施例3本发明药物组合物的制备
[0031]取鱼腥草干品24克，虎杖8克，红景天20克，人参8克，黄芪炙20克，丹参16克，当归9克，三七粉3.5克，川牛膝8克，石斛15，麦冬16克，甘草4.5克。先以70%v/v乙醇提取2次后，合并醇提液，药渣再以水煎煮2次，合并水煎液。分别将醇提液、水煎液浓缩后，混合，再加入适量糊精、可溶性淀粉，制粒，压片，即得片剂。
[0032]实施例4本发明药物组合物的制备
[0033]取鱼腥草36克，虎杖12克，红景天28克，人参12克，黄芪炙28克，丹参24克，当归15克，三七6.5克，川牛膝12克，石斛21，麦冬24克，甘草6.5克。各药味按量称取，掺以足量的净水，武火煎沸后改文火再煎煮10分钟至15分钟，收集水煎液，再加水煎煮2次，合并滤液，浓缩，加入适量微晶纤维素，混匀后，装胶囊，即得胶囊剂。
[0034]实施例5本发明药物组合物的制备
[0035]取实施例1制备的汤剂，静置，取上清液，浓缩后，干燥，粉碎，备用；取适量聚乙二醇4000，熔融后，将上述药粉加入熔融基质中，75-85°C下保温；采用各型滴丸机，滴口内/外径及滴速适度，将其滴入二甲基硅油中，收集滴丸，即得滴丸剂。
[0036]以下通过试验例具体说明本发明的有益效果。
[0037]试验例1本发明药物对大鼠实验性肺纤维化的治疗作用
[0038]1、材料与方法
[0039]1.1 材料[0040]1.1.1 动物
[0041 ] 实验用健康SD大鼠60只，雌雄各半，体重180 土 20g，实验前单笼驯养I周，饲养温度和湿度分别为25°C和70%左右。
[0042]1.1.2主要药品
[0043]本发明药物:由实施例1制备，水煎后水浴浓缩至一定浓度，再用蒸馏水配成1.5g生药/ml的药液；
[0044]泼尼松:南通制药厂生产，批号951101，用时研成粉末，以蒸馏水溶解配成50%的混悬液；
[0045]博莱霉素A5 (BLM A5):天津河北制药厂，批号950902，8mg/支，用时以无菌生理盐水稀释成4mg/ml的溶液；
[0046]氯化钠注射液:张家港市制药厂，生产批号为01032204，100ml/瓶；
[0047]乙醚:天津市博迪化工有限公司，产品标准号GB/T12951-2002。
[0048]1.1.3主要仪器
[0049]试剂盒:免疫组化、原位杂交成套试剂盒购自博士德生物工程有限公司；1/10000电子分析天平:德国BP61 ；
[0050]BX50光学显微镜:日本OLYMPUS公司；
[0051]Leica图像分析系统；德国LEICA`公司。
[0052]1.2动物分组及造模
[0053]将前述实验用SD大鼠随机分为4组:空白组、模型组、本发明药物治疗组(以下简称“本方组”)、泼尼松(激素)对照组，每组15只。造模采用国际上通用的博莱霉素(BLMA5)制作大鼠肺纤维化模型。具体方法为，除空白组外，其余3组室温调高5°C，即达到30°C，饮水中兑入适量“造火生热”的制附片、干姜煎液，并减少喂饲物水分，以造成其“火热并气血虚”体征。然后，气管内注入博莱霉素制作大鼠肺纤维化模型:在乙醚麻醉下，将大鼠固定于手术板上，消毒后切开颈部皮肤，逐层分离，充分暴露气管，用Iml注射器抽取定量的博莱霉素稀释液(5mg/kg)，一次性注入其气管内，立即旋转大鼠，使药物充分均匀散布于双肺，消毒，缝合，几分钟后大鼠醒来即可自由觅食。造模后，模型组、本方组、泼尼松对照组的室温、喂食均恢复与空白组相同。上述造模方法所得模型，即为气血俱虚、热毒盛而阴已伤证型的肺纤维化模型。
[0054]1.3试验方法
[0055]造模后第7天开始治疗，本发明药物中剂量组按人剂量的10倍，即5g生药/kg给大鼠灌胃；空白组和模型组按等容量生理盐水灌胃作为对照；泼尼松组第7天开始胃内灌入泼尼松5mg/kg体重；连续治疗30天。各组动物在实验过程中均有不同程度的死亡。治疗结束后，处死动物，快速开胸取肺组织标本，都取左中肺，标本立即放入_70°C低温冰箱保存。每组随机取8个标本，备用以作检测。
[0056]1.3.1 一般情况观察
[0057]观察大鼠食欲、神态、反应能力、体毛、肌肉及呼吸的情况，并每10天称体重I次。
[0058]1.3.2检测肺系数
[0059]肺系数=肺重量(g)/身体重量(kg)
[0060]1.3.3病理组织形态光镜观察[0061]肺组织常规固定、包埋、HE染色。根据Szapiel等的方法确定肺泡炎和肺纤维化的程度。利用HE染色的病理切片将肺泡炎分为四级:无肺泡炎㈠；轻度肺泡炎⑴:肺泡隔因细胞浸润增宽，病变范围局限在全肺的20%以下；中度肺泡炎(++):病变范围占全肺的20%~50%;重度肺泡炎(+++):呈弥漫性分布，病变范围大于50%。将肺间质纤维化分为四级:无纤维化(_);轻度纤维化(+):受累范围小于20%;中度纤维化(++):受累范围占全肺的20%~50%，肺泡结构紊乱；重度肺纤维化(+++):受累范围大于50%，肺泡融合，肺实质结构紊乱。
[0062]1.3.4免疫组化检测
[0063]肺组织常规固定、包埋、切片、脱蜡，常规方法作免疫组化检测肺组织IFN- Y蛋白的表达量。在400X视野下选取5个视野先进行阳性细胞计数，然后以计算机图像分析系统选取10个视野进行染色结果的平均灰度分析。平均灰度可相对定量反映免疫组化阳性强弱的变化，平均灰度与免疫组化阳性染色程度呈负相关，即平均灰度值大则阳性表达弱。
[0064]1.3.5原位杂交检测
[0065]肺组织常规固定、包埋、切片、脱蜡，按照试剂盒说明书进行原位杂交检测肺组织IFN-Y的mRNA表达。在400 X视野下选取5个视野先进行阳性细胞计数，然后以计算机图像分析系统选取10个视野进行染色结果的平均灰度分析。平均灰度与免疫组化阳性染色程度呈负相关，即平均灰度值大则阳性表达弱。
[0066]1.3.6统计方法
[0067]结果以均数土标准差(X 土 S )表示，采用SPSS10.0统计软件包进行单因素方差分析，Q检验。等级资料结果采用Ridit分析。
[0068]2、结果
[0069]2.1肉眼观察
[0070]结果如表1所示:
[0071 ] 表1各组大鼠一般情况的比较
[0072]