专利名称：一种具有抗癌作用的含冬凌草总萜的乳剂的制作方法 冬凌草(Rabdosia rubescens)又名冰凌草，系唇形科香茶菜属植物，主产于我国河南、河北、山西、四川等地，具有清热解毒、消炎止痛之功效，民间用于治疗食管癌和胃癌。1991年我国卫生部批准将冬凌草干燥叶及地上部分作为中药材，收入部颁中药材标准。我国从二十世纪70年代起对冬凌草的化学成分、药理作用及临床应用开始研究，实验表明冬凌草的主要药效成分为萜类化合物，其中含量较高的为二萜和三萜类。二萜中的主要有效成分为冬凌草甲素、乙素；三萜中的主要有效成分为齐墩果酸和熊果酸。冬凌草甲素、乙素具有较强的抗肿瘤活性，它们对体内外培养的Hela细胞、人体食管癌109细胞及肝癌BEL-7402细胞有明显的细胞毒作用，对多种移植性动物肿瘤如ECA、S180、P388、L1210肝癌及ARS有明显抗肿瘤作用。齐墩果酸有保肝、降酶、抗炎、升白细胞、增强机体免疫功能、抗肿瘤等方面的作用(袁珂、胡润淮、冀春茹，冬凌草中萜类成分提取分离工艺的研究，中国医药工业杂志，1997，28(8)347)。临床研究证明冬凌草粗提物和冬凌草甲素对食管癌、原发性肝癌、膀胱癌、胰腺癌、大肠癌和乳腺癌都有明显疗效(河南医学第一附属医院肿瘤科，冬凌草单用及化疗药物并用治疗恶性肿瘤50例临床疗效观察，河南医学院学报，1975，10(2)；17；王瑞林，冬凌草与化疗合用治疗食管癌增效作用的探讨，中华肿瘤杂志，1986，8(4)；291；陈绍棠，等，鲁山冬凌草治疗食管癌贲门癌80例疗效观察，中西医结合杂志，1988，8(1)；43；王瑞林，食管癌437例临床疗效观察，中西医结合杂志，1989，9(12)43；河南省冬凌草研究协会作组，冬凌草治疗食管癌、贲门癌95例临床疗效结果，肿瘤防治研究，1994，11(2)；86)。冬凌草的传统制剂为片剂和糖浆剂，由于萜类化合物不溶于水，溶于有机溶剂，口服生物利用度低，降低了其临床效果；科研人员曾试制了冬凌草甲素注射液(癌得宁)并试用于临床，虽然可提高疗效，但由于该制剂中有机溶剂比例较大，长期静脉滴注引起局部血管发炎、疼痛，从而限制了其临床应用(刘晨江、赵志鸿、冬凌草的研究进展，中国药学杂志，1998，33(10)577)。(7)JhChen(陈俊辉).The Anticancer Effects of Oridonin in Vitro.AssembleArticles for International Think-Tank Forum on Anti-Cancer Innovationsand Global Collaborations，Page 158，2005，Beijing。为了更好地发挥冬凌草的治疗效果，提高病人的顺应性，有必要对其现有的制剂进行改进。乳剂(emulsions)系指互不相溶的两相液体混合，其中一相液体以液滴状态分散于另一相中形成的非均相液体分散体系。乳剂液滴大小一般在0.1~100微米之间，乳滴直径在140纳米以下时称为微乳。乳剂中的液滴分散度很大，药物吸收的速度和程度提高，即其生物利用度提高；口服乳剂容易被淋巴系统摄取，静脉注射乳剂在体内可以被网状内皮系统吞噬(如肝、脾、肾)，具有靶向性，因此乳剂是抗癌药物常用的有效剂型，如鸦胆子油乳、氟尿嘧啶乳剂、康莱特注射液等。
本发明的目的是提供一种具有抗癌作用的含冬凌草总萜的乳剂，克服了上述冬凌草萜类制剂药物的缺点。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的一种具有抗癌作用的含冬凌草总萜的乳剂，是由以下原料重量百分比组分制备而成的制剂冬凌草总萜0.001～2％、油脂5～40％、乳化剂0.5～20％、等渗剂2.5～10％、注射用水余量加至100％；所述组分优选为冬凌草总萜0.01～0.5％、油脂10～20％、乳化剂2.5～10％、等渗剂3.0～4％、注射用水余量加至100％。所述油脂为大豆油、玉米油、山茶油、芝麻油、花生油、橄榄油、棉籽油、菜籽油、蓖麻油或油酸乙脂，优选为大豆油、玉米油、山茶油或油酸乙酯。所述乳化剂为磷脂、氧乙烯氧丙烯嵌段共聚物、聚山梨酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯氢化蓖麻油或蔗糖脂肪酸酯，优选为大豆磷脂、泊洛沙姆或吐温-80。
所述等渗剂选自多元醇，尤其是甘油或丙二醇。
所述冬凌草总萜中含有冬凌草甲素50％以上。
本发明还提供了一种具有抗癌作用的含冬凌草总萜的乳剂的制备方法，包括以下步骤(1)取上述原料组分，混合共加热至60-80℃，全部熔融，加入高速捣碎机或搅拌器中，同时加入60-90℃注射用水适量，高速搅拌，直到得到均匀的乳剂；得到乳剂；(2)乳剂冷却后，加入剩余注射用水至处方量，在高压乳匀机或胶体磨或超声波乳化器中内循环乳匀，收集粒径1～2微米的乳剂，加压过滤，即得所述乳剂。
所述制备方法，优选包括所述原料组分，混合共同加热至80℃，另取80℃注射用水适量，一起捣碎，并高速搅拌，7000-9000转/分钟，每次持续2-4分钟，重复2-4次，得到白色乳剂；乳剂冷却后，加入剩余注射用水，在高压乳匀机循环乳匀2-4次；收集粒径1～2微米的乳剂，加压过滤，滤膜孔径2-4微米；即得所述乳剂。
所述制备方法，最优选所述原料组分高速搅拌，8000转/分钟，每次持3分钟，重复3次，得到白色乳剂；乳剂冷却后，加入剩余注射用水，在高压乳匀机循环乳匀3次；收集粒径1～2微米的乳剂，加压过滤，滤膜孔径3微米；即得所述乳剂。
所述制备方法，还包括所述乳剂分装于安瓿中，充入氮气，封口，在100℃条件下加入热30分钟，灭菌，冷却，取出，即得所述乳剂。
本发明中的乳化设备可以是本专业熟知的器械，如高速捣碎机、搅拌器、胶体磨、乳匀机、以及超声波乳化器等。
本发明乳剂可以以静脉注射、肌肉注射或口服方式给药，乳剂用于静脉注射，治疗效果明显，没有明显刺激，癌症患者容易接受。
本发明优质原料均可以从市场上购得。
本发明一种具有抗癌作用的含冬凌草总萜的乳剂，具有以下优点1、将冬凌草的有效部位冬凌草总萜，其中含冬凌草甲素50％以上，制备成稳定性好，粒径小的乳剂。当乳剂通过口服途径给药时，可以提高药物的吸收速度和吸收程度，即提高药物的生物利用度；药物容易被淋巴系统摄取，增强对癌症治疗的靶向性；对于吞咽困难的消化道癌症患者，服用方便。当乳剂通过静脉注射或肌肉注射后，药物分布快、起效快；静脉注射乳剂在体内可以被网状内皮系统吞噬(如肝、脾、肾)，具有靶向性。另外，乳剂中的油脂成分还可以为机体补充营养，增强患者的抗病能力。
2、本发明为达到制备稳定乳剂，制定了合理的处方与工艺。
3、用于人体注射后的实验数据用冬凌草总萜乳剂注射液分别用于早期食管癌76例，胃底贲门癌34例，原发膀胱癌9例，原发性肝癌22例，以每20μg/kg体重的剂量连续用药2-3疗程(每个疗程15天，每二日1次静滴)。结果显示，能使病灶缩小，症状减轻，生存期延长。其中76例早期食管癌1、3、5年的生存率分别为100％、98.6％和84.02％。
表明本发明的冬凌草总萜乳剂在临床应用中有以下明显特点(1)冬凌草总萜静脉注射乳剂注射后分布较快、药效提高、具有靶向性，油脂还可以提供一定的营养。所有应用冬凌草总萜乳剂治疗的病人均能完成临床规定的疗程，并使临床疗效在原来的基础上提高了40％。而过去采用的醇剂静脉给药，病人难以耐受局部刺激而不得不中断治疗。
(2)冬凌草总萜乳剂口服与传统的片剂和糖浆剂相比，生物利用度提高，使用方便；该乳剂无明显味道，无刺激，口服患者易接受。(3)由于本乳剂可以采用静滴、静注、肌注、口服等多种途径，是具备适应症患者均能安全地进行临床使用的剂型。
为证明上述乳剂的效果，本发明进行了以下动物试验为证实冬凌草总萜乳剂的药效学，我们分别进行了动物体内的药效学试验。按10μg/kg的剂量注射于荷瘤动物腹腔内，显示对艾氏腹水瘤、肉瘤S180、肝癌腹水型及实体型、网织细胞型肉瘤均有明显的抗肿瘤作用，对肺腺癌SPCA1、肺鳞癌LTPE78较差，对白血病L1210、P338及HL60有抑制作用。

下面实施例用于进一步说明本发明，但并不意味着对本发明的任何限制。
实施例1冬凌草总萜乳剂原料成分用量(g)冬凌草总萜0.2、大豆油120、大豆磷脂50、甘油30、注射用水余量至1000ml。
制备工艺将处方量冬凌草总萜、大豆油、大豆磷脂、甘油共同加热至80℃，另取80℃注射用水500ml，一起加入组织捣碎机，并高速搅拌，8000转/分钟，每次持续3分钟，重复3次，得到白色乳剂。乳剂冷却后，加入剩余的注射用水，在高压乳匀机循环3次。显微镜下观察，大部分乳滴粒径在1微米以下，只有5％左右的粒子直径在1～2微米，收集乳剂产品，加压过滤，滤膜孔径3微米。乳剂分装于10ml安瓿中，充入氮气，封口，在100℃条件下加入热30分钟，冷却，取出。取少量样品检测，冬凌草总萜及冬凌草甲素含量没有变化，乳滴粒径没有明显变化。该乳剂室内避光保存1年后，取少量样品检测，冬凌草总萜及冬凌草甲素含量没有变化，乳滴粒径没有明显变化。
该乳剂用于静脉注射，治疗效果明显，没有明显刺激，癌症患者容易接受。
实施例2冬凌草总萜乳剂原料成分用量(g)冬凌草总萜0.5、玉米油160、大豆磷脂60、泊洛沙姆P1885、丙二醇30、注射用水余量至1000ml。
制备工艺将处方量冬凌草总萜、玉米油、泊洛沙姆P188、丙二醇共同加热至80℃，另取80℃注射用水500ml，一起加入组织捣碎机，并高速搅拌，8000转/分钟，每次持续3分钟，重复3次，得到白色乳剂。乳剂冷却后，加入剩余的注射用水，在胶体磨中研磨，至乳滴粒径在1微米以下的占90％，1～2微米的占6％，其余的在2微米以下，没有大于5微米的乳滴。3微米滤膜过滤，乳剂分装在可以铝箔旋盖的25ml棕色玻璃瓶中，充入氮气，旋盖，在100℃条件下加热30分钟，冷却，取出少量样品检测，冬凌草总萜及冬凌草甲素含量没有变化，乳滴粒径没有明显变化。该乳剂室温保存1年后，取少量样品检测，冬凌草总萜及冬凌草甲素含量没有变化，乳滴粒径没有明显变化。
该乳剂用于口服，无明显味道，无刺激，患者易接受。
实施例3冬凌草总萜乳剂原料成分用量(g)冬凌草总萜0.1、山茶油100、氧乙烯氧丙烯嵌段共聚物25、甘油25、注射用水余量至1000ml。
制备工艺将处方量冬凌草总萜、山茶油、氧乙烯氧丙烯嵌段共聚物、甘油共同加热至60℃，另取70℃注射用水500ml，一起加入高速搅拌机搅拌，8000转/分钟，每次持续3分钟，重复3次，得到白色乳剂。乳剂冷却后，加入剩余的注射用水，，在高压乳匀机循环3次。显微镜下观察，大部分乳滴粒径在1微米以下，只有5％左右的粒子直径在1～2微米，收集乳剂产品，加压过滤，滤膜孔径3微米。乳剂分装于10ml安瓿中，充入氮气，封口，在100℃条件下加热30分钟，冷却，取出。取少量样品检测，冬凌草总萜及冬凌草甲素含量没有变化，乳滴粒径没有明显变化。该乳剂室温保存1年后，取少量样品检测，冬凌草总萜及冬凌草甲素含量没有变化，乳滴粒径没有明显变化。
该乳剂用于静脉注射，治疗效果明显，没有明显刺激，癌症患者容易接受。
实施例4冬凌草总萜乳剂原料成分用量(g)冬凌草总萜5、油酸乙酯200、吐温-80100、丙二醇40、注射用水余量至1000ml。
制备工艺将处方量冬凌草总萜、油酸乙酯、吐温-80、丙二醇共同加热至80℃，另取80℃注射用水500ml，一起加入组织捣碎机，并高速搅拌，8000转/分钟，每次持续3分钟，重复3次，得到白色乳剂。加入剩余的注射用水，维持液体温度80℃，在超声波乳化器中乳化，可得到粒径在1～3微米的乳滴。收集乳剂产品，加压过滤，滤膜孔径5微米。乳剂分装于10ml安瓿中，充入氮气，封口，在100℃条件下加入热30分钟，冷却，取出。取少量样品检测，冬凌草总萜及冬凌草甲素含量没有变化，乳滴粒径没有明显变化。该乳剂室温保存1年后，取少量样品检测，冬凌草总萜及冬凌草甲素含量没有变化，乳滴粒径没有明显变化。
该乳剂用于口服，无明显味道，无刺激，患者易接受。
实施例5冬凌草总萜乳剂原料成分用量(g)冬凌草总萜2.5、花生油150、聚山梨醇70、甘油35、注射用水余量至1000ml。
制备工艺将处方量冬凌草总萜、花生油、聚山梨醇、甘油共同加热至80℃，另取80℃注射用水500ml，一起加入组织捣碎机，并高速搅拌，8000转/分钟，每次持续3分钟，重复3次，得到白色乳剂。乳剂冷却后，加入剩余注射用水，在高压乳匀机循环3次。显微镜下观察，大部分乳滴粒径在1微米以下，只有5％左右的粒子直径在1～2微米，收集乳剂产品，加压过滤，滤膜孔径3微米。乳剂分装于10ml安瓿中，充入氮气，封口，在100℃条件下加入热30分钟，冷却，取出。取少量样品检测，冬凌草总萜及冬凌草甲素含量没有变化，乳滴粒径没有明显变化。该乳剂室温保存1年后，取少量样品检测，冬凌草总萜及冬凌草甲素含量没有变化，乳滴粒径没有明显变化。
该乳剂用于静脉注射，治疗效果明显，没有明显刺激，癌症患者容易接受。
实施例6冬凌草总萜乳剂原料成分用量(g)冬凌草总萜3.5、橄榄油170、蔗糖脂肪酸酯60、丙二醇40、注射用水余量至1000ml。
制备工艺将处方量冬凌草总萜、橄榄油、蔗糖脂肪酸酯、丙二醇共同加热至80℃，另取80℃注射用水500ml，一起加入组织捣碎机，并高速搅拌，8000转/分钟，每次持续3分钟，重复3次，得到白色乳剂。乳剂冷却后，加入剩余注射用水，在高压乳匀机循环3次。显微镜下观察，大部分乳滴粒径在1微米以下，只有5％左右的粒子直径在1～2微米，收集乳剂产品，加压过滤，滤膜孔径3微米。乳剂分装于10ml安瓿中，充入氮气，封口，在100℃条件下加入热30分钟，冷却，取出。取少量样品检测，冬凌草总萜及冬凌草甲素含量没有变化，乳滴粒径没有明显变化。该乳剂室温保存1年后，取少量样品检测，冬凌草总萜及冬凌草甲素含量没有变化，乳滴粒径没有明显变化。
该乳剂用于静脉注射，治疗效果明显，没有明显刺激，癌症患者容易接受。
实施例7冬凌草总萜乳剂原料成分用量(g)冬凌草总萜0.01、油脂50、乳化剂5、等渗剂25、注射用水余量加至1000ml。
制备工艺将原料共同加热至70℃，另取70℃注射用水500ml，一起加入组织捣碎机，并高速搅拌，7000转/分钟，每次持续2分钟，重复2次，得到白色乳剂。乳剂冷却后，加入剩余注射用水，在高压乳匀机循环2次。显微镜下观察，大部分乳滴粒径在1微米以下，收集直径在1～2微米乳剂，加压过滤，滤膜孔径3微米。乳剂分装于10ml安瓿中，充入氮气，封口，在100℃条件下加入热30分钟，冷却，取出。取少量样品检测，冬凌草总萜及冬凌草甲素含量没有变化，乳滴粒径没有明显变化。该乳剂室温保存1年后，取少量样品检测，冬凌草总萜及冬凌草甲素含量没有变化，乳滴粒径没有明显变化。
该乳剂用于静脉注射，治疗效果明显，没有明显刺激，癌症患者容易接受。
实施例7冬凌草总萜乳剂原料成分用量(g)冬凌草总萜20、油脂山茶油400、乳化剂吐温-80 200、等渗剂甘油100、注射用水余量加至1000ml。
制备工艺将原料共同加热至80℃，另取80℃注射用水500ml，一起加入组织捣碎机，并高速搅拌，8000转/分钟，每次持续3分钟，重复3次，得到白色乳剂。乳剂冷却后，加入剩余注射用水，在高压乳匀机循环3次。显微镜下观察，大部分乳滴粒径在1微米以下，收集直径在1～2微米乳剂，加压过滤，滤膜孔径3微米。乳剂分装于10ml安瓿中，充入氮气，封口，在100℃条件下加入热30分钟，冷却，取出。取少量样品检测，冬凌草总萜及冬凌草甲素含量没有变化，乳滴粒径没有明显变化。该乳剂室温保存1年后，取少量样品检测，冬凌草总萜及冬凌草甲素含量没有变化，乳滴粒径没有明显变化。
该乳剂用于静脉注射，治疗效果明显，没有明显刺激，癌症患者容易接受。
实施例8冬凌草总萜乳剂原料成分用量(g)冬凌草总萜0.1、油脂100、乳化剂25、等渗剂30、注射用水余量加至1000ml。所述油脂为油酸乙酯。所述乳化剂为大豆磷脂。所述等渗剂是丙二醇。
制备工艺将原料共同加热至90℃，另取90℃注射用水500ml，一起加入组织捣碎机，并高速搅拌，9000转/分钟，每次持续4分钟，重复4次，得到白色乳剂。乳剂冷却后，加入剩余注射用水，在高压乳匀机循环4次。显微镜下观察，大部分乳滴粒径在1微米以下，收集直径在1～2微米乳剂，加压过滤，滤膜孔径3微米。乳剂分装于10ml安瓿中，充入氮气，封口，在100℃条件下加入热30分钟，冷却，取出。取少量样品检测，冬凌草总萜及冬凌草甲素含量没有变化，乳滴粒径没有明显变化。该乳剂室温保存1年后，取少量样品检测，冬凌草总萜及冬凌草甲素含量没有变化，乳滴粒径没有明显变化。
该乳剂用于静脉注射，治疗效果明显，没有明显刺激，癌症患者容易接受。
实施例9冬凌草总萜乳剂原料成分用量(g)冬凌草总萜5、油脂200、乳化剂100、等渗剂40、注注射用水余量加至1000ml。所述油脂为大豆油、玉米油、山茶油、芝麻油、花生油、橄榄油、棉籽油、菜籽油、蓖麻油或油酸乙脂；所述乳化剂为大豆磷脂、泊洛沙姆或吐温-80；所述等渗剂是甘油或丙二醇。
制备工艺同实施例7。


本发明公开了一种具有抗癌作用的含冬凌草总萜的乳剂，是由以下原料重量百分比组分制备而成的制剂冬凌草总萜0.001～2％、油脂5～40％、乳化剂0.5～20％、等渗剂2.5～10％、注射用水余量加至100％。本发明药物注射后分布较快、药效提高、具有靶向性，油脂还可以提供一定的营养；病人临床疗效在原来的基础上提高了40％，克服了传统静脉给药，病人难以耐受局部刺激而不得不中断治疗的缺点；与传统的片剂和糖浆剂相比，生物利用度提高，使用方便；该乳剂无刺激，口服患者易接受。本乳剂可采用静滴、静注、肌注、口服等多种途径，是具备适应症患者均能安全地进行临床使用的剂型。