冬凌草提取物在制备抗肿瘤药物中的应用的制作方法【技术领域】，具体涉及冬凌草提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。[0002]冬凌草，小灌木，因其植株凝结薄如蝉翼、形态各异的蝶状冰凌片而得名。冬凌草为唇形科香茶菜属植物碎米極Rabdosza rubesce} s (Hemsl.) Hara的干燥地上部分,冬凌草是一种具有综合开发利用价值的植物。冬凌草适应性强，对土壤要求不严，选择在干燥、不易积水的沙性或轻粘质土种植。种植时间在春秋为宜，亩种4000株左右。冬凌草主要管理是中耕除草，防积水。自然分布于太行山南部，特别是湖北(又叫野蕾香花)、四川(又叫破血丹)、贵州(又叫山香草、雪花草和野蕾香)、山西、河南(又叫冰凌草、六月令和山茬)、河北及湖南等地，生于山坡、灌木丛、林地、砾石地及路边等向阳处，海拔100-2800m。冬凌草的药用部位是全株，因此，它的产量较高，一般亩产干草500公斤以上。作药用，在开花前采收，因为此时的冬凌草药理作用最强；作冬凌草保健茶，在整个生长期均可，鲜叶直接泡茶或与菊花、金银花等配合饮用，也可晒干或烘干备用。据《中国药典》(2010版)记载，其饮片性味苦、甘，微寒，具有清热解毒、活血止痛之功效，可用于治疗咽喉肿痛、瘤瘾痞块、蛇虫咬伤。[0003]冬凌草中含有很多重要活性成分，生物利用度高、性质稳定，具有临床使用价值。目前，有研究表明冬凌草中含有的冬凌草甲素具有一定的对肿瘤的抑制作用，中国专利CN103202834，公开了冬凌草甲素在制备抗肿瘤药物中的应用，但是只采用冬凌草甲素单体，没有考虑冬凌草全草成分的用途。[0004]综上所述，冬凌草 在制备抗肿瘤药物中的应用具有很好的前景。
[0005]本发明的目的在于提供一种冬凌草提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。[0006]本发明采用以下技术方案:冬凌草提取物在制备抗肿瘤药物中的应用，所述冬凌草提取物包括冬凌草的水提物和冬凌草的醇提物。[0007]所述冬凌草水提物的制备方法为:取冬凌草原料，去除杂质、干燥后粉碎、用8-10倍重量份的纯净水提取2-3次，合并浸提液，减压浓缩，干燥得冬凌草水提物；
[0008]所述冬凌草醇提物的制备方法为:取冬凌草原料，去除杂质、干燥后粉碎、用8-10倍重量份的60-95% (v/v)乙醇提取2-3次，合并浸提液，减压浓缩回收溶剂，干燥得冬凌草醇提物；
[0009]所述提取，每次l_2h。
[0010]本发明提供了冬凌草提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0011]所述的肿瘤可以是胃癌、食道癌、鼻咽癌、乳腺癌、子宫癌、肺癌、卵巢癌、直肠癌、肾癌、皮肤癌、脑癌、淋巴癌、喉癌或者血癌。
[0012]所述的冬凌草提取物在制备抗肿瘤药物中的应用剂型优选针剂、片剂。[0013]冬凌草中含有萜类(二萜和三萜)、生物碱、甾体、黄酮、挥发油、有机酸等化学成分，通过对冬凌草化学研究表明，冬凌草中含甲素、乙素、丙素、丁素、戊素、辛素以及α-香树脂醇，还有5个未知结构成分。
[0014]本发明 申请人:，通过大量的研究发现，作为混合物的冬凌草水提物或冬凌草醇提物对肿瘤的抑制或治疗效果好于冬凌草单体的效果。这是因为，中药对肿瘤的治疗不像西药，西药是化学药物为主，因此含量越高越好，单体越纯越好，而中药对肿瘤的治疗，是通过中药中的所有成分或大部分成分共同起作用，相辅相成，互相促进。
[0015]本发明的冬凌草提取物对癌细胞有较强的杀伤作用，对人体细胞免疫功能有较强的一定兴奋作用，也快速修复病变局部，还原细胞复活正常免疫活性，冬凌草提取物还可发挥抗菌作用，具有清热解毒，活血止痛，抗癌排脓作用，对抗癌变扩散癌细胞杀伤功能，有缓解症状，稳定缩小病灶体，延长细胞修复生长期作用。

[0016]下面以具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
[0017]实施例1
[0018]冬凌草水提物的制备方法为:取冬凌草原料，去除杂质、干燥后粉碎、用8倍重量份的纯净水提取2次， 每次2h，合并浸提液，减压浓缩，干燥得冬凌草水提物，加入常规用量的硬脂酸镁辅料，按常规工艺制成片剂，规格0.5份/片。
[0019]实施例2
[0020]冬凌草水提物的制备方法为:取冬凌草原料，去除杂质、干燥后粉碎、用10倍重量份的纯净水提取3次，每次lh，合并浸提液，减压浓缩，干燥得冬凌草水提物，按常规工艺制成针剂。
[0021]实施例2
[0022]冬凌草醇提物的制备方法为:取冬凌草原料，去除杂质、干燥后粉碎、用8倍重量份的60% (v/v)乙醇提取3次，每次lh，合并浸提液，减压浓缩回收溶剂，干燥得冬凌草醇提物，加入常规用量的硬脂酸镁辅料，按常规工艺制成片剂，规格0.5份/片。
[0023]实施例4
[0024]冬凌草醇提物的制备方法为:取冬凌草原料，去除杂质、干燥后粉碎、用10倍重量份的95% (v/v)乙醇提取2次，每次2h，合并浸提液，减压浓缩回收溶剂，干燥得冬凌草醇提物，按常规工艺制成针剂。
[0025]实施例5
[0026]冬凌草醇提物的制备方法为:取冬凌草原料，去除杂质、干燥后粉碎、用10倍重量份的75% (v/v)乙醇提取2次，每次2h，合并浸提液，减压浓缩回收溶剂，干燥得冬凌草醇提物，按常规工艺制成针剂。
[0027]实验例:本发明冬凌草提取物对癌细胞的抑制作用
[0028]1、实验材料:本发明实施例2、实施例5制备的药物组合物；
[0029]对比例:冬凌草甲素(98 % )。
[0030]实验地点:广西钦州中医医院。
[0031]2、肿瘤细胞株:人肺源腺癌细胞SPCA-1、人肝癌细胞系IfepG2、人慢性髓系白血病细胞K562、人体肝细胞株BEL-7401和人体食道癌109细胞，用RPM1-1649培养液，37°C,5%C02，相对湿度100%培养，贴壁细胞0.25%胰蛋白酶消化传代。
[0032]3、方法MTT比色法测定提取物对肿瘤细胞生长的抑制作用。取对数生长期细胞，用新鲜的RPM1-1640培养液配制成细胞悬液，悬浮细胞1X105个/ml贴壁细胞0.8X105个/ml。悬浮细胞分别加入不同浓度实验药物后接种于96孔培养板中；贴壁细胞先接种于96孔培养板中，每孔90μ l，24h后分别加入不同浓度实验药物。终体积为每孔100μ I且每组设3个平行孔，共设4组:受试药组T (培养液+细胞悬液+不同浓度受试药)、阴性对照组N (培养液+细胞悬液)、药物颜色对照组TC (培养液+不同浓度受试药)、空白对照组B (培养液+生理盐水)。受试药浓度依次为10 μ份/ml，30 μ份/ml，50 μ份/ml。置37°C，5% C02培养箱中培养72h后，向每孔加入MTT溶液10 μ I震荡混匀后，继续培养4h，加入SDS90 μ I终止培养，37°C过夜，然后室温下在微量振荡器上震荡IOmin,酶标仪测定570nm波长处的吸光度(0D值)，实验重复3次。
[0033]按以下公式计算生长抑制率:
[0034]生长抑制率(％ ) = [ (N组OD均值-B组OD均值)-(T组OD均值-TC组OD均值)]/[N组OD均值-B组OD均值]X100%。
[0035]4、药物对人肺源腺癌细胞SPCA-1、人肝癌细胞系H印G2和人慢性髓系白血病细胞K562的抑制率结果见表1、表2、表3。
[0036]表1:对SPCA-1的抑制率结果
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