专利名称：一株用于发酵小桐子饼粕制作脱毒饲料的杂色曲霉菌的制作方法随着石油资源的日益紧缺，大力发展生物质能源是我国提高能源安全、保障能源供应的必然战略选择。小桐子(/airoMa curcas L.又名膏桐，麻疯树等)属于大戟科麻疯树属，被认为是发展生物柴油的合适树种，但其工业发展还处于早期阶段，存在成本较高、 副产物无法充分利用等问题。随着经济的高速发展，中国已成为世界上最大的养殖业国家。蛋白质原料是饲料工业发展的基础，蛋白质原料的紧缺和价格高涨已经成为并将长期成为我国发展畜牧业和水产业的瓶颈之一。小桐子饼粕脱掉油脂后，蛋白质含量高达50%以上，有时达68%，而且90%以上都是真蛋白，除赖氨酸外，其它基本氨基酸的含量都高于世界粮农组织(FAO)为5岁儿童制定的饮食干物质含量标准。小桐子饼粕的营养价值高于饲料中常用的豆粕、菜籽粕等35-50%的蛋白含量。小桐子饼粗纤维的含量在3%左右，低于粗饲料指标的18%。小桐子油粕体外消化率在78. 6-80. 6%，热处理后达86%。可见，小桐子饼粕是一种很有潜力的蛋白饲料资源。 但是，小桐子饼中含有较多的毒性物质，不能直接作为饲料使用。在饲料中添加16%的小桐子饼会对小鼠产生明显的毒副作用。即使是所谓无毒的小桐子品种，也有一定的毒性，只是毒性稍低而已。目前，尚无很好的脱除小桐子饼粕毒性的方法。如果将小桐子饼粕脱毒后作为蛋白饲料，不仅可以缓解我国饲料蛋白资源紧张的局面，还可以大幅度降低小桐子生物柴油成本，有利于小桐子生物柴油的产业化。开发能有效脱除小桐子饼毒性成分的技术具有重要的经济价值。已报道的小桐子饼粕脱毒方法有化学方法，如碱处理法，即在饼粕中加入NaOH 、&(0!1)2或NaOCl ；物理方法，如热处理法、射线照射和有机溶剂洗脱法。但热处理法不能脱除毒性，甚至还会增加毒性。碱处理法效果有限，而且碱处理后会产生强烈的气味，破坏营养成分，动物拒食，并造成环境污染。溶剂提取法成本昂贵，也会残留强烈的气味，影响动物的适口性并污染环境。放射线照射效果很差。在小桐子饼开发成饲料方面，袁晓等人申请了《一种用小桐子粕的鱼饲料及制备方法(200710053524. 7)》，发明公开了一种小桐子饼脱毒的方法，用7倍甲醇洗涤小桐子饼粕。刘强等人申请了《一种小桐子及其饼粕脱毒的方法(201110003750.0)》，其脱毒方法是先用正已烷浸提油脂，然后后用乙醇提取毒性成分，醇提粕用蒸汽炒脱溶，得到脱毒小桐子粕。王大军等人也申请了《一种麻疯树籽油粕萃取脱除佛波酯的方法(200810201109. 6)》， 也是用甲醇萃取脱除佛波酯。张晖等人申请了《一种麻疯树籽粕脱毒及浓缩蛋白制备的方法(201010520744. 8)》，用乙醇洗脱去掉小桐子饼中的毒性成分。刘强等人申请了《一种脱油后麻疯树种仁的脱毒方法(201110020815. 2)》也是用乙醇提取的方法脱除饼中的毒性成分。刁其玉等人申请了《麻疯树脱毒饼粕在育肥牛精饲料中的应用 3(200910250517. 5)》，没有涉及到具体的脱毒方法。上述这些专利都是采用甲醇或乙醇作溶剂浸提的方法，洗脱去掉小桐子饼中的有毒物质。该方法存在生产成本高、毒蛋白的毒性没有去除的问题。微生物会产生种类丰富的酶，可对复杂化合物进行降解，已被成功用于脱除多种饼粕的毒性，发酵法是各种饼粕类饲料脱毒常用的方法之一，如菜籽饼、棉子饼脱毒制作饲料。由于小桐子饼中含有一定的抗菌物质，加上其蛋白质含量高，很多微生物不能在小桐子饼上快速生长，不能降解小桐子饼中的毒性成分。王兴红申请了专利《一株用于脱除小桐子饼粕毒性的粪生链霉菌》(201110254056. 6)，该株菌株虽然有较好的脱毒效果，但不能在饼粕中加入其它有机质，如麦麸等，否则反而会增加小桐子饼的毒性，原因尚不清楚。另一方面，其脱毒效果还不够稳定。关于杂色曲霉菌A003菌株，王兴红申请了《一株用于发酵小桐子饼粕制作生物菌肥的杂色曲霉菌》(201110254026. 5)，该菌株能发酵小桐子饼粕，发酵后的小桐子饼具有很好的肥料效应。经反复实验发现，使用此菌株脱毒的小桐子饼粕也可以用作饲料，故申请此项专利。尚未见到将杂色曲霉菌用于生产小桐子饼脱毒饲料的报道。
本发明的目的是提供一株具有快速发酵小桐子饼并能有效脱除小桐子饼粕中毒性成分的杂色曲霉原变种A003菌株Us/^r^/B^s versicolor A003)。将该微生物菌株接种于以小桐子饼为主要成分配制的培养基上，经培养后能够脱除小桐子饼粕中的毒性成分。经多种活体动物实验，发酵后饼粕的毒性成分已被脱除干净，可以用作动物饲料。本发明所述的曲霉菌命名为杂色曲霉原变种Asper识7ΛΛ5 versicolor A003，保藏编号为 CCTCC NO :M 2011249。本发明所述的杂色曲霉菌系从我国云南楚雄的小桐子根部分离得到。现保藏在国家知识产权局指定的保藏单位保藏(保藏单位名称中国典型培养物保藏中心，保藏日期为 2011年7月11日，保藏编号为CCTCC NO =M 2011249。保藏单位地址武汉珞珈山，武汉大学内，邮政编码430072)。本发明所述的杂色曲霉菌在大多数培养基上都生长良好。由于小桐子饼含有抗菌物质，很多微生物并不能在由小桐子饼配制的培养基上良好生长。有一些微生物虽然能在小桐子饼上快速生长，但不能脱除小桐子饼中的毒性成分。杂色曲霉原变种A003菌株则可以在小桐子饼中加入或不加入其它能够疏松小桐子饼、增加通气或调整营养成分配比的物质时，都可以有效脱除小桐子饼中的毒性，脱毒后的小桐子饼可以用作饲料。本菌株发酵小桐子饼制作脱毒饲料的工艺流程小桐子饼粕一配入其它辅料一加入水一灭菌一接种一培养一干燥一成品本发明所述的小桐子饼脱毒饲料制作方法由以下步骤组成一、小桐子饼配合淀粉类物质或其它常用的微生物液体培养基培养杂色曲霉菌A003 作为种子。二、将小桐子饼和水按1 :1 1. 2的比例配制成固体培养基或者小桐子饼和水按 1 :7 15的比例配制液体培养基。在配制液体培养基时，可以在小桐子饼中配入5%-50%的糖类物质，增强菌株的脱毒能力。三、将培养好的菌种按1%_15%的比例接入灭菌后的小桐子饼固体培养基上或液体培养基中，混勻。三、在10-30°C条件下培养2-4天。四、收获培养物，经干燥后即可用作动物饲料。本发明所述的小桐子饼，包括由压榨法获得的压榨饼，也包括用溶剂浸出法获得的小桐子粕。本发明要解决的技术问题是利用杂色曲霉菌A003菌株降解小桐子饼中毒性成分的能力去除小桐子饼中的毒性成分，解决限制小桐子饼作为饲料的问题。该技术由以下的特征组成配制以小桐子饼为主要成分的固体或液体培养基；将培养基灭菌，接种杂色曲霉菌A003菌株，发酵培养；将培养好的培养物干燥后即可用作动物饲料。有益效果是杂色曲霉能在小桐子饼上快速生长，有利于大规模生产；能专一性降解小桐子饼中的毒性成分，脱毒后的小桐子饼可以用作动物的蛋白饲料。
图1菌株A003在查氏培养基上的菌落形态图2菌株A003的孢子头及分生孢子
图3杂色曲霉A003和在Genbank数据库中部分相关菌的系统发育树。菌株特征菌落在查氏琼脂上生长局限，25°C 7天直径16讓，10-12天为24-30111111， 质地为丝绒状。菌落不平，稍厚，中央部分隆起，呈不同程度的翘起。颜色初为白色，后呈淡黄色，再后呈暗橄榄色。有辐射状沟纹，渗出液无。背面为淡黄褐色。分生孢子头呈辐射形，直径25-125Mm，分子孢子梗光滑，无色。产孢子结构双层，梗基5_8MmX 2_3Mm，瓶梗 6-8MmX 1. 5-2. 5Mm ；顶囊半球形，直径9_20Mm，约3/4的表面可育。分子孢子球形，直径 2. 0-3. OMm，具小刺。培养条件查氏培养基28 °C。斜面培养条件查氏培养基28 °C。种子培养条件PDA液体培养基28°C。
具体实施例1、按小桐子饼水按1 :1的比例配制培养基，按常规方法灭菌60分钟后，冷却，接种杂色曲霉原变种A003 (Aspergillus versicolor A003)菌株，培养2天后，杂色曲霉菌长满培养基，将生长好的小桐子饼经干燥后即可得到脱毒的小桐子饼脱毒饲料。2、按小桐子饼水1 :10的比例配制液体培养基，在500ml三角瓶中装入小桐子饼液体培养基IOOml，1个大气压灭菌30分钟后，冷却，接种杂色曲霉菌A003，28°C 200rpm培养一周，干燥、脱水即得脱毒小桐子饼。


一株用于发酵小桐子饼粕制作脱毒饲料的杂色曲霉菌，涉及饲料领域。本发明中所述的曲霉菌命名为杂色曲霉原变种A003(Aspergillus versicolor A003)，该菌株已在国家知识产权局专利局指定的保藏单位保藏，保藏日期为2011年7月11日，保藏单位名称中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NOM2011249。将本发明接种于以小桐子饼粕为主要成分配制的培养基上时，能够快速发酵并脱除小桐子饼粕中的毒性成分，脱除毒性后的小桐子饼粕可以用作蛋白饲料，用于饲喂动物。