专利名称：用mek抑制剂治疗慢性疼痛的方法 本发明涉及用MEK抑制剂治疗慢性疼痛的方法。慢性疼痛包括神经性疼痛和慢性炎性疼痛。在神经路径中无论何处的异常都会使神经信号中断，从而使脑中断信号异常中断，引起神经性疼痛。神经性疼痛可以是例如深度疼痛、灼烧感或对触觉过敏。与神经性疼痛有关的疾病或病症包括、但不限于糖尿病性神经病、灼痛、帕尼扎氏丛撕脱(plexus avulsion)、神经瘤、结节性脉管炎、挤压损伤、病毒感染(例如疱疹病毒感染或HIV)、缩窄性损伤、组织损伤、由外周至中枢神经系统的神经损伤、截肢、甲状腺机能减退、尿毒症、慢性酒精中毒、手术后疼痛、关节炎、背痛和维生素缺乏。感染例如带状疱疹(shingles)可引起神经发炎，并产生带状疱疹后神经痛，这是一种在病毒感染部位的慢性灼烧。痛觉过敏是现存的有害刺激变得更加疼痛，而异常性疼痛是先前的无害性刺激变得疼痛(例如接触衣服或煤粉)。交感反射性萎缩伴有肿胀和出汗或者局部血流变化、组织萎缩或骨质疏松。在损伤或者主要神经例如坐骨神经疾病之后出现灼痛，包括严重灼烧疼痛和肿胀、出汗和血流变化。某些类型的下腰痛可能具有神经病的成分(例如坐骨神经痛、后脊髓灰质炎(postpoliomyelitis)和CPRM)。神经性疼痛还可以由癌或化疗引起。神经性疼痛目前是用抗惊厥药例如卡马西平和抗抑郁药例如阿米替林(amitryptaline)治疗。NSAIDS和阿片样物质通常作用很小(Fields等，1994 Textbook of Pain p 991-996(pubChurchill Livingstone)，James&Page 1994 J.Am.Pediatr.Med.Assoc，8439-447，Galer，1995Neurology 45 S17-S25。已经使用加巴喷丁治疗的神经病症状包括疱疹感染后神经痛、后脊髓灰质炎、CPRM、与HIV有关的神经病、三叉神经痛和交感反射性萎缩(RSD)。通常抗炎剂的弱功效表明慢性疼痛的基质与痛觉过敏不同。发明概述本发明涉及慢性疼痛的治疗方法，该方法包括给需要该治疗的患者施用包括MEK抑制剂的组合物。慢性疼痛包括神经性疼痛、特发性疼痛和与维生素缺乏、尿毒症、甲状腺机能减退术后疼痛、关节炎、背痛和慢性酒精中毒有关的疼痛。本发明还涉及所公开的组合物，该组合物用于治疗慢性疼痛。该组合物可以包括一种或多种MEK抑制剂化合物，所述化合物具有1999年1月13日提交的美国专利申请USSN 60/115,873、1999年12月21日提交的国际申请PCT/US99/30483所公开的结构。MEK抑制剂的实例包括下列式(I)化合物 在式(I)中，W是OR1、NR2OR1、NRARB、NR2NRARB、O(CH2)2-4NRARB、或者NR2(CH2)2-4NRARB。R1是H、C1-8烷基、C3-8链烯基、C3-8链炔基、C3-8环烷基、苯基、(苯基)C1-4烷基、(苯基)C3-4链烯基、(苯基)C3-4链炔基、(C3-8环烷基)C1-4烷基、(C3-8环烷基)C3-4链烯基、(C3-8环烷基)C3-4链炔基、C3-8杂环基、(C3-8杂环基)C1-4烷基、(C3-8杂环基)C3-4链烯基、(C3-8杂环基)C3-4链炔基、或(CH2)2-4NRCRD。R2是H、C1-4烷基、苯基、C3-6环烷基、C3-6杂环基或(C3-6环烷基)甲基。RA是H、C1-6烷基、C3-8链烯基、C3-8链炔基、C3-8环烷基、苯基、(C3-8环烷基)C1-4烷基、(C3-8环烷基)C3-4链烯基、(C3-8环烷基)C3-4链炔基、C3-8杂环基、(C3-8杂环基)C1-4烷基、(氨基磺酰基)苯基、[(氨基磺酰基)苯基]C1-4烷基、(氨基磺酰基)C1-6烷基、(氨基磺酰基)C3-6环烷基、[(氨基磺酰基)C3-6环烷基]C1-4烷基或(CH2)2-4NRCRD。RB是H、C1-8烷基、C3-8烯基、C3-8链炔基、C3-8环烷基或苯基。Q是下式(i)-(iii)之一 R3是H或F；R4是卤素、NO2、SO2NRO(CH2)2-4NRERF、SO2NRERF或(CO)T。T是C1-8烷基、C3-8环烷基、(NRERF)C1-4烷基、ORF、-NRO(CH2)2-4NRERF或NRERF；Z是下式(iv)-(viii)之一 R5和R6中的一个是H或甲基，并且R5和R6中的另一个是H、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6链炔基、苯基、苄基或-M-E-G。M是O、CO、SO2、NRJ、(CO)NRH、NRH(CO)、NRH(SO2)、(SO2)NRH或CH2。E是(CH2)1-4或(CH2)mO(CH2)p，其中1≤(每个m和p)≤ 3并且2≤(m+p)≤4；或者E不存在。G是RK、OR1或NRJRJRK，条件是如果p＝1，则G是H。R7是H、C1-4烷基、C2-4链烯基、C2-4链炔基、C3-6环烷基、苯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、(CH2)1-2Ar，其中Ar是苯基、2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基、SO2NRH(CH2)2-4NRJRK、(CO)(CH2)2-4NRJRK或(CO)NRH(CH2)2-4NRJRK。X1是O、S、NR8或CHR9；X2是O、S或CHR9；并且X3是O或S。在一个具体实施方案中，如果X1或X2是CHR9，则所公开的化合物还可以是互变异构的吲哚。R8是H、C1-4烷基、苯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、(CH2)1-2Ar，其中Ar是苯基、2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基、C2-4链烯基、C2-4链炔基、C3-6环烷基或(C2-4烷基)NRLRM，条件是R7和R8一起不超过14个碳原子，除了RL、RM、RJ和RK之外。RG是C1-4烷基、苯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、C3-4链烯基、C3-4链炔基、C3-6环烷基、(CO)ORP、(C2-4烷基)NRLRM、(CO)NRN(CH2)2-4NRLRM、(CO)NRLRM、(CO)(CH2)2-4-NRLRM或(CH2)1-2Ar，其中Ar是苯基、2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基。R9是C1-4烷基、苯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、C2-4链烯基、C2-4链炔基、C3-6环烷基、(CO)ORP、(C2-4烷基)NRLRM、(CO)NRN(CH2)2-4NRLRM、(CO)NRLRM、(CO)(CH2)2-4-NRLRM、或(CH2)1-2Ar’，其中Ar’是苯基、2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基。Rp是H、C1-6烷基、苯基、C3-4链烯基、C3-4链炔基、C3-6环烷基或(CH2)2-4NRLRM；R10是H、甲基、卤素或NO2；R11是H、甲基、卤素或NO2。RC、RD、RE、RF、RI、RJ、RK、RL和RM中的每一个独立地选自H、C1-4烷基、C3-4链烯基、C3-4链炔基、C3-6环烷基和苯基；NRCRD、NRERF、NRJRK和NRLRM中的每一个独立地为吗啉基、哌嗪基、吡咯烷基或哌啶基。RH、RN和RO中的每一个独立地是H、甲基或乙基。最后，上述每个烃基或杂环基任选地被1-3个独立地选自下列的取代基取代卤素、C1-4烷基、C3-6环烷基、C2-4链烯基、C2- 4链炔基、苯基、羟基、氨基、(氨基)磺酰基和NO2，其中每个取代基烷基、环烷基、链烯基、链炔基或苯基依次任选地被1-3个独立地选自下列的取代基取代卤素、C1-2烷基、羟基、氨基和NO2。除了上述化合物，本发明还提供了它们的可药用盐或C1-7酯。优选的本发明具体实施方案包括一种或多种下列化合物的使用方法(a)所述MEKK抑制剂具有选自下列的结构7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-1H-苯并咪唑-5-甲酸环丙基甲氧基-酰胺；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-6，7-二氢-1H-苯并咪唑-5-甲酸(盐酸盐)；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-1H-苯并咪唑-5-甲酸；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-3H-苯并咪唑-5-甲酸(2-羟基-乙氧基)-酰胺；6-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-7-氟-1H-苯并咪唑-5-甲酸；和7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-1H-苯并咪唑-5-甲酸五氟苯基酯；和(b)所述MEK抑制剂具有选自下列的结构7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-1H-苯并咪唑-5-甲酸环丙基甲氧基-酰胺；和7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-3H-苯并咪唑-5-甲酸(2-羟基-乙氧基)-酰胺。本发明还涉及药物组合物，其中含有(a)苯并杂环(例如式I的杂环)和(b)可药用载体。
附图的简要说明

图1是表示以克计的爪退缩阈(PWT)作为以天计的时间函数的棒形图。中空的、左斜线和右斜线棒分别是赋形剂、PD 198306和pregabalin。箭头表示给药时间(30mg/kg，口服)。
图2是表示使用von Frey发丝进行的以克计的引起爪退缩所需的力作为以天计的时间函数的棒形图。在治疗前测量基线(BL)。给动物单次口服PD 198306(3-30mg/kg)或pregabalin(30mg/kg)，并在治疗后1小时再测定退缩阈。每天重复治疗两次，共进行两天。结果以平均值±第1和第3次的四分值表示。*p＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.001显著不同于赋形剂治疗的动物(Mann-Whitney t试验；n＝7-8)。
图3是表示使用von Frey发丝进行的以克计的引起爪退缩所需的力作为以天计的时间函数的棒形图。在治疗前测量基线(BL)。给动物单次口服PD 198306(3-30mg/kg)或pregabalin(30mg/kg)，并在治疗后1小时再测定退缩阈。每天重复治疗两次，共进行两天。结果以平均值±第1和第3次的四分值表示。*P＜0.01显著不同于赋形剂治疗的动物(Mann-Whitney t试验；n＝6)。
图4是表示使用von Frey发丝进行的以克计的引起爪退缩所需的力作为以天计的时间函数的棒形图。在治疗前测量基线(BL)。给动物单次鞘内(i.t.)施用PD 198306(1-30μg/10μl)或 pregabalin(100μg/10μl)，并在治疗后30分钟、1小时和2小时再测定退缩阈。结果以平均值±第1和第3次的四分值表示。*P＜0.05、***P＜0.001显著不同于赋形剂治疗的动物(Mann-Whitney t试验；n＝7-9)。
图5是表示使用von Frey发丝进行的以克计的引起爪退缩所需的力作为以天计的时间函数的棒形图。在治疗前测量基线(BL)。给动物单次鞘内(i.t.)施用PD 198306(1-30μg/10μl)或pregabalin(100μg/10μl)，并在治疗后30分钟、1小时和2小时再测定退缩阈。结果以平均值±第1和第3次的四分值表示。*P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.001显著不同于赋形剂治疗的动物(Mann-Whitney t试验；n＝6-8)。
图6是表示使用von Frey发丝进行的以克计的引起爪退缩所需的力作为以天计的时间函数的棒形图。给动物单次足底内(i.pl.)施用PD198306(3mg/100μl)或鞘内注射PD 198306(30μg/10μl)，并在治疗后1小时再测定退缩阈。结果以平均值±第1和第3次的四分值表示。**P＜0.01显著不同于赋形剂治疗的动物(Mann-Whitney t试验；n＝6-9)。
图7是表示使用von Frey发丝进行的以克计的引起爪退缩所需的力作为以天计的时间函数的棒形图。给动物单次足底内(i.pl.)施用PD198306(3mg/100μl)或鞘内注射PD 198306(30μg/10μl)，并在治疗后1小时再测定退缩阈。结果以平均值±第1和第3次的四分值表示。**＜0.01显著不同于赋形剂治疗的动物(Mann-Whitney t试验；n＝6)。
图8是表示使用von Frey发丝进行的以克计的引起爪退缩所需的力的棒形图。在治疗前测量基线(BL)。给动物单次鞘内(i.t.)施用PD219622、PD 297447、PD 184352或PD 254552(30μg/10μl)或pregabalin(100μg/10μl)，并在治疗后30分钟、1小时和2小时再测定退缩阈。结果以平均值±第1和第3次的四分值表示。*P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.001显著不同于赋形剂治疗的动物(Mann-Whitney t试验；n＝7-8)。
发明详述本文公开的化合物是药物活性的，例如，它们抑制MEK。MEK酶双重特异性激酶，涉及例如免疫调节、炎性和增殖疾病例如癌和再狭窄。
增殖疾病是由细胞内信号系统缺陷、或某些蛋白的信号传导机理引起的。缺陷包括信号级联中的一种或多种信号蛋白的固有活性或细胞浓度的改变。细胞可以产生与其自身受体结合的生长因子，产生自分泌环，生长因子连续刺激增殖。细胞内信号蛋白的突变或过分表达会导致细胞中假的致有丝分裂信号。某些最常见的突变发生在编码已知称为Ras的蛋白的基因中，Ras蛋白是一种G-蛋白，当其与GTP结合时被活化，而当其与GDP结合时则灭活。当上述生长因子受体以及许多其他致有丝分裂受体被活化时，导致Ras由GDP-结合状态转化为GTP结合状态。该信号对于大多数细胞类型增殖是绝对必要的。在该信号系统中，特别是在Ras-GTP复合物灭活中的缺陷在癌中是常见的，并且导致信号级联低于被慢慢活化的Ras。
活化的Ras依次导致丝氨酸/苏氨酸激酶级联活化。已知需要活化Ras-GTP以使其自身活化的一组激酶是Raf族。它们依次活化MEK(例如MEK1和MEK2)，然后活化MAP激酶、ERK(ERK1和ERK2)。促细胞分裂剂引起的MAP激酶的活化看来是增殖必需的；该激酶的基本活化足以引起细胞转化。下游Ras信号的阻滞，例如使用显性负性Raf-1蛋白可以完全抑制致有丝分裂作用，不论是由细胞表面受体引起的、还是由生瘤Ras突变体引起的。尽管Ras本身不是蛋白激酶，但是它参与Raf和其它激酶的活化，多数可能是通过磷酸化作用机理。对于ME-1来说，一旦被活化，Raf和其它激酶在两个紧邻的丝氨酸残基S218和S222上使MEK磷酸化，这是MEK作为激酶活化的先决条件。MEK依次在由单氨基酸分隔的酪氨酸y185和苏氨酸残基T183上使MAP激酶磷酸化。
该双磷酸化作用使MAP激酶活化至少100倍。然后，活化的MAP激酶可以催化大量蛋白、包括几种转录因子和其它激酶的磷酸化作用。对于靶蛋白，例如激酶、转录因子或另外的细胞蛋白，许多这些MAP激酶的磷酸化作用是致有丝分裂激活。除了Raf-1和MEKK之外，其它激酶活化MEK，并且MEK自身看来是信号整合激酶。当前的理解是MEK对MAP激酶的磷酸化高度专一。事实上，迄今为止，已经证明只有MAP激酶，ERK是MEK的底物，并且MEK不是基于MAP激酶的磷酸化顺序使肽磷酸化，或者，它甚至会使变性的MAP激酶磷酸化。MEK在MAP激酶磷酸化之前就与MAP激酶有密切的关系，这表明MAP激酶通过MEK的磷酸化可能需要这两种蛋白之间有强的优先相互作用。该需求和MEK不寻常的特异性均提示其作用机理与其它蛋白激酶具有足够的区别，可以发现，MEK选择性抑制剂可能通过变构机理、而非通过通常的封锁ATP结合位点起作用。
在两种神经性疼痛动物模型中，通过用von Frey毛发评价静止异常性疼痛，对MEK抑制剂PD 198306的作用进行研究。
口服PD 198306(3-30mg/kg)在坐骨神经慢性缩窄性损伤(CCI)模型中没有影响。但是在重复给药(2天内给药3次)后，它在糖尿病性神经病模型(链佐星)中具有短暂的作用。这可能是由于在这些动物中因糖尿病引起的血脑屏障紊乱，从而使化合物产生中枢作用。在神经性疼痛的链佐星和CCI模型中，鞘内施用PD 198306(1-30μg)均以剂量依赖的方式阻滞静止异常性疼痛，最低有效剂量(MED)分别为3和10g。最高使用剂量(30μg)完全阻滞持续的静止异常性疼痛长达1小时。以高出有效鞘内剂量(30μg/10μl)100倍的剂量足底内施用PD 198306(3mg/100μl)对任何一种神经性疼痛模型的静止异常性疼痛均没有作用。这一发现证实了在系统给药后缺乏可见的效果，并且提示了该化合物的中枢作用位点。
通过该研究，我们可以提出MEK抑制剂作为慢性疼痛潜在的新治疗工具的应用。对未来脑渗透剂MEK抑制剂可能的副作用、特别是与记忆有关的副作用进行的研究指示了该类新化合物在治疗疼痛中的治疗窗口。A.术语下面对某些术语进行了定义，并且它们将用于全文中。
烷基包括具有自由价的脂族基团(即烃基或含有氢和碳原子的烃基结构)。烷基可以理解为包括直链和支链结构。其实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、2，3-二甲基丙基、己基、2，3-二甲基己基、1，1-二甲基戊基、庚基和辛基。环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。
烷基可以被1、2、3或多个独立地选自下列基团的取代基取代卤素(氟、氯、溴或碘)、羟基、氨基、烷氧基、烷氨基、二烷氨基、环烷基、芳基、芳氧基、芳烷氧基、杂环基和(杂环基)氧基。具体的实例包括氟甲基、羟乙基、2，3-二羟基乙基、(2-或3-呋喃基)甲基、环丙基甲基、苄氧基乙基、(3-吡啶基)甲基、(2-或3-呋喃基)甲基、(2-噻吩基)乙基、羟丙基、氨基环己基、2-二甲基氨基丁基、甲氧基甲基、N-吡啶基乙基、二乙基氨基乙基和环丁基甲基。
链烯基与烷基类似，不同的是具有至少一个双键(两个相邻的sp2碳原子)。根据双键的位置和取代基，如果可能的话，双键的几何构型可以是E或Z、顺式或反式。类似地，链炔基具有至少一个三键(两个相邻的sp碳原子)。不饱和链烯基或链炔基可以分别具有一个或多个双键或三键或其混合物；与烷基一样，不饱和基团可以是直链或支链的，并且它们可以如上对烷基所述以及如在全文中举例的那些被取代。链烯基、链炔基和其取代形式的实例包括顺-2-丁烯基、反-2-丁烯基、3-丁炔基、3-苯基-2-丙炔基、3-(2’-氟苯基)-2-丙炔基、3-甲基-(5-苯基)-4-戊炔基、2-羟基-2-丙炔基、2-甲基-2-丙炔基、2-丙烯基、4-羟基-3-丁炔基、3-(3-氟苯基)-2-丙炔基和2-甲基-2-丙烯基。在式(I)中，链烯基和链炔基可以是例如C2-4或C2-8，优选C3-4或C3-8。
取代烃基更通常的形式包括羟基烷基、羟基链烯基、羟基链炔基、羟基环烷基、羟基芳基和带有氨基-、卤代-(例如氟-、氯-或溴-)、硝基-、烷基-、苯基-和环烷基-等前缀的相应基团，或者取代基的结合形式。因此，根据式(I)，取代的烷基包括羟基烷基、氨基烷基、硝基烷基、卤代烷基、烷基烷基(支链烷基、例如甲基戊基)、(环烷基)烷基、苯基烷基、烷氧基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、芳基烷基、芳氧烷基、芳烷氧基烷基、(杂环基)烷基和(杂环基)氧烷基。因此R1包括羟基烷基、羟基链烯基、羟基链炔基、羟基环烷基、羟基芳基、氨基烷基、氨基链烯基、氨基链炔基、氨基环烷基、氨基芳基、烷基链烯基、(烷基芳基)烷基、(卤代芳基)烷基和(羟基芳基)链炔基等。类似地，RA包括羟基烷基和氨基芳基，并且RB包括羟基烷基、氨基烷基和羟基烷基(杂环基)烷基。
杂环基包括、但不限于杂芳基，包括呋喃基、噁唑基、异噁唑基、噻吩基、噻唑基、吡咯基、咪唑基、1，3，4-三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吲哚基及其非芳族相应物。杂环基的其他实例包括哌啶基、喹啉基、异噻唑基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、四氢呋喃基、四氢吡咯基、吡咯烷基、八氢吲哚基、八氢苯并硫代呋喃基和八氢苯并呋喃基。
选择性MEK 1或MEK 2抑制剂是分别抑制MEK 1或MEK 2酶、而基本上不抑制其他酶例如MKK3、PKC、Cdk2A、磷酸化酶激酶、EGF和PDGF受体激酶和C-src的化合物。通常，选择性MEK 1或MEK 2抑制剂对MEK 1或MEK 2的IC50值是对上述一种其他酶的IC50值的至少1/50。优选的是，选择性抑制剂的IC50值是一种或多种上述酶的IC50值的至少1/100，更优选1/500，甚至更优选1/1000、1/5000，或者小于一种或多种上述酶的IC50值。B.化合物本发明一方面提供了概述一节中式(I)化合物的用途。本发明的
包括式(I)化合物，其中(a)Q是式(i)；(b)R3是H或氟(c)R4是氟、氯或溴；(d)R10是H、甲基、氟或氯；(e)R11是甲基、氯、氟、硝基或氢；(f)R11是H；(g)R11是氟；(h)R10和R11中的每一个是氟；(i)R1是H、甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基、苄基、苯乙基、烯丙基、C3-5链烯基、C3-6环烷基、(C3-5环烷基)C1-2烷基、(C3-5杂环基)C1-2烷基或(CH2)2-4NRCRD；(j)R1是H或(C3-4环烷基)C1-2烷基；(k)R2是H或甲基；(1)RA具有至少一个羟基取代基；(m)RA是H、甲基、乙基、异丁基、羟基乙基、苯基、2-哌啶-1-基-乙基、2，3-二羟基-丙基、3-[4-(2-羟基乙基)-哌嗪-1-基]-丙基、2-吡咯烷-1-基-乙基或2-二乙基氨基-乙基；并且RR是H；或者其中RB是甲基并且RA是苯基；(n)W是NRARB或NR2NRARB；(o)W是NR2(CH2)2-4NRARB或O(CH2)2-3NRARB；(P)W是NR2OR1；(q)W是OR1；(r)Z是式(v)；或者(s)X1是NR8，并且R7是H；或者(t)其结合。在式(I)中，Z的值从左向右表示，或者围绕Q的苯基环逆时针方向计算。
按照本发明的一个方面，式(I)化合物具有以下结构，其中Q是式(i)或(ii)；R3是H或氟；R4是氟、氯或溴；R10是H、甲基或氯；R11是氯、氟或氢；R1是H、甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基、苄基、苯乙基、烯丙基、C3-5链烯基、C3-6环烷基、(C3-5环烷基)C1-2烷基、(C3-5杂环基)C1-2烷基或(CH2)2-4NRCRD；R1是H或(C3-4环烷基)C1-2烷基；R2是H或甲基；并且Z是式(v)或(vi)。该方面的一个具体实施方案是，X1是NR8。一个实例是7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-1-[(2＇-吗啉基)-乙基]2-(苯基)-苯并咪唑-5-甲酸环丙基甲氧基-酰胺。
本发明的一个具体实施方案还包括其中R10是H；R10是甲基或氯；并且其中R10是氯的化合物。在某些具体实施方案中，R7和R8一起不超过14个碳原子，-+除了RL、RM、RJ和RK之外。其实例包括其中R7和R8一起具有不超过13个碳原子；不超过7、8或10个碳原子；4-8个碳原子；1-10个碳原子；1-8个碳原子和不超过6个碳原子的化合物。
优选的是，其中R1、R2、RA、RB、RC、RD、RE、RF、RI、XJ、RK、RL、RM、RG、RH、RN、RO和RP中的一个是链烯基或链炔基，其双键或三键各自不与连接点相邻。例如，其中W是NR2OR1，R2优选为丙-2-炔基或丁-2或3-烯基，并且不优选丙-1-炔基或丁-1-烯基。
下面列出了某些可以利用反应方案1、2、10和11合成的优选的结构。游离酸、游离异羟肟酸和异羟肟酸环丙基甲酯分为同一组。例如，化合物1、11和21仅仅是″W″不同(如权利要求书中所定义)；化合物2、12和22是类似相关的。优选的化合物还包括所列化合物的2-氯(代替2-甲基)类似物。
化合物的实例包括7-氟-6-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-1H-苯并咪唑-5-甲酸(APK IC50＝47±17nM)；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并噁唑-5-甲酸；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并噻唑-5-甲酸；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并[1，2，5]噻二唑-5-甲酸；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并[1，2，5]噁二唑-5-甲酸；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-2-(2-羟基乙基)-1H-苯并咪唑-5-甲酸；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-2-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-甲酸；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-1-乙酰基-苯并咪唑-5-甲酸；8-氟-7-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-喹喔啉-6-甲酸；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-1H-苯并三唑-5-甲酸；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-1H-苯并咪唑-5-甲酸羟基酰胺；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并噁唑-5-甲酸羟基酰胺；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并噻唑-5-甲酸羟基酰胺；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并[1，2，5]噻二唑-5-甲酸羟基酰胺；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)苯并[1，2，5]噁二唑-5-甲酸羟基酰胺；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-2-(2-羟基乙基)-1H-苯并咪唑-5-甲酸羟基酰胺；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-2-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-甲酸羟基酰胺；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-1-乙酰基-苯并咪唑-5-甲酸羟基酰胺；8-氟-7-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-喹喔啉-6-甲酸羟基酰胺；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-1H-苯并三唑-5-甲酸羟基酰胺；7-氟-6-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-1H-苯并咪唑-5-甲酸环丙基甲氧基酰胺；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并噁唑-5-甲酸环丙基甲氧基-酰胺；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并噻唑-5-甲酸环丙基甲氧基-酰胺；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并[1，2，5]噻二唑-5-甲酸环丙基甲氧基-酰胺；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并[1，2，5]噁二唑-5-甲酸环丙基甲氧基-酰胺；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-2-(2-羟基乙基)-1H-苯并咪唑-5-甲酸环丙基甲氧基-酰胺；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-2-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-甲酸环丙基甲氧基-酰胺；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-1-乙酰基-苯并咪唑-5-甲酸环丙基甲氧基酰胺；8-氟-7-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-喹喔啉-6-甲酸环丙基甲氧基-酰胺；和7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-1H-苯并三唑-5-甲酸环丙基甲氧基-酰胺。
下面列出了代表反应方案3-9的实施例。如上所述，游离酸、游离异羟肟酸和异羟肟酸环丙基甲酯分为同一组。例如，化合物31、45和59仅仅是″W″不同(如权利要求书中所定义)；化合物32、46和60是类似相关的。优选的化合物还包括所列化合物的2-氯(代替2-甲基)类似物。
反应方案3-9化合物的实例包括4-氟-5-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并噻唑-6-甲酸；4-氟-5-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并噁唑-6-甲酸；5-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-6，7-二氟-3H-苯并咪唑-4-甲酸；6，7-二氟-2-(2-羟基-乙基)-5-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-3H-苯并咪唑-4-甲酸；6，7-二氟-5-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并噁唑-4-甲酸；6，7-二氟-5-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并噻唑-4-甲酸；7，8-二氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-喹喔啉-5-甲酸；6-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-8-硝基-喹喔啉-5-甲酸；5-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-8-硝基-喹喔啉-6-甲酸；8-氯-5-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-喹喔啉-6-甲酸；3-环丙基-7-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-3H-苯并咪唑-4，6-二甲酸4-二甲基酰胺；7-溴-4-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并噁唑-5-甲酸；7-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-4-氟-苯并噻唑-6-甲酸；7-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-4-硝基-苯并噁唑-6-甲酸；4-氟-5-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并噻唑-6-甲酸羟基酰胺；4-氟-5-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并噁唑-6-甲酸羟基酰胺；5-(2-氯-4-碘苯基氨基)-6，7-二氟-3H-苯并咪唑-4-甲酸羟基酰胺；6，7-二氟-2-(2-羟基-乙基)-5-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-3H-苯并咪唑-4-甲酸羟基酰胺；6，7-二氟-5-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并噁唑-4-甲酸羟基酰胺；6，7-二氟-5-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并噻唑-4-甲酸羟基酰胺；7，8-二氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)喹喔啉-5-甲酸羟基酰胺；6-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-8-硝基-喹喔啉-5-甲酸羟基酰胺；5-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-8-硝基-喹喔啉-6-甲酸羟基酰胺；8-氯-5-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-喹喔啉-6-甲酸羟基酰胺；3-环丙基-7-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-3H-苯并咪唑-4，6-二甲酸4-二甲基酰胺6-羟基酰胺；7-溴-4-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并噁唑-5-甲酸羟基酰胺；7-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-4-氟-苯并噻唑-6-甲酸羟基酰胺；7-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-4-硝基-苯并噁唑-6-甲酸羟基酰胺；4-氟-5-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯并噻唑-6-甲酸环丙基甲氧基-酰胺；4-氟-5-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并噁唑-6-甲酸环丙基甲氧基-酰胺；5-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-6，7-二氟-3H-苯并咪唑-4-甲酸环丙基甲氧基-酰胺；6，7-二氟-2-(2-羟基-乙基)-5-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-3H-苯并咪唑-4-甲酸环丙基甲氧基-酰胺；6，7-二氟-5-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯并噁唑-4-甲酸环丙基甲氧基-酰胺；6，7-二氟-5-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯并噻唑-4-甲酸环丙基甲氧基-酰胺；7，8-二氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)喹喔啉-5-甲酸环丙基甲氧基-酰胺；6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-8-硝基-喹喔啉-5-甲酸环丙基甲氧基酰胺；5-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-8-硝基-喹喔啉-6-甲酸环丙基甲氧基-酰胺；8-氯-5-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-喹喔啉-6-甲酸环丙基甲氧基-酰胺；3-环丙基-7-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-3H-苯并咪唑-4，6-二甲酸4-二甲基酰胺环丙基甲氧基-酰胺；7-溴-4-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯并噁唑-5-甲酸环丙基甲氧基-酰胺；7-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-4-氟-苯并噻唑-6-甲酸环丙基甲氧基-酰胺；和7-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-4-硝基-苯并噁唑-6-甲酸环丙基甲氧基-酰胺。C.合成可以按照下列7种反应方案或其变化的形式合成所公开的化合物。这些合成策略在下面的实施例1-22中将进一步举例说明。
反应方案1
反应方案2
反应方案3
反应方案4
反应方案5
反应方案6
反应方案7
反应方案8
反应方案9
反应方案10
反应方案11 D.用途如概述一节中所述，所公开的组合物适用于与慢性疼痛包括神经性疼痛有关的疾病或病症、以及由MEK级联控制的疾病或病症的预防和治疗性治疗。例如，在一个具体实施方案中，所公开的方法涉及手术后疼痛、幻肢疼痛、灼痛、痛风、三叉神经痛、急性疱疹和带状疱疹感染后痛、糖尿病性神经病、血管、神经从抽出术、神经瘤、结节性脉管炎、挤压伤、缩窄性损伤、组织损伤、手术后疼痛、关节炎疼痛或截肢。
例如，局部损伤可以通过局部给药治疗。慢性疼痛影响整个身体，例如糖尿病性神经病可以通过系统给药(注射或口服)所公开的组合物进行治疗。对身体下部慢性疼痛(例如手术后疼痛)的治疗可以经中枢给药，例如硬膜外给药。制剂和给药方法可以包括使用一种以上的MEK抑制剂，或者将MEK抑制剂与其他药物例如抗炎药、止痛剂、肌肉松弛剂或抗感染药组合使用。优选的给药途径是经口、鞘内或硬膜外、皮下、静脉内、肌内给药，并且对于非人哺乳动物足底内给药，优选硬膜外给药。
1.剂量按照已知方法，考虑例如年龄、体重、健康状况、需治疗的疼痛类型和其他药物治疗的存在等因素，本领域专业人员将能够确定给患者施用的适当剂量。通常，有效量为0.1-1000mg/kg/天，优选1-300mg/kg体重，并且对于正常体重的成年患者，日剂量为10-5000mg。按照所公开的方法，可以施用100mg、200mg、300mg或400mg的市售胶囊或其他制剂(例如液体和包膜片剂)。
2.制剂单位剂型包括片剂、胶囊、小丸、粉末、颗粒、水和非水口服溶液和悬浮液、以及非肠道溶液，它们包装在可再分为单个剂量的容器中。单位剂型还可用于各种给药方法，包括控释制剂例如皮下植入物。给药方法包括口服、直肠、非肠道(静脉内、肌内、皮下)、脑池内、阴道内、腹膜内、膀胱内、局部(滴剂、粉末、软膏、凝胶或乳膏)以及吸入(颊或鼻喷雾)。
非肠道制剂包括可药用水或非水溶液、分散体、悬浮液、乳液和制备这些制剂的无菌粉末。载体的实例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇)、植物油和可注射有机酯例如油酸乙酯。可以使用包衣例如卵磷脂、表面活性剂保持流动性，或者保持适当的粒度。固体剂型的载体包括(a)填充剂或增量剂，(b)粘合剂，(c)湿润剂，(d)崩解剂，(e)溶液阻滞剂，(f)吸收促进剂，(g)吸附剂(adsorbants)，(h)润滑剂，(i)缓冲剂，和(j)推进剂。
组合物还可以含有辅剂例如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂；抗菌剂例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚和山梨酸；等渗剂例如糖或氯化钠；吸收延迟剂例如单硬脂酸铝和明胶；以及吸收促进剂。
3.有关的化合物本发明提供了所公开的化合物以及与所公开化合物密切相关的可药用形式，例如盐、酯、酰胺、水合物或其溶剂化物；掩蔽的或保护的形式；和外消旋混合物，或对映异构纯或旋光纯的形式。
可药用盐、酯和酰胺包括羧酸盐(例如C1-8烷基、环烷基、芳基、杂芳基、或非芳族杂环)，氨基酸加成盐、酯和酰胺，它们具有合理的有益/危险比、药物有效性，并适于与患者组织接触、而没有不适当的毒性、刺激性或变应性反应。典型的盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、乙酸盐、草酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘甲酸盐、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、lactiobionate和月桂基磺酸盐。这些盐包括碱金属和碱土金属阳离子例如钠、钾、钙、和镁，以及无毒铵、季铵和胺阳离子例如四甲基铵、甲胺、三甲胺和乙胺。参见例如S.M.Berge等，″Pharmaceutical Salts，″J.Pharm.Sci.，1977，661-19，该文献结合在本文中作为参考。典型的本发明可药用酰胺包括衍生自氨、伯C1-6烷基胺和仲二(C1-6烷基)胺的酰胺。仲胺包括含有至少一个氮原子和任选包含1-2个其他杂原子的5-或6-元杂环或杂芳环部分。优选的酰胺衍生自氨、C1-3烷基伯胺和二(C1-2烷基)胺。典型的本发明的可药用酯包括C1-7烷基、C5-7环烷基、苯基和苯基(C1-6)烷基酯。优选的酯包括甲酯。
本发明还包括具有一个或多个被保护基掩蔽的官能团(例如羟基、氨基或羧基)的所公开化合物。其中一些被掩蔽或保护的化合物是可药用的；其他的将适于作为中间体。本文公开的合成中间体和方法及其较小的改变也包括在本发明范围内。羟基保护基羟基保护基包括醚、酯，用于保护1，2-和1，3-二醇的基团。醚保护基包括甲基、取代的甲基醚、取代的乙基醚、取代的苄基醚、甲硅烷基醚以及将甲硅烷基醚转化为其他官能团。
取代的甲基醚取代的甲基醚包括甲氧基甲基、甲硫基甲基、叔丁硫基甲基、(苯基二甲基甲硅烷基)甲氧基甲基、苄氧基甲基、对乙氧基苄氧基甲基、(4-甲氧基苯氧基)甲基、愈创木酚甲基、叔丁氧基甲基、4-戊烯氧基甲基、甲硅烷氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基、2，2，2-三氯乙氧基甲基、二(2-氯-乙氧基)甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、四氢吡喃基、3-溴四氢-吡喃基、四氢噻喃基、1-甲氧基环己基、4-甲氧基四氢吡喃基、4-甲氧基四氢噻喃基、4-甲氧基四氢噻喃基、S，S-二氧基、1-[(2-氯-4-甲基)苯基]-4-甲氧基哌啶-4-基、1，4-二氧六环-2-基、四氢呋喃基、四氢噻吩基(thiofuranyl)和2，3，3a，4，5，6，7，7a-八氢-7，8，8-三甲基-4，7-ethanobenzofuran-2-基。
取代的乙基醚取代的乙基醚包括1-乙氧基乙基、1-(2-氯乙氧基)乙基、1-甲基-1-甲氧基乙基、1-甲基-1-苄氧基乙基、1-甲基-1-苄氧基-2-氟乙基、2，2，2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、2-(苯基氢硒基)乙基、叔丁基、烯丙基、对氯苯基、对甲氧基苯基、2，4-二硝基苯基和苄基。
取代的苄基醚取代的苄基醚包括对甲氧基苄基、3，4-二甲氧基苄基、邻硝基苄基、对硝基苄基、对卤代苄基、2，6-二氯苄基、对氰基苄基、对苯基苄基、2-和4-甲基吡啶基、3-甲基-2-甲基吡啶基N氧、二苯基甲基、p，p’-二硝基二苯甲基、5-二苯并环庚基、三苯基甲基、α-萘基二苯基-甲基、对甲氧基苯基二苯基甲基、二(对甲氧基苯基)苯基甲基、三-(对甲氧基苯基)甲基、4-(4’-溴苯乙酰氧基)苯基二苯基甲基、4，4’，4″-三(4，5-二氯苯二甲酰亚氨基苯基)甲基、4，4’，4″-三(乙酰丙酰氧苯基)甲基、4，4’，4″-三(苯甲酰氧苯基)甲基、3-咪唑-1-基甲基)二(4’，4″-二甲氧基苯基)-甲基、1，1-二(4-甲氧基苯基)-1’-芘基甲基、9-蒽基、9-(9-苯基)占吨基、9-(9-苯基-10-氧代)蒽基、1，3-苯并二硫杂环戊烷-2-基和苯并异噻唑基S，S-二氧基。
甲硅烷基醚甲硅烷基醚包括三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基、二甲基异丙基甲硅烷基、二乙基异丙基甲硅烷基、二甲基己基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、三苄基甲硅烷基、三对二甲苯基甲硅烷基、三苯基甲硅烷基、二苯基甲基甲硅烷基和叔丁基甲氧基苯基甲硅烷基。酯酯保护基包括酯、碳酸酯，帮助裂解的酯、混合酯和磺酸酯。
酯保护的酯的实例包括富马酸酯、苯甲酰基富马酸酯、乙酸酯、氯乙酸酯、二氯乙酸酯、三氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、酸氯苯氧基乙酸酯、对P-苯基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-氧代戊酸盐(乙酰丙酸酯)、4,4-(亚乙基二硫)戊酸酯、新戊酸酯、金刚烷酸酯、巴豆酸酯、4-甲氧基巴豆酸酯、苯甲酸酯、对苯基苯甲酸酯和2，4，6-三甲基苯甲酸酯(间三甲基苯甲酸酯)。
碳酸酯碳酸酯包括甲基、9-芴基甲基、乙基、2，2，2-三氯乙基，2-(三甲基甲硅烷基)乙基、2-(苯基磺酰基)乙基、2-(三苯基磷基)乙基、异丁基、乙烯基、烯丙基、对硝基苯基、苄基、对甲氧基苄基、3，4-二甲氧基苄基、邻硝基苄基、对硝基苄基、S-苄基硫代碳酸酯、4-乙氧基-1-萘基和甲基二硫代碳酸酯。
帮助裂解的酯帮助裂解的保护基的实例包括2-碘苯甲酸酯、4-叠氮基-丁酸酯、4-硝基-4-甲基戊酸酯、邻-(二溴甲基)苯甲酸酯、2-甲酰基苯磺酸酯、2-(甲硫基甲氧基)乙基碳酸酯、4-(甲硫基甲氧基甲基)苯甲酸酯和2-(甲硫基甲氧基甲基)苯甲酸酯。
混合酯除了上述各类酯之外，混合酯包括2，6-二氯-4-甲基苯氧基乙酸酯、2，6-二氯-4-(1，1，3，3-四甲基丁基)苯氧基乙酸酯、2，4-二(1，1-二甲基丙基)苯氧基乙酸酯、氯二苯基乙酸酯、异丁酸酯、单琥珀酸酯、(E)-2-甲基-2-丁烯酸酯(甲基丁烯酸酯)、邻-(甲氧羰基)苯甲酸酯、对-P-苯甲酸酯、α-萘甲酸酯、硝酸酯、N，N，N’，N’-四甲基phosphorodiamidate、N-苯基氨基甲酸酯、硼酸酯、二甲基硫膦基酯和2，4-二硝基苯基次磺酸酯。
磺酸酯保护的硫酸酯包括硫酸酯、甲磺酸酯、苄基磺酸酯和甲苯磺酸酯。保护1.2-和1.3-二醇的基团保护1，2-和1，3-二醇的基团包括环缩醛和酮缩醇、环原酸酯和甲硅烷基衍生物。
环缩醛和酮缩醇环缩醛和酮缩醇包括亚甲基、亚乙基、1-叔丁基亚乙基、1-苯基亚乙基、(4-甲氧基苯基)亚乙基、2，2，2-三氯亚乙基、acetonide(亚异丙基)、环亚戊基、环亚己基、环亚庚基、亚苄基、对甲氧基亚苄基、2，4-二甲氧基亚苄基、3，4-二甲氧基亚苄基和2-硝基亚苄基。
环原酸酯环原酸酯包括甲氧基亚甲基、乙氧基亚甲基、二甲氧基亚甲基、1-甲氧基亚乙基、1-乙氧基亚乙基、1，2-二甲氧基亚乙基、α-甲氧基亚苄基、1-(N，N-二甲基氨基)亚乙基衍生物、α-(N，N-二甲基氨基)亚苄基衍生物和2-氧杂环亚戊基。羧基保护基酯酯保护基包括酯、取代的甲基酯、2-取代的乙基酯、取代的苄基酯、甲硅烷基酯、活化酯、混合衍生物和甲锡烷基酯。
取代的甲基酯取代的甲基酯包括9-芴基甲基、甲氧基甲基、甲硫基甲基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、甲氧基乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基-甲基、苄氧基甲基、苯甲酰甲基、对溴苯甲酰甲基、α-甲基苯甲酰甲基、对甲氧基苯甲酰甲基、甲酰氨基甲基和N-苯二甲酰亚氨基甲基。
2-取代的乙基酯2-取代的乙基酯包括2，2，2-三氯乙基、2-卤代乙基、α-氯代烷基、2-(三甲基甲硅烷基)乙基、2-甲硫基乙基、1，3-二噻烷基-2-甲基、2-(对硝基苯基亚磺酰)-乙基、2-(对甲苯磺酰)乙基、2-(2’-吡啶基)乙基、2-(二苯基膦基)乙基、1-甲基-1-苯基乙基、叔丁基、环戊基、环己基、烯丙基、3-丁烯-1-基、4-(三甲基甲硅烷基)-2-丁基-1-基、肉桂基、α-甲基肉桂基、苯基、对(甲基巯基)-苯基和苄基。
取代的苄基酯取代的苄基酯包括三苯基甲基、二苯基甲基、二(邻硝基苯基)甲基、9-蒽基甲基、2-(9，10-二氧代)蒽基甲基、5-二苯并环庚基、1-芘基甲基、2-(三氟甲基)-6-铬酰甲基、2，4，6-三甲基苄基、对溴苄基、邻硝基苄基、对硝基苄基、对甲氧基苄基、2，6-二甲氧基苄基、4-(甲基亚磺酰基)苄基、4-硫苄基、胡椒基和4-P-苄基。
甲硅烷基酯甲硅烷基酯包括三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、异丙基二甲基甲硅烷基、苯基二甲基甲硅烷基和二叔丁基甲基甲硅烷基。
混合衍生物混合衍生物包括噁唑、2-烷基-1，3-噁唑啉、4-烷基-5-氧代-1，3-噁唑烷、5-烷基-4-氧代-1，3-二氧戊环、原酸酯、苯基和五氨基钴(III)配合物。
甲锡烷基酯甲锡烷基酯的实例包括三乙基甲锡烷基和三正丁基甲锡烷基。酰胺和酰肼酰胺包括N，N-二甲基、吡咯烷基、哌啶基、5，6-二氢菲啶基、邻硝基N-酰苯胺、N-7-硝基吲哚基、N-8-硝基-1，2，3，4-四氢喹啉基和对-P-苯磺酰胺。酰肼包括N-苯基、N，N’-二异丙基和其他二-烷基酰肼。氨基保护基氨基甲酸酯氨基甲酸酯包括氨基甲酸酯、取代的乙基、帮助裂解的基团、光裂解基团、脲类衍生物和混合氨基甲酸酯。
氨基甲酸酯氨基甲酸酯包括甲基和乙基、9-芴基甲基、9-(2-硫)芴基甲基、9-(2，7-二溴)芴基甲基、2，7-二叔丁基-[9-(10，10-二氧-10，10，10、10-四氢-噻吨基(thioxanthyl))]甲基和4-甲氧基苯甲酰甲基。
取代的乙基取代的乙基保护基包括2，2，2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、2-苯基乙基、1-(1-金刚烷基)-1-甲基乙基、1，1-二甲基-2-卤代乙基、1，1-二甲基-2，2-二溴乙基、2-三氯乙基、1-甲基-1-(4-联苯基)乙基、1-(3，5-二叔丁基苯基)-1-甲基乙基、2-(2’-和4’-吡啶基)乙基、2-(N，N-环(icyclo)己基甲酰氨基)-乙基、叔丁基、1-金刚烷基、乙烯基、烯丙基、1-异丙基烯丙基、肉桂基(connamyl)、4-硝基肉桂基、喹啉基、N-羟基哌啶基、烷基二硫基、苄基、对甲氧基苄基、对硝基苄基、对溴苄基、对氯苄基、2，4二氯苄基、4-甲基亚硫酰基苄基、9-蒽基甲基和二苯基甲基。
帮助裂解的基团通过帮助裂解保护的基团包括2-甲硫基乙基、2-甲基磺酰基乙基、2-(对甲苯磺酰基)乙基、[2-(1，3-二噻烷基)]甲基、4-甲基噻吩基、2，4-二甲基-噻吩基、2-磷基乙基、2-三苯基磷基异丙基、1，1-二甲基-2氰基乙基、间氯-对-酰氧基苄基、对(二羟基硼烷基)苄基、5-苯并异噁唑基-甲基和2-(三氟甲基)-6-色酮基甲基。
光裂解光裂解方法使用的基团是例如间硝基苯基、3，5-二甲氧基苄基、邻硝基苄基、3，4-二甲氧基-6-硝基苄基和苯基(邻硝基苯基)甲基。
脲类衍生物脲类衍生物的实例包括吩噻嗪基-(10)-羰基衍生物、N’-对甲苯磺酰氨基羰基和N’-苯基氨基硫代羰基。
混合氨基甲酸酯除上述基团之外，混合氨基甲酸酯包括叔戊基、S-苄基硫代氨基甲酸酯、对氰基苄基、环丁基、环己基、环戊基、环丙基甲基、对癸氧基-苄基、二异丙基甲基、2，2-二甲氧基羰基乙烯基、邻-(N，N-二甲基-甲酰氨基)-苄基、1，1-二甲基-3-(N，N-二甲基甲酰氨基)丙基、1，1-二甲基-丙炔基、二(2-吡啶基)甲基、2-呋喃基甲基、2-碘乙基、异冰片基、异丁基、异烟酰(isonicotinyl)、对-(p’-甲氧基苯基-偶氮)苄基、1-甲基环丁基、1-甲基环己基、1-甲基-1-环丙基-甲基、1-甲基-(3，5-二甲氧基苯基)乙基、1-甲基-1-(对-henyl偶氮苯基)-乙基、1-甲基-1-苯基乙基、1-甲基-1-(4-吡啶基)乙基、苯基、对(苯基偶氮)苄基、2，4，6-三叔丁基苯基、4-(三甲基铵)苄基和2，4，6-三甲基苄基。酰胺酰胺酰胺包括N-甲酰基、N-乙酰基、N-氯乙酰基、N-三氯乙酰基、N-三氟乙酰基、N-苯基乙酰基、N-3-苯基丙酰基、N-吡啶甲酰基(picolinoyl)、N-吡啶基-甲酰胺、N-苯甲酰基苯基丙氨酰衍生物、N-苯甲酰基和N-对苯基苯甲酰基。
帮助裂解的基团帮助裂解的基团包括N-邻硝基苯基乙酰基、N-邻硝基苯氧基乙酰基、N-乙酰乙酰基、(N’-二硫苄氧羰基氨基)乙酰基、N-3-(对羟基苯基)丙酰基、N-3-(邻硝基苯基)丙酰基、N-2-甲基-2-(邻硝基苯氧基)丙酰基、N-2-甲基-2-(邻苯基偶氮苯氧基)丙酰基、N-4-氯丁酰基、N-3-甲基-3-硝基丁酰基、N-邻硝基肉桂酰基、N-乙酰基蛋氨酸衍生物、N-邻硝基苯甲酰基、N-邻(苯甲酰氧基甲基)苯甲酰基和4，5-二苯基-3-噁唑啉-2-酮。
环亚胺衍生物环亚胺衍生物包括N-邻苯二甲酰亚胺、N-二硫杂琥珀酰基、N-2，3-二苯基-马来酰基、N-2、5-二甲基吡咯基、N-1，1，4，4-四甲基二甲硅烷基氮杂环戊烷加合物、5-取代的1，3-二甲基-1，3，5-三氮杂环己烷-2-酮、5-取代的1，3-二苄基-1，3，5-三氮杂环己烷-2-酮和1-取代的3，5-二硝基-4-羟基吡啶基。特殊的-NH保护基-NH保护基包括N-烷基和N-芳基胺、亚胺衍生物、烯胺衍生物和N-杂原子衍生物(例如N-金属、N-N、N-P、N-Si和N-S)、N-亚磺酰基和N-磺酰基。
N-烷基和N-芳基胺N-烷基和N-芳基胺包括N-甲基、N-烯丙基、N-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]-甲基、N-3-乙酰氧基丙基、N-(1-异丙基-4-硝基-2-氧代-3-吡咯啉-3-基)、季铵盐、N-苄基、N-二(4-甲氧基苯基)甲基、N-5-二苯并环庚基、N-三苯基甲基、N-(4-甲氧基苯基)二苯基甲基、N-9-苯基芴基、N-2，7-二氯-9-芴基亚甲基、N-二茂铁基甲基和N-2-吡啶甲基胺N’-氧化物。
亚胺衍生物亚胺衍生物包括N-1，1-二甲硫基亚甲基、N-亚苄基、N-对甲氧基亚苄基、N-二苯基亚甲基、N-[(2-吡啶基)?基]亚甲基、N-(N’，N’-二甲基氨基亚甲基)、N，N’-亚异丙基、N-对硝基亚苄基、N-亚水杨基、N-5-氯亚水杨基、N-(5-氯-2-羟基苯基)苯基亚甲基和N-环亚己基。
烯胺衍生物烯胺衍生物的实例是N-(5，5-二甲基-3-氧代-1-环己烯基)。
N-杂原子衍生物N-金属衍生物包括N-硼烷衍生物、N-二苯基硼酸(borinic acid)衍生物、N-[苯基(五羰基铬-或-钨)]和N-铜或N-锌螯合物。N-N衍生物的实例包括N-硝基、N-亚硝基和N-氧化物。N-P衍生物的实例包括N-二苯基氧膦基、N-二甲硫基氧膦基、N-二苯基硫氧膦基、N-二烷基磷酰基、N-二苄基磷酰基和N-二苯基磷酰基。N-亚磺酰基衍生物的实例包括N-苯亚磺酰基、N-邻硝基苯亚磺酰基、N-2，4-二硝基苯亚磺酰基、N-五氯苯亚磺酰基、N-2-硝基-4-甲氧基-苯亚磺酰基、N-三苯基甲基亚磺酰基和N-3-硝吡啶亚磺酰基。N-磺酰基衍生物包括N-对甲苯磺酰基、N-苯磺酰基、N-2，3，6-三甲基-4-甲氧基苯磺酰基、N-2，4，6-三甲氧基苯磺酰基、N-2，6-二甲基-4-甲氧基苯磺酰基、N-五甲基苯磺酰基、N-2，3，5，6-四甲基-4-甲氧基苯磺酰基、N-4-甲氧基苯磺酰基、N-2，4，6-三甲基苯磺酰基、N-2，6-二甲氧基-4-甲基苯磺酰基、N-2，2，5，7，8-五甲基苯并二氢吡喃-6-磺酰基、N-甲磺酰基、N-三甲基甲硅烷基乙磺酰基、N-9-蒽磺酰基、N-4-(4’，8’-二甲氧基萘基甲基)-苯磺酰基、N-苄基磺酰基、N-三氟甲基磺酰基和N-苯甲酰甲基磺酰基。
掩蔽的或保护的所公开化合物可以是前药、在体内经代谢或转化产生所公开化合物的化合物，例如在代谢过程中瞬变的化合物。该转化可以是由于与体液例如血液接触，或者由于酸的作用，或者由于肝、肠胃或其他酶的作用而导致的水解或氧化。
在下面的实施例中将对本发明的其他特征作进一步描述。E.实施例生物学实施例实施例1PD 198306对链佐星引起的静止异常性疼痛的影响动物将得自Bantin and Kingman (Hull，U.K.)的雄性Sprague Dawley大鼠(250-300g)分为每3只一组饲养。所有的动物均处于12小时明/暗循环(在早晨700开始光照)，自由取食和饮水。所有试验均在观察者对药物治疗不知情的情况下进行。在大鼠中产生糖尿病如上所述(Courteix等，1993)，通过腹膜内注射链佐星(50mg/kg)引起糖尿病。评价静止异常性疼痛使用Semmes-Weinstein von Frey毛发(Stoelting，Illinois，U.S.A.)测定机械过敏。将动物置于底部为金属丝网眼的笼子中，使其爪子可以接触到下面。在开始试验之前使动物习惯于这种环境。通过用von Frey毛发以向上的力(0.7，1.2，1.5，2，3.6，5.5，8.5，11.8，15.1和29g)触摸动物右后爪的足底表面最多6秒，测定机械过敏。一旦产生退缩反应，则用下一个向下的von Frey毛发开始对该爪进行试验，直至不再发生反应。29g的最高力使爪抬高并引起反应，因此表现出截断点(point)。以爪退缩阈(PWT)记录引起反应所需力的最低量，以克表示。药物PD 198306[N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺]和CI-1008(pregabalin)由Parke-Davis(Ann Arbor，MI，USA)合成。将PD 198306悬浮在cremophor∶乙醇∶水(1∶1∶8)载体中。将Pregabalin溶解在水中。两种化合物均通过口服给药。将链佐星(Aldrich，UK)溶解在0.9％w/v NaCl中并通过腹膜内注射给药。药物的给药量为1ml/kg。统计对于非参数结果，当Mann-Whitney’s t检验有显著性时，使用Kruskall-Wallis ANOVA对静止异常性疼痛数据进行分析。试验方案在口服PD 198306(30mg/kg，p.o.)、赋形剂(cremophor∶乙醇∶水，1∶1∶8)或pregabalin(30mg/kg，p.o.)(试验)之前(基线，BL)和之后1小时，使用von Frey毛发对静止异常性疼痛进行评价。在第二天在早晨和下午再给动物口服同样的化合物。仅仅在下午给药前和给药后1小时评价静止异常性疼痛，以使动物对试验条件的习惯化减到最少。用pregabalin治疗的动物在早晨给药时饮水，以避免对该化合物反复给药产生可能的耐药性。第1天 第2天早晨 PD 198306水赋形剂下午 BL 下午 BLPD 198306 PD 198306PregabalinPregabalin赋形剂赋形剂试验 试验结果单次口服pregabalin(30mg/kg，p.o.)在给药后1小时显著阻滞了链佐星引起的静止异常性疼痛。相反，单次口服PD 198306(30mg/kg，p.o)在给药后1小时对链佐星引起的静止异常性疼痛没有影响(如下)。但是在第2天再口服两次该化合物后，它在第3次给药后1小时明显阻滞了链佐星引起的静止异常性疼痛。该作用第二天即消失(见图1)。
实施例2材料与方法动物将得自Charles River(Margate，U.K.)的雄性Sprague Dawley大鼠(250-300g)分为每3-6只一组饲养。所有的动物均处于12小时明/暗循环(在早晨700开始光照)，自由取食和饮水。所有试验均在观察者对药物治疗不知情的情况下进行。
如上所述(Courteix等，1993)，通过腹膜内注射链佐星(50mg/kg)引起糖尿病。在大鼠中产生慢性缩窄性损伤在手术过程中，借助鼻锥体，使用2％异氟烷(1∶4 O2/N2O混合物)使动物保持麻醉。如前面Bennett和Xie(1988)所述将坐骨神经结扎。在该操作过程中将动物置于恒温的毯子上。手术准备完毕后，通过穿过肱二头肌的钝解剖，将普通坐骨神经暴露在股中间。在接近坐骨三根分岔部，从粘附的组织上游离出约7mm神经，并以约1mm的间隔将4根结扎线(4-0丝线)宽松地系在其周围。逐层关闭切口，并用抗菌素局部治疗创口。鞘内注射在简单的异氟烷麻醉下，暴露出大鼠的脊柱，用100μl Hamilton注射器经鞘内注射10μl PD 198306和pregabalin。使用10mm长的27号针在5-6节腰椎部分注射到鞘隙内。如果尾部有轻弹的反应则可以判断穿透术是成功的。用自动夹子(autoclip)将创口密封，并且在注射后2-3分钟大鼠完全醒来。评价静止异常性疼痛使用Semmes-Weinstein von Frey毛发(Stoelting，Illinois，U.S.A.)测定机械过敏。将动物置于底部为金属丝网眼的笼子中，使其爪子可以接触到下面。在开始试验之前使动物习惯于这种环境。通过用von Frey毛发以向上的力(0.7，1.2，1.5，2，3.6，5.5，8.5，11.8，15.1和29g)触摸动物右后爪的足底表面最多6秒，测定机械过敏。一旦产生退缩反应，则用下一个向下的von Frey毛发开始对该爪进行试验，直至不再发生反应。29g的最高力使爪抬高并引起反应，因此表现出截断点(point)。以爪退缩阈(PWT)记录引起反应所需力的最低量，以克表示。试验方案在鞘内或足底内注射PD 198306(1-30μg，i.t.)、赋形剂(cremophor∶乙醇∶水，1∶1∶8)或pregabalin(10μg，i.t.)之前(基线，BL)和之后0.5小时、1小时和2小时，使用von Frey毛发对静止异常性疼痛进行评价。对于口服试验，口服PD 198306(3-30mg/kg，p.o.)、赋形剂(cremophor∶乙醇∶水，1∶1∶8)或pregabalin(30mg/kg，p.o.)之前(基线，BL)和之后1小时，使用von Frey毛发对静止异常性疼痛进行评价。在第二天在早晨和下午再给动物施用同样的化合物。在早晨给药前和给药后1小时评价静止异常性疼痛。对于链佐星治疗动物，在下午给药前、给药后1小时、2小时和3小时评价静止异常性疼痛。CCI治疗动物则在给药前、给药后1小时和2小时评价静止异常性疼痛。使用的药物PD 198306和pregabalin由Parke-Davis(Ann Arbor，MI，USA)合成。将PD 198306悬浮在cremophor∶乙醇∶水(1∶1∶8)载体中。将Pregabalin溶解在水中。两种化合物均通过口服、鞘内或足底内，分别以1mg/kg、10μl和100μl的量给药。将链佐星(Aldrich，UK)溶解在0.9％w/v NaCl中并通过腹膜内注射给药，药物的给药量为1ml/kg。统计对于非参数结果，当Mann-Whitney’s t检验对赋形剂组有显著性时，使用Kruskall-Wallis ANOVA对数据进行分析。结果1.系统给药后PD 198306对静止异常性疼痛的影响1.1. PD198306对链佐星引起的静止异常性疼痛的影响单次施用pregabalin(30mg/kg，p.o.)在给药后1小时显著阻滞了链佐星引起的静止异常性疼痛。相反，单次口服PD 198306(3-30mg/kg，p.o)在给药后1小时对链佐星引起的静止异常性疼痛没有影响(如下)。但是在第2天再两次施用该化合物后，PD 198306(30mg/kg)在第3次给药后2小时明显阻滞了链佐星引起的静止异常性疼痛(图2)。1.2. PD198306对CCI引起的静止异常性疼痛的影响单次施用pregabalin(30mg/kg，p.o.)在给药后1小时显著阻滞了CCI引起的静止异常性疼痛。相反，单次或多次施用PD 198306(3-30mg/kg，p.o)对CCI引起的静止异常性疼痛均没有作用(图3)。2.鞘内给药后PD 198306对静止异常性疼痛的影响鞘内注射PD198306(1-30μg)无论是对链佐星(图4)或是CCI动物(图5)，均以剂量依赖的方式阻滞了持续的静止异常性疼痛，其MED值分别是3和10μg。这种抗异常性疼痛的作用持续1小时。3.足底内给药后PD 198306对静止异常性疼痛的影响在两种神经性疼痛模型中，鞘内施用PD 198306(30μg)均明显阻滞了静止异常性疼痛(图6和7)。相反，以100倍高的剂量(3mg/100μl)直接对爪单次施用PD 198306对链佐星(图6)或CCI引起的静止异常性疼痛(图7)均没有作用。参照文献Bennett GJ，Xie Y-K.A peripheral mononeuropathy in rat thatproduces disorders of pain sensation like those seen in man.Pain1988；3387-107。Courteix C，Eschalier A and Lavarenne J.Streptozocin-induced ratsbehavioural evidence for a model of慢性疼痛.Pain 1993；5381-8。
实施例3其他MEK抑制剂在大鼠神经性疼痛模型中的作用概述在大鼠CCI神经性疼痛模型中，通过使用von Frey毛发评价静止异常性疼痛，对几种具有不同结合亲合力的MEK抑制剂的作用进行研究。鞘内施用PD219622或PD297447(30μg)对异常性疼痛没有显著影响。这种作用的缺乏反映出化合物的低亲合力或溶解度。但是，鞘内施用可能具有更高亲合力的PD 254552或PD 184352(30μg)阻滞了CCI动物持续的静止异常性疼痛。这种抗异常性疼痛的作用仅仅在注射后30分钟明显，因此短于pregabalin(100μg)的作用时间。其作用的大小类似于30μg PD184352和100μg pregabalin。由此研究可以推断，当鞘内给药时，MEK抑制剂对CCI诱导的神经病大鼠产生抗异常性疼痛的作用，并且这种抗异常性疼痛的作用与化合物的亲合力有关。
动物和在大鼠中产生慢性缩窄性损伤的方法、注射的试验化合物以及对静止异常性疼痛的评价如上对实施例2所述。PD219622、PD297447、PD184352、PD254552和pregabalin均鞘内给药，所有PD化合物的给药量是30μg，pregabalin的剂量是100μg。在鞘内施用化合物之前(基线，BL)和之后0.5小时、1小时和2小时，用von Frey毛发评价静止异常性疼痛。使用的药物PD297447、PD219622、PD254552、PD 184352(CI-1040)和pregabalin由Parke-Davis(Ann Arbor，MI，USA)合成。将PD297447、PD219622、PD254552和PD184352悬浮在cremophor∶乙醇∶水(1∶1∶8)载体中。将Pregabalin溶解在水中。所有化合物均以10μl的量经鞘内给药。统计对于非参数结果，当Mann-Whitney’s t检验对赋形剂组有显著性时，使用Kruskall-Wallis ANOVA对静止异常性疼痛数据进行分析。结果鞘内施用PD297447或PD219622(30μg)对异常性疼痛没有显著影响。这种作用的缺乏反映出化合物的低亲合力(分别是965nM和100nM)。但是，鞘内施用PD 184352或PD 254552(30μg)阻滞了CCI动物持续的静止异常性疼痛(见图8)。这些化合物具有较高的亲合力(分别为2和5nM)。这种抗异常性疼痛的作用仅仅在注射后30分钟明显，因此短于pregabalin(100μg)的作用时间。其作用的大小类似于30μg PD 184352和100μgpregabalin。
该结果表明，当鞘内给药时，MEK抑制剂对CCI诱导的神经病大鼠产生抗异常性疼痛的作用，并且这种抗异常性疼痛的作用与化合物的亲合力有关。
化学实施例实施例17-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-1H-苯并咪唑-5-甲酸(PD 205293)的制备(APK IC50＝14nM；结肠26细胞，IC50＝＞10微摩尔)步骤a5-硝基-2，3，4-三氟苯甲酸的制备往轻微搅拌的浓硫酸(50ml)加入发烟硝酸(3.4ml，0.076mol)。直接加入固体2，3，4-三氟苯甲酸(10.00g，0.05565mol)。搅拌45分钟后，该反应混合物成为橙色的均匀溶液，然后倾入冷水(400ml)中。所得水悬浮液用乙醚萃取三次(3×200ml)。合并的萃取液用无水硫酸镁干燥并真空浓缩，得到12.30g暗浅黄色固体。在氯仿(50ml)中重结晶，得到9.54g浅黄色微晶产物；产率78％；m.p.；1H-NMR(400MHz；DMSO)δ14.29(broad s，1H)，8.43-8.38(m，1H)；13C-NMR(100MHz；DMSO)δ162.41，154.24(dd，JC-F＝270.1，10.7Hz)，148.35(dd，JC-F＝267.0，9.2Hz)，141.23(dt，JC-F＝253.4Hz)，133.95，123.30(d，JC- F＝2.2Hz)，116.92(dd，JC-F＝18.2，3.8Hz)；19F-NMR(376MHz；DMSO)δ-120.50 to-120.63(m)，-131.133 to-131.27(m)，-153.63 to-153.74(m).步骤b4-氨基-2，3-二氟-5-硝基苯甲酸将固体5-硝基-2，3，-三氟苯甲酸(0.75g，0.00339mol)溶于浓氢氧化铵(25ml)中立即得到黄色溶液。五分钟内开始形成沉淀，之后用浓盐酸水溶液将该混合物酸化到pH 0。快速形成黄色沉淀。将该混合物加热至沸腾并趁热过滤。该黄色固体用10％盐酸水溶液洗涤，抽吸干燥，得到0.47g黄色粉末；产率64％；1H-NMR(400MHz；DMSO)δ13.32(s，1H)，8.36(d，1H，J＝7.6Hz)，7.98(s，2H)；19F-NMR(376MHz；DMSO)δ-128.69 to-128.76(m)，-153.60(d).步骤c4-氨基-2，3-二氟-5-硝基苯甲酸甲酯的制备将氯化氢气溶于无水甲醇(30ml)中直至溶液温热。将固体4-氨基-2，3-二氟-5-硝基苯甲酸(0.47g；0.00215mol)溶于该溶液中，在氮气氛下和剧烈搅拌下，使该反应混合物回流23小时。放置使反应混合物缓慢冷却。形成黄色沉淀，真空过滤收集并抽吸干燥，得到0.35g黄色微丝状产物；产率70％；m.p.183.5-184℃；1H-NMR(400MHz；DMSO)δ8.36(dd，1H，J＝7.3，1.7Hz)，8.06(s，2H)，3.78(s，3H)；19F-NMR(376MHz；DMSO)δ-128.85 to-128.92(m)，-153.29(d)；MS(APCI-)231(M-1，100)；IR(KBr)3433，3322，1700，1650，1549，1343，1285cm-1；分析.计算值/实测值C8H6F2N2O4C，41.39/41.40；H.2.61/2.50；N.12步骤d4-氨基-3-氟-2-(2-甲基-苯基氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯的制备将固体4-氨基-2，3-二氟-5-硝基苯甲酸甲酯(0.087g，3.7×10-4mol)溶于邻甲苯胺(3ml，0.028mol)中。在氮气氛下，将该反应混合物在200℃下搅拌35分钟。然后将该混合物分配到乙醚(150ml)和10％盐酸水溶液(150ml)中。乙醚相用无水硫酸镁干燥并真空浓缩为固体粗品。将该粗产物溶于5ml二氯甲烷并滤过快速硅胶短柱。用二氯甲烷洗脱，得到0.0953g黄色固体；产率81％；m.p.164-168℃；1H-NMR(400MHz；DMSO)δ9.20(s，1H)，8.52(d，1H，J＝1.7Hz)，7.57(s，2H)，7.19(d，1H，J＝7.3Hz)，7.12-7.08(m，1H)，7.02-6.98(m，1H)，6.95-6.91(m，1H)，3.78(s，3H)，2.21(s，3H)；19F-NMR(376 MHz；DMSO)δ-141.13(s)；MS(APCI+)320(M+1，100)；(APCI-)318(M-1，100)；IR(KBr)3467，3346，1690，1305cm-1；C15H14FN3O4·0.21H2O的元素分析计算/实测值C，55.77/55.97；H，4.50/4.55；N，13.01/12.61；F，5.88/5.95。步骤e4，5-二氨基-3-氟-2-(2-甲基苯基氨基)苯甲酸甲酯在30.2℃下，往振荡容器中的4-氨基-3-氟-2-(2-甲基-苯基氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯(2.52g，0.00789mol)、四氢呋喃(50ml)、甲醇(50ml)和洗涤过的阮内镍(0.5g)组成的混合物中施加4小时48分钟的48.6psi氢气。将该混合物过滤，滤液真空浓缩，得到2.20g鲑鱼色非晶固体；产率96％；1H-NMR(400MHz；DMSO)δ7.84(s，1H)，7.04(d，1H，J＝7.1Hz)，6.98(d，1H，J＝1.2Hz)，6.95-6.91(m，1H)，6.68-6.64(m，1H)，6.40-6.36(m，1H)，5.39(s，2H)，4.73(s，2H)，3.66(s，3H)，2.21(s，3H)；19F-NMR(376MHz；DMSO)δ-139.66(s).步骤f7-氟-6-(2-甲基-苯基氨基)-1H-苯并咪唑-5-甲酸甲酯将4，5-二氨基-3-氟-2-(2-甲基-苯基氨基)-苯甲酸甲酯(1.78g，0.00615mol)的甲酸(Aldrich，95-97％，100ml，2.5mol)溶液回流3小时，然后真空浓缩，得到棕色固体粗品。该粗产物用氯仿(40ml)，然后真空过滤收集。将该固体抽吸干燥，得到1.09g淡紫色粉末。滤液真空浓缩为固体粗品，将其用10ml氯仿-二氯甲烷研制。真空过滤收集这些固体并抽吸干燥，得到另外0.55淡紫色粉末(总计得到1.64g)；产率87％；熔点259-262℃；1H-NMR(400MHz；DMSO)δ8.42(s，1H)，8.03(s，1H)，7.93(broad s，1H)，7.12(d，1H，J＝7.0Hz)，6.99-6.95(m，1H)，6.75-6.71(m，1H)，6.48-6.44(m，1H)，3.81(s，3H)，2.30(s，3H)；19F-NMR(376MHz；DMSO)δ-132.84(s)；MS(APCI+)300(M+1，100)；(APCI-)298(M-1，100)；IR(KBr)3322，1689，1437，1326，1218cm-1；C16H14N3O2·0.32 H2O的元素分析计算/实测值C，62.99/63.01；H，4.84/4.61；N，13.77/13.70。步骤g7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-1H-苯并咪唑-5-甲酸甲酯的制备在搅拌下，将7-氟-6-(2-甲基苯基氨基)-1H-苯并咪唑-5-甲酸甲酯(0.2492g，8.326×10-4mol)、苄基三甲基二氯碘化铵(Aldrich，95％，0.3934g，0.00113mol)和氯化锌(0.1899g，0.00139mol)在冰乙酸(20ml)中的混合物回流15分钟。该悬浮液趁热过滤，分离出沉淀，在真空烤箱中干燥(90℃，约10mm Hg)过夜，得到0.2392g绿色粉末；产率68％；m.p.219-220℃分解；1H-NMR(400MHz；DMSO)δ8.71(s，1H)，8.02(s，1H)，7.85(broads，1H)，7.43(d，1H