专利名称：淫羊藿甙在制备扩血管药物中的应用的制作方法 淫羊藿是常用的中药，是Berberridaceae科淫羊藿属(Epimedium genus)植物。中华人民共和国药典(2000年版)收载了如下五种淫羊藿药材，药材为干燥的地上部分。即淫羊藿、箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、巫山淫羊藿、朝鲜淫羊藿等。淫羊藿主要含有异戊烯基取代的黄酮甙(淫羊藿甙)。其主要药效为补肾壮骨、增强内分泌，具有激素作用，可促进骨髓细胞DNA含成，促进骨细胞的生长。 在淫羊藿应用方面，基本上是依据其补肾壮阳，怯风除湿等功用主治作用。如《中华人民共和国药典》(2005年版，一部)淫羊藿条中〔功能与主治〕为补肾阳，强筋骨，怯风湿。用于阳萎遗精，筋骨痿软，风湿痹痛，麻木拘挛；更年期高血压。 检索淫羊藿甙中国专利，共有公开专利19件，其中涉及到提取纯化方面的制备方法专利3件，涉及用于减肥制剂专利2件，涉及用于性功能调节制剂专利4件，涉及抗排异，抗风湿，抗骨质增生制剂专利各1件，其它专利7件。未发现淫羊藿甙用于制备治疗心脑血管疾病药物方面的专利。 近年已有个别研究者注意到淫羊藿甙对血管的作用，但大多是局限于淫羊藿甙对抑制PDE5酶，促进NO释放及对血管平滑肌松弛作用；也有少量研究认为淫羊藿甙是通过对血管平滑肌细胞凋亡的影响对血管产生作用；未见直接研究淫羊藿甙对血管的作用，因而限制了淫羊藿的应用领域。
本发明的目的是提供淫羊藿甙在制备扩血管药物中的应用，在制备治疗心脑血管疾病的药物中的应用。 为观察淫羊藿甙直接对动脉的调节作用，本发明参照中国专利200510061549.2所报道的改进的血管阻力与血管张力试验测定方法，采用血管离体灌流技术，以排除活体实验中各种神经、体液因素对淫羊藿甙扩张动脉作用的影响。
结果发现，淫羊藿甙对离体动脉环具有浓度依赖性舒张作用，该作用通过内皮依赖性和内皮非依赖的方式产生，前者可能通过激活血管内皮细胞一氧化氮-鸟苷酸环化酶途径，拮抗α-肾上腺素受体激动剂，及阻断血管平滑肌细胞内质网上的三磷酸肌醇敏感的钙离子通道有关，并具有部分钙拮抗剂的药理作用特点。因此，发现淫羊藿甙具有直接扩张动脉的新的药理作用，可用于心脑血管疾病的治疗。
本发明所述的淫羊藿甙可与药效学允许的药用赋形剂组合制备成制剂。
本发明所述的淫羊藿甙与药用赋形剂制备的制剂形式主要为注射制剂，包括水针，输液和冻干粉针剂。
所述制剂的给药形式主要选静脉给药。
根据我们研究发现，淫羊藿甙能应用于制备治疗心脑血管疾病的药物，其作用机制是其直接对血管的调节作用。
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。


2.实验步骤 清洁级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，体重240-260g。
迅速游离SD大鼠胸主动脉，置于4℃含95％O2和5％CO2混合气体预饱和的K-H液中，剔除周围结缔组织，剪成3-4mm的血管环，期间注意保护血管环内膜不受破坏。据实验需要，采用棉签磨擦血管环内表面的方法，将部分血管环制备成去除内皮的模型。而后将血管环悬挂于预置10mL K-H液的浴槽内，一端固定，一端通过张力换能器连接Medlab生物信号采集系统。在持续通95％O2和5％CO2的混合气体的状态下，调节其基础张力至2.0g，并在37℃下稳定60min，期间每15min换液1次。用KCl(60mmol·L-1)重复刺激3次，以诱发血管的最大收缩幅度。待血管环重新稳定后，用苯氧肾上腺素(phenylephrine，PE)(1μmol·L-1)收缩血管环达峰值，加入乙酰胆碱(acetylcholine，Ach)(10μmol·L-1)检验血管内皮完整性。若加Ach后使PE预收缩的血管环舒张80％以上，可认为内皮完整；反之，则认为内皮去除。以PE(1μmol·L-1)或KCI(60mmol·L-1)诱发最大收缩幅度为100％，以加入药物后的血管张力幅度与PE或KCI诱发最大收缩幅度之间的比率反映血管张力的变化。
实施例1淫羊藿甙对离体主动脉环舒缩功能的作用 (1)观察淫羊藿甙对基础状态血管环张力的影响 试验方法与上述实验步骤相同 淫羊藿甙来源同上。采用累积加药法，每10min加入淫羊藿甙1次，观察累积给予淫羊藿甙2×10-5-6.4×10-4mol/L，对内皮完整和内皮去除血管环的作用；对照组以K-H液代替淫羊藿甙等容加入。结果表明累积给予淫羊藿甙2×10-5-6.4×10-4mol/L，对内皮完整或去除的血管环的基础张力均无显著影响，见表1、表2。
表1淫羊藿甙对内皮完整的基础状态主动脉环张力的影响(单位g)
表1淫羊藿甙对内皮去除的基础状态主动脉环张力的影响(单位g)
(2)淫羊藿甙对PE或KCI预收缩血管环张力的影响 以60mmol·L-1KCl或0.3μmol·L-1PE预收缩内皮完整的血管环，每10min1次累积加入淫羊藿甙2×10-5-6.4×10-4mol/L观察其对预收缩内皮完整和内皮去除血管环张力的作用；对照组以K-H液代替淫羊藿甙等容加入。结果表明淫羊藿对PE预收缩的内皮完整和去除的血管环表现为浓度依赖性舒张作用，且对去除内皮的血管环的舒张作用较内皮完整时的作用更弱，参见表3、表4；各浓度淫羊藿甙均不能使KCl诱导收缩的内皮完整或去除的血管环显著舒张，且对去除内皮的血管环的舒张作用较内皮完整时的作用更弱，见表5、表6。
表3淫羊藿甙对苯氧肾上腺素预收缩的内皮完整的基础状态主动脉环张力的影响(单位％)
注+P＜0.05，++P＜0.01。
表4淫羊藿甙对苯氧肾上腺素预收缩的内皮去除的基础状态主动脉环张力的影响(单位％)
注+P＜0.05，++P＜0.01。
表5淫羊藿甙对KCl预收缩的内皮完整的基础状态主动脉环张力的影响(单位％)
注+P＜0.05，++P＜0.01。
表6淫羊藿甙对KCl预收缩的内皮去除的基础状态主动脉环张力的影响(单位％)
注+P＜0.05，++P＜0.01。
实施例2淫羊藿甙对不同预处理主动脉环舒缩功能的作用 (1)淫羊藿甙对内皮完整血管环的作用 以一氧化氮合酶(NOS)抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)(0.1mmol·L-1)或前列腺素合成酶抑制剂消炎痛(10μmol·L-1)预处理内皮完整的血管环15min，而后用80mmol·L-1KCI预收缩血管，累积法加入淫羊藿甙2×10-5-6.4×10-4mol/L，观察收缩血管环张力的作用；对照组以K-H液代替淫羊藿甙等容加入。
内皮完整的血管环用L-NAME 100μmol·L-1或消炎痛10μmol·L-1预孵后，能显著抑制淫羊藿甙40-640μmol/L的血管舒张作用，结果见表7。
表7淫羊藿甙对KCl预收缩的内皮完整的基础状态主动脉环张力的影响(单位％)
注+P＜0.05，++P＜0.01。
实施例3淫羊藿甙对内皮去除血管环PE所致的两种收缩反应的作用动脉稳定后，换无钙K-H液冲洗4次，再在无钙K-H液中浸泡平衡20min，加入PE1.0μmol·L-1收缩血管，收缩后5min加入CaCl2 1.25mmol·L-1以恢复K-H液正常Ca2+浓度，血管环即再次出现收缩；待收缩稳定后先用K-H液冲洗4次，平衡后再换无钙K-H液冲洗、浸泡平衡，待反应回到基线加入淫羊藿甙4.0×10-4mol/L，孵育20min，重复以上步骤。比较给药前后肌张力变化。淫羊藿甙4.0×10-4mol/L，使PE 1.0μmol·L-1诱导细胞内钙释放引起的收缩显著下降；淫羊藿甙使PE引起细胞外钙内流产生的收缩也显著下降，结果见表8。
表7淫羊藿甙对PE所致的大鼠胸主动脉两种收缩反应的影响(单位g) 注+P＜0.05，++P＜0.01。
从上述试验可以看出，淫羊藿甙具有血管扩张作用，根据实验中淫羊藿甙对PE预收缩的内皮完整和去除的血管环表现不同，提示淫羊藿甙更主要是通过血管内皮依赖性和内皮非依赖的方式产生作用；同时实验结果还表明淫羊藿甙对血管内皮平滑肌细胞的内钙释放和外钙内流有一定阻抑作用。这些研究结果可以扩大淫羊藿新的应用领域，也进一步提示淫羊藿甙可以应用于心脑血管疾病治疗药物。


本发明通过改进的血管阻力与血管张力试验测定方法，采用血管离体灌流技术，研究了淫羊藿甙对扩张血管作用的影响。结果发现，淫羊藿甙对离体动脉环具有浓度依赖性舒张作用，该作用通过内皮依赖性和内皮非依赖的方式产生，并具有部分钙拮抗剂的药理作用特点。因此，发现淫羊藿甙具有直接扩张动脉血管的新的药理作用，可用于心脑血管疾病治疗药物的制备。