专利名称：红叶黄连木组培快繁工艺的制作方法黄连木(Pistacia chinensis),又名偕树等,属于漆树科黄连木属,是一种优良用材和观赏落叶乔木。在我国分布广泛，北至河北、山东，南至广东、广西，东到台湾，西至四川、云南都有野生和栽培黄连木，其中以河北、河南、山西、陕西等省最多。黄连木用途十分广泛，，种子含油率42. 5%，出油率20. 0% 30. 0%，已被国家林业局定为^一五，，期间重点发展的林业生物质能源树种之一，具有极高的经济价值。且具有很高的观赏价值，入秋后可显现红、橙、黄绚丽秋景，具有很高的观赏价值。 目前黄连木繁殖主要是通过扦插和种子繁殖。但是，由于黄连木的种子发芽率极低，而且扦插难以成活，因此通过组织培养技术可以快速繁殖获得植株。有关黄连木的组织培养快速繁殖技术已有一些报道，但仍然存在一些问题。种子萌发率低，难获得无菌实生苗；而茎节段组织培养容易污染、褐变率高、萌芽缓慢、新芽易枯死等，难以获得无菌苗。
本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种比较容易地获得无菌苗，并且无菌苗能进行快速繁殖，并且生长健壮、旺盛的红叶黄连木组培快繁工艺。本发明的目的通过以下技术方案来实现红叶黄连木组培快繁工艺，它包括以下步骤 A、无菌实生苗的获得，采集黄连木成熟种子，先用50 70%硫酸消化12 24h后，去外种皮；再用60 80%酒精灭菌2 4min,升萊灭菌15 25min,无菌水清洗5 6遍；然后在超净工作台上用钳子夹开种壳，将种子接种于未添加任何激素的MS基本培养基上，先进行3d暗培养3 7天，后进行光/暗培养16hr/8hr，培养室温度为25 28°C;观察记录，I 2月后可见部分种子萌发，长成完整植株，得到无菌实生苗； B、黄连木组培快繁，将无菌实生苗切成带芽茎段，去掉部分枝叶，接种于生根培养基上，组培苗的培养温度均为25 28°C，光/暗培养16/8h，接种12 16天可见接种基部略膨大并生根，继续培养I 2周，根生长良好； C、组培苗炼苗和移栽，培养4 6周后，待植株长到7 10cm，根亦生长良好，茎干粗壮，将组培苗进行炼苗移栽；炼苗时先将培养瓶薄膜露出缝隙，放置过夜，然后取出试管苗将培养基清洗干净，移入盆钵,种于大棚。所述的步骤B还包括以下操作无菌实生苗切成带芽茎段，去掉部分枝叶后，先接种于增殖培养基上后再转接于生根培养基上。所述的步骤B中的生根培养基是指MS+NAAO. 3mg/L+6_BA0. lmg/L+活性炭O. 3%+蔗糖30g/L+琼脂粉8mg/L，调节其pH为6. O 6. 4，煮开熬化分装后，高压灭菌。所述的步骤B中的生根培养基是指1/2MS+NAA0. 3mg/L+6_BA0. lmg/L+活性炭0. 3%+蔗糖30g/L+琼脂粉8mg/L，调节其pH为6. 0 6. 4，煮开熬化分装后，高压灭菌。所述的步骤B中的增殖培养基包括MS+6-BA I. 0 2. 0mg/L+NAA0. 3mg/L,调节其pH为6. 0 6. 4，煮开熬化分装后，高压灭菌。所述的步骤B还包括以下操作培养4 6周后，进行茎节段培养瓶中扩繁。所述的步骤C中的大棚中需要保持湿度，井先用黒色遮阳网进行部分遮光，后逐渐打开，使棚内移栽苗适应外部光照。所述的步骤C中大棚内的培养基质为草炭土混合蛭石。本发明具有以下优点本发明的改进了组织培养方法，优化培养基配方，能够比较容易地获得无菌苗，并且无菌苗能进行快速繁殖，并且生长健壮、旺盛。 自然条件下繁殖困难或者缓慢的黄连木，通过本发明可以快速获得大量、高质量的试管苗应用于栽培和生产。本发明是从野外采集的红叶黄连木成熟种子，将此种红叶黄连木种子得到无菌实生苗，再用无菌实生苗进行节段法组培快繁的ー种技术，解决了黄连木种子繁殖效率低的问题，可以快速为黄连木能源林的建设提供充足的种苗；且通过本エ艺获得的植株后代出现变异的几率低。

图I为本发明的种子萌发的示意图 图2为本发明的组培继代苗的示意图 图3为本发明的组培苗生根的示意图
图4为本发明生长健壮的试管苗的示意图 图5为本发明试管苗移栽成活的示意图 图6为试管苗移栽后生长I年后的示意图。

实施例I :
红叶黄连木组培快繁エ艺，它包括以下步骤
A、无菌实生苗的获得，野外采集黄连木成熟种子，先用50%硫酸消化12后，去外种皮；再用60%酒精灭菌4min，升汞灭菌15min，无菌水清洗5遍；然后在超净工作台上用钳子夹开种壳，将种子接种于未添加任何激素的MS基本培养基上,所述的MS培养基不添加任何植物生长调节剂(植物激素类)，先进行3d暗培养3 7天，后进行光/暗培养16hr/8hr，培养室温度为25°C ;观察记录，I月后可见部分种子萌发，长成完整植株，得到无菌实生苗；
B、黄连木组培快繁，无菌苗用节段法进行组培快繁，将无菌实生苗切成带芽茎段，去掉部分枝叶，接种于生根培养基上，组培苗的培养温度均为25°C，光/暗培养16/8h，接种12天可见接种基部略膨大井生根，继续培养I周，根生长良好；
C、组培苗炼苗和移栽，培养6周后，待植株长到7 10cm,根亦生长良好，茎干粗壮，可继续进行茎节段培养瓶中扩繁，亦可将组培苗进行炼苗移栽；炼苗时先将培养瓶薄膜露出缝隙，但不可完全揭开，以免失水萎焉，放置过夜，然后取出试管苗将培养基清洗干净，移入盆钵，种于大棚；
所述的步骤B中的生根培养基是指MS+NAAO. 3mg/L+6-BA0. lmg/L+活性炭O. 3%+蔗糖30g/L+琼脂粉8mg/L，调节其pH为6. O 6. 4，煮开熬化分装后，高压灭菌。所述的步骤B中的生根培养基是指1/2MS+NAA0. 3mg/L+6_BA0. lmg/L+活性炭O. 3%+蔗糖30g/L+琼脂粉8mg/L，调节其pH为6. O 6. 4，煮开熬化分装后，高压灭菌。如转接时间较短，采用此培养基可加快生根速度。所述的步骤B还包括以下操作培养4周后，进行茎节段培养瓶中扩繁。所述的步骤C中的大棚中需要保持湿度，并先用黑色遮阳网进行部分遮光，后逐渐打开，使棚内移栽苗适应外部光照。所述的步骤C中大棚内的培养基质为草炭土混合蛭石。
实施例2
红叶黄连木组培快繁工艺，它包括以下步骤
A、无菌实生苗的获得，野外采集黄连木成熟种子，先用70%硫酸消化12后，去外种皮；再用80%酒精灭菌2min，升汞灭菌25min，无菌水清洗6遍；然后在超净工作台上用钳子夹开种壳，将种子接种于未添加任何激素的MS基本培养基上,所述的MS培养基不添加任何植物生长调节剂(植物激素类)，先进行3d暗培养3 7天，后进行光/暗培养16hr/8hr，培养室温度为28°C ;观察记录，2月后可见部分种子萌发，长成完整植株，得到无菌实生苗；
B、黄连木组培快繁，无菌苗用节段法进行组培快繁，将无菌实生苗切成带芽茎段，去掉部分枝叶，先接种于增殖培养基上后再转接于生根培养基上，组培苗的培养温度均为28°C，光/暗培养16/8h，接种16天可见接种基部略膨大并生根，继续培养2周，根生长良好；
C、组培苗炼苗和移栽，培养4周后，待植株长到7 10cm,根亦生长良好，茎干粗壮，可继续进行茎节段培养瓶中扩繁，亦可将组培苗进行炼苗移栽；炼苗时先将培养瓶薄膜露出缝隙，但不可完全揭开，以免失水萎焉，放置过夜，然后取出试管苗将培养基清洗干净，移入盆钵，种于大棚；
所述的步骤B中的生根培养基是指MS+NAAO. 3mg/L+6-BA0. lmg/L+活性炭O. 3%+蔗糖30g/L+琼脂粉8mg/L，调节其pH为6. O 6. 4，煮开熬化分装后，高压灭菌。所述的步骤B中的生根培养基是指1/2MS+NAA0. 3mg/L+6_BA0. lmg/L+活性炭O. 3%+蔗糖30g/L+琼脂粉8mg/L，调节其pH为6. O 6. 4，煮开熬化分装后，高压灭菌，如转接时间较短，采用此培养基可加快生根速度。所述的步骤B中的增殖培养基包括MS+6-BA I. O 2. 0mg/L+NAA0. 3mg/L,调节其pH为6. O 6. 4，煮开熬化分装后，高压灭菌。如需更快速繁殖可转接于此培养基上，这种培养基繁殖效率较快，但基部容易着生愈伤组织，且茎干较纤弱，生根状态较差，快繁后需将其转接于生根培养基上进行壮苗生长。所述的步骤B还包括以下操作培养6周后，进行茎节段培养瓶中扩繁。所述的步骤C中的大棚中需要保持湿度，并先用黑色遮阳网进行部分遮光，后逐渐打开，使棚内移栽苗适应外部光照。所述的步骤C中大棚内的培养基质为草炭土混合蛭石。实施例3
红叶黄连木组培快繁工艺，它包括以下步骤A、无菌实生苗的获得，野外采集黄连木成熟种子，先用60%硫酸消化18h后，去外种皮；再用70%酒精灭菌3min，升汞灭菌20min，无菌水清洗5遍；然后在超净工作台上用钳子夹开种壳，将种子接种于未添加任何激素的MS基本培养基上,所述的MS培养基不添加任何植物生长调节剂(植物激素类)，先进行3d暗培养3 7天，后进行光/暗培养16hr/8hr，培养室温度为26°C ;观察记录，ー个半月后可见部分种子萌发，长成完整植株，得到无菌实生苗；
B、黄连木组培快繁，无菌苗用节段法进行组培快繁，将无菌实生苗切成带芽茎段，去掉·部分枝叶，先接种于增殖培养基上后再转接于生根培养基上，组培苗的培养温度均为27で，光/暗培养16/8h，接种14天可见接种基部略膨大并生根，继续培养I. 5周，根生长良好；
C、组培苗炼苗和移栽，培养5周后，待植株长到7 10cm,根亦生长良好，茎干粗壮，可继续进行茎节段培养瓶中扩繁，亦可将组培苗进行炼苗移栽；炼苗时先将培养瓶薄膜露出缝隙，但不可完全揭开，以免失水萎焉，放置过夜，然后取出试管苗将培养基清洗干净，移入盆钵，种于大棚；
所述的步骤B中的生根培养基是指MS+NAAO. 3mg/L+6-BA0. lmg/L+活性炭0. 3%+蔗糖30g/L+琼脂粉8mg/L，调节其pH为6. 0 6. 4，煮开熬化分装后，高压灭菌。所述的步骤B中的生根培养基是指1/2MS+NAA0. 3mg/L+6_BA0. lmg/L+活性炭
0.3%+蔗糖30g/L+琼脂粉8mg/L，调节其pH为6. 0 6. 4，煮开熬化分装后，高压灭菌。如转接时间较短，采用此培养基可加快生根速度。所述的步骤B中的增殖培养基包括MS+6-BA I. 0 2. 0mg/L+NAA0. 3mg/L,调节其pH为6. 0 6. 4，煮开熬化分装后，高压灭菌。如需更快速繁殖可转接于此培养基上，这种培养基繁殖效率较快，但基部容易着生愈伤组织，且茎干较纤弱，生根状态较差，快繁后需将其转接于生根培养基上进行壮苗生长。所述的步骤B还包括以下操作培养5周后，进行茎节段培养瓶中扩繁。所述的步骤C中的大棚中需要保持湿度，井先用黒色遮阳网进行部分遮光，后逐渐打开，使棚内移栽苗适应外部光照。所述的步骤C中大棚内的培养基质为草炭土混合蛭石。结果试管苗的建立和移栽，如图1-6所示。种子经过硫酸处理后，如图I所示，发芽率能达到40-60%，获得的无菌苗生长良好。经过多次茎节段继代繁殖，获得生长良好的一批试管苗，如图2、图3、图4所示。观察显示，试管苗的叶片与户外成苗叶片有差异。试管苗的叶片成锯齿状，而成苗后是全缘叶片。但是试管苗在自然状态下，经过一段时间生长，成苗后亦为全缘叶片。如图5所示，试管苗移栽成活；移栽后I年，如图6所示，植株高度可超过lm。


本发明公开了红叶黄连木组培快繁工艺，它包括以下步骤A、采集黄连木成熟种子，先用硫酸消化，去外种皮；再灭菌；然后将种子接种于未添加任何激素的MS基本培养基上；B、将无菌实生苗切成带芽茎段，去掉部分枝叶，接种于生根培养基上，或者先接种于增殖培养基上后再转接于生根培养基上；C、将组培苗进行炼苗移栽。本发明的有益效果是本发明的改进了组织培养方法，优化培养基配方，能够比较容易地获得无菌苗，并且无菌苗能进行快速繁殖，并且生长健壮、旺盛；自然条件下繁殖困难或者缓慢的黄连木，通过本发明可以快速获得大量、高质量的试管苗应用于栽培和生产，且通过本工艺获得的植株后代出现变异的几率低。