专利名称：一种白术的保存方法以及再培养方法白术(Atrac tylodes macrocephala Koidz.)为菊科苍术属植物,其根莖入药，为重要的药用植物。由于市场需求高，人类的长期采挖以及环境破坏，导致白木野生资源较少，目前主要通过人工栽培以保证资源满足市场的需求。我国大部分 地方均有引种栽培，习以浙江于潜、安徽皖南山区等为道地。目前，常利用白术种子或块根茎在保存圃或繁种圃内通过田间种植方式进行保存和繁殖。利用种子繁殖，易发生变异，可能会出现品种退化、种质混杂的现象；利用块根繁殖，难以短期大量获得种质资源。而且以田间种植方式进行的保存不仅占用耕地，还需耗费大量人力物カ进行栽培管理，干旱、洪涝、低温、热害、病虫害等自然灾害还可能导致种质资源丢失，因此采用田间方式不宣进行长期保存。为保存种质资源，国内已开展白木的离体组织培养、快繁研究，获得了适宜发芽、扩繁、生根等培养的组织培养基和培养条件，可在短期内获得大量组培苗。但组织继代培养，多次继代也可能会导致遗传变异，同时定期继代需耗费人力、物力。因此，目前仍需寻找最适的长期保存方法。
本发明的目的是提供一种白术的保存方法以及再培养方法。本发明提供了一种白术的保存方法，依次包括如下步骤(I)取白术组培苗的茎尖，在预培养液中进行预培养；所述预培养液为含0. 3mol/L蔗糖的MS液体培养基；(2)取完成步骤(I)的茎尖，在预处理液中进行预处理；所述预处理液为含2. OmoI/L甘油和0. 4mol/L蔗糖的MS液体培养基；(3)取完成步骤(2)的茎尖，在玻璃化保护剂中进行处理；所述玻璃化保护剂的制备方法为将3. 26mol甘油、2. 42molこニ醇、I. 9mol ニ甲基亚砜和0. 4mol蔗糖与MS液体培养基混匀至IL ；(4)将完成步骤(3)的茎尖投入液氮中保存。步骤(I)中，所述茎尖可为I. 5-2mm的茎尖。所述白术组培苗具体可为2个月苗龄的白术组培苗。步骤(I)中，所述预培养的条件可为25°C暗培养1-4天(具体可为3天)。步骤(2)中，所述预处理可为将完成步骤(I)的茎尖在所述预处理液中室温浸泡30分钟(优选振荡处理)。所述室温具体可为20-30°C (如25°C)。步骤(3)中，所述处理可为将完成步骤(2)的茎尖在所述玻璃化保护剂中0°C浸泡60分钟。所述步骤(4)包括如下步骤完成所述步骤(3)后，将含有茎尖的玻璃化保护剂滴加至铝箔上，然后将铝箔转移至充满液氮的冻存管中，然后将所述冻存管投入液氮中保存。每滴含有所述茎尖的玻璃化保护剂具体可为16微升。每滴含有所述茎尖的玻璃化保护剂具体可含有5个所述茎尖。本发明还保护ー种将以上任一所述方法保存后的白术进行再培养的方法，包括如下步骤将以上任一所述方法保存后的白术进行再培养，得到白术植株。所述再培养包括如下步骤将解冻后的白木茎尖先在含0. 3mol/L蔗糖的MS半固体培养基中暗培养I天，然后在含0. 3mg/L6-BA、0. 02mg/L NAA和0. lmg/L GA3的MS固体培养基中暗培养5-7天(茎尖返绿并有萌动迹象)，再然后转移至MS固体培养基中正常光照培养。所述再培养方法还包括在进行再培养之前将以上任一所述方法保存后的白木用含I. 2mol/L蔗糖的MS液体培养基洗涤的步骤。所述预培养的作用可以降低茎尖组织细胞自由含水量，増加可溶性糖等保护性物质含量，从而提高茎尖的抗冻能力、减少或避免冷冻伤害，提高植株存活率。所述预处理的作用进ー步降低茎尖组织细胞含水量，以避免转入较高浓度的玻璃化保护剂中快速脱水。所述玻璃化剂的作用加入玻璃化剂，使茎尖组织细胞在降温过程中达到玻璃化状态，避免细胞内形成冰晶损伤细胞膜。本发明提供了一种白术的超低温保存方法以及在超低温保存的基因上进行再培养，最终获得白术植株的方法。采用本发明提供的方法进行保存和再培养，植株再生率可达60%以上。本发明提供的方法成本低廉、操作简便、植株再生率，避免了田间保存易受自然灾害影响而导致种质变异或毁灭，以及组织培养保存中因多次继代引起遗传性状变异或污染的危险，是白术种质资源离体保存的一条有效途径。图I为组培苗的照片。图2为茎尖的照片。图3为滴加含有茎尖的PVS2玻璃化保护剂后的铝箔条。图4为转入MS固体培养基中正常光照培养7天后的照片。

本发明公开了一种白术的保存方法以及再培养方法。本发明提供的保存方法包括如下步骤(1)取白术组培苗的茎尖，在预培养液中进行预培养；所述预培养液为含0.3mol/L蔗糖的MS液体培养基；(2)取完成步骤(1)的茎尖，在预处理液中进行预处理；所述预处理液为含2.0mol/L甘油和0.4mol/L蔗糖的MS液体培养基；(3)取完成步骤(2)的茎尖，在玻璃化保护剂中进行处理；所述玻璃化保护剂的制备方法为3.26mol甘油、2.42mol乙二醇、1.9mol二甲基亚砜和0.4mol蔗糖与MS液体培养基混匀至1L；(4)将完成步骤(3)的茎尖投入液氮中保存。本发明提供的方法成本低廉、操作简便、植株再生率，是白术种质资源离体保存的一条有效途径。