专利名称：海藻用于制备血管紧张素转化酶抑制剂的应用的制作方法海带(Laminaria japonica Aresch),别名昆布、江白菜，属于褐藻门、褐子纲、海带目、海带科、海带属，是生长在海底岩石上的一种藻类，形状像带子，含有大量的碘质，可用来提制碘、钾等。中医入药时叫昆布，有“碱性食物之冠”一称。是一种常见的藻类，在中国辽宁、山东、江苏、浙江、福建及广东省北部沿海均有养殖，野生海带在低潮线下2-3米深度岩石上均生长。每100克干海带中含有粗蛋白8. 2克，脂肪0. I克，糖57克，粗纤维9. 8克，无机盐12. 9克，钙2. 25克，铁0. 15克，以及胡萝卜素0. 57毫克，硫胺素(维生素BI )0. 69毫克，核黄素(维生素B2) 0. 36毫克，尼克酸16毫克，含有262千卡热量。裙带菜(Undaria pinnatifida Suringar),属褐藻门，褐子纲、海带目、翅藻科、裙带菜属的温带性海藻。裙带菜在我国宋代的《本草》上称宭送菜，音变成裙带菜。目前主要人工养殖的国家为中国、韩国、日本和法国，我国自然生长的裙带菜主要分布在浙江省的舟山群岛及嵊泗岛。据分析每100克干裙带菜中含粗蛋白11. 6g,精脂肪0. 32g,糖类37. 81g,灰分18. 93g，还含有多种维生素，粗蛋白质含量高于海带。ACE (血管紧张素转化酶,Angiotensin Converting Enzyme)在人体内的作用是将血管紧张素 I (Angiotensin I Converting Enzyme)转化成血管紧张素 II (AngiotensinIIConverting Enzyme)，这是肾素-血管紧张素系统中已知最强的血管收缩剂，能够升高血压。在激肽释放酶-激肽系统(简称KKS)中，血管紧张素转化酶水解舒缓激肽，分解成为非活性的多肽，舒缓激肽是降压成分，从而引起血压升高。ACE是一种金属肽酶，含有2个结合Zn2+的位点，即所谓“必须结合位点(Obligatory Binding Site)”。Zn2+结合位点是ACE催化反应的活性基团所在部位。各种ACE抑制物的共同作用是与ACE活性部位的Zn2+结合，使之失活。降血压肽是由数个氨基酸组成的肽，是对ACE活性区域亲和力较强的竞争性抑制齐U，它们与ACE的亲和力比血管紧张素转化酶I (AngI)或舒缓激肽更强，而且也较不容易 从ACE结合区释放，降低ACE活性或使其失去活性，从而阻碍ACE催化血管紧张素I转化成血管紧张素II，使血管不收缩，以及催化水解舒缓激肽成为失活片段的两种生化反应过程，起到降血压的作用。到目前为止，未发现有关于利用海带、裙带菜制备ACE抑制物或降血压药物的报道
本申请的发明人在长期研究海藻的用途的过程中发现，海带和裙带菜的水解产物具有较明显的血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性。因此，本发明的目的在于提供一种海藻用于制备血管紧张素转化酶抑制剂的应用。根据本发明，所述海藻为海带和裙带菜。根据本发明的优选实施例，所述海带和裙带菜为海带和裙带菜的干品经模拟胃液、模拟胃肠液和蛋白酶水解后的产物。根据本发明的优选实施例，所述模拟胃液包括胃蛋白酶。根据本发明的优选实施例，所述模拟胃肠液包括胃蛋白酶和胰蛋白酶。 根据本发明的优选实施例，所述蛋白酶选自碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶以及风味酶。基于海藻具有抑制血管紧张素转化酶活性的作用，海藻可进一步用于开发具有降血压功能的食品或保健品。本发明为海藻的开发利用开辟了一条途径，具有一定的应用前景。模拟肠液将6. 8gKH2P04溶于250ml双蒸水中，混匀，加入190ml 0. 2mol/LNa0H和400ml双蒸水，加入胰蛋白酶(0. 2519g)，混匀，用0. 2mol/L NaOH调整pH值7. 5±0. 1，定容至 IOOOml0按表I所示，对获得的海带粉末分别用模拟胃液水解、模拟胃肠液水解、以及不同的蛋白酶处理，具体如下模拟胃液水解称取2g海带粉末，加入50ml模拟胃液，按照表I水解条件，在相应温度下水浴IOmin 6h,煮沸IOmin灭酶活,调节pH至7,水解物离心(12000r/min, IOmin),收集上清液。模拟胃肠液水解在模拟胃液水解之后，再加入25ml模拟肠液，在相应温度下水浴10mirT5h，煮沸IOmin灭酶活，调节pH至7，水解物离心(12000r/min，IOmin),收集上清 液。蛋白酶水解称取2g粉末加50ml水，按照表I的蛋白酶水解条件，调节pH值至相应的酶反应pH条件，加入相应的酶0. 1% (w/v)，在相应的反应温度下水浴酶解6h，加热灭活，终止反应，调节pH至7，水解物离心(12000r/min, IOmin),收集上清液。表I、蛋白酶解条件 实施例~ 模拟体液/酶温度rc)时间 模拟胃液37L86h—2模拟胃肠液 371.8+7.6 6h+6h
~碱性蛋白酶 5587T26h
~木瓜蛋白酶 5556h
5风味酶5566h
~6模拟胃液37L8IOmin
~模拟胃液37O2h
"I模拟胃液37L84h
~9模拟胃肠液 371.8+7.6 4h+10min
模拟胃肠液 371.8+7.6 4h+3h
~~Tl模拟胃肠液 371.8+7.6 4h+5h注实施例2中，模拟胃液和模拟肠液水解时间分别为6h，实施例9-11中，模拟胃液水解时间都为4小时，模拟肠液水解时间依次为10min、3h、5h。实施例12-22、裙带菜多肽水解物的制备取干裙带菜，研磨粉碎，收集，得一定量的裙带菜粉末。
按表2所示，对获得的裙带菜粉末分别用模拟胃液水解、模拟胃肠液水解、以及不同的蛋白酶处理，具体如下模拟胃液水解称取2g裙带菜粉末，加入50ml模拟胃液，按照表2水解条件，在相应温度下水浴IOmin 6h,煮沸IOmin灭酶活，调节pH至7,水解物离心(12000r/min,IOmin),收集上清液。模拟胃肠液水解在模拟胃液水解之后，再加入25ml模拟肠液，在相应温度下水浴10mirT5h，煮沸IOmin灭酶活，调节pH至7，水解物离心(12000r/min，IOmin),收集上清液。蛋白酶水解称取2g粉末加50ml水，按照表2的蛋白酶水解条件，调节pH值至相应的酶反应pH条件，加入相应的酶0. 1% (w/v)，在相应的反应温度下水浴酶解6h，加热灭活，终止反应，调节pH至7，水解物离心(12000r/min, IOmin),收集上清液。表2、蛋白酶解条件
实施例~ 模拟体液/酶温度rc)时间 模拟胃液37L86h
模拟胃肠液 371.8+7.6 6h+6h
~12碱性蛋白酶 5587T26h
木瓜蛋白酶 5556h
~16风味酶5566h
~17模拟胃液37L8IOmin
~T8模拟胃液37L82h
~T9模拟胃液37L84h
20模拟胃肠液 371.8+7.6 4h+10min
~21模拟胃肠液 371.8+7.6 4h+3h
""22模拟胃肠液 371.8+7.6 4h+5h注实施例13中，模拟胃液和模拟肠液水解时间分别为6h，实施例19-21中，模拟胃液水解时间都为4小时，模拟肠液水解时间依次为10min、3h、5h。实施例23、ACE抑制活性的测定分别取实施例1-11和12-22获得的海带及裙带菜水解后上清液，稀释5倍后，采取体外模拟测定方法对ACE抑制活性进行测定，结果分别如以下表3和表4所示表3、ACE抑制活性-I


本发明公开了一种海藻用于制备血管紧张素转化酶抑制剂的应用。优选的，所述海藻为海带和裙带菜。优选的，所述海带和裙带菜为海带和裙带菜的干品经模拟胃液、模拟胃肠液、蛋白酶水解后的产物。本发明为海藻的开发利用开辟了一条新的途径，具有一定的应用前景。