专利名称：替尼泊苷静脉注射用微乳新制剂的制作方法 替尼泊苷(teniposide，VM-26)是一种鬼臼毒素的半合成衍生物，属于植物来源的抗肿瘤药物。它是周期特异性细胞毒药物，抑制DNA拓扑异构酶II，导致双链或单链破坏使细胞有丝分裂停于S晚期或G2前期，从而阻碍肿瘤细胞分裂，抑制肿瘤生长。替尼泊苷疗效显著，其生物活性是同类型药物依托泊苷的5-10倍，且临床资料表明替尼泊苷副作用少，毒性较小，对肝、肾功能无影响。由于在临床上具有广泛的抗肿瘤活性，替尼泊苷现广泛应用于小儿急性淋巴细胞白血病、小细胞肺癌、淋巴瘤及神经母细胞瘤等临床治疗，更因其中性亲脂特性，能透过血脑屏障，目前已成为临床治疗脑瘤的首选化疗药物。1992年替尼泊苷被美国FDA正式批准用于小儿急性淋巴细胞白血病化疗，商品名为VUMON?。我国在21世纪初仿制成功，其商品名为邦莱?。替尼泊苷本身几乎不溶于水，必须溶于有机溶媒使用。如上述几种临床注射液制剂，均以乙醇等有机试剂作溶剂，同时为避免稀释后析出药物结晶，处方中加入表面活性剂聚氧乙烯蓖麻油(CremophorEL)为增溶剂。处方组成为每支安培(5ml)含替尼泊苷50mg，苯甲醇150mg，N，N-二甲基乙酰胺300mg，CremophorEL2.5mg，乙醇2.1ml。临床单独使用时按体表面积50-100mg/m2给药，用5％葡萄糖或生理盐水稀释后静滴。现有替尼泊苷制剂在临床使用过程中存在以下问题过敏反应处方中含有大量的表面活性剂CremophorEL，使用后可引起体内组胺释放，表现为严重的过敏反应。为此，医生在医嘱前必须了解病人的过敏史，如是否对替尼泊苷或者蓖麻油等过敏；在临床使用时，医务人员需密切观察病人的情况，必要时使用抗组胺药物以减轻CremophorEL造成的严重过敏反应。结果是临床上应用起来非常不方便，给病人带来很大的痛苦。近年来，国内外药学工作者致力于研究减少或替代CremophorEL使用的新的给药系统，以提高药物疗效，降低毒副作用。如用于全身给药的脂质体、环糊精包合物，供局部给药的微球制剂和凝胶制剂，供口服给药的微乳制剂等。新的给药系统均不含表面活性剂CremophorEL，因此，可避免过敏反应的发生。但目前这些新制剂多数尚处于实验室的研究阶段，作为注射给药的脂质体还存在不稳定，易泄漏，成本高，大生产难等问题。为提高替尼泊苷用药的安全性和用药的顺应性，我们对替尼泊苷的新剂型替尼泊苷静脉注射用微乳制剂进行了全面地研究。新处方所选用的辅料全部为静脉注射级，特别是处方中大幅度地降低了聚氧乙烯蓖麻油(CremophorEL)的用量，通过与其它表面活性剂合用，制成了比较稳定的乳剂，大鼠体内药动实验表明新剂型与VUMON?相比，两者AUC相差不大。在保证替尼泊苷达到药效浓度的同时，基本消除了聚氧乙烯蓖麻油带来的过敏反应，以解决目前替尼泊苷注射液存在的最大问题。自50年代乳剂输液相继问世以来，以乳剂作为载体的给药系统的研究已经有重大进展。乳剂能增加难溶性药物的溶解度和稳定性，某些药物制成乳剂注射给药可减轻其刺激性和毒副作用。近年已有含药乳剂上市，如阿斯利康公司生产的得普利麻(异丙酚静脉注射乳剂)；榄香烯静脉注射乳剂治疗化疗失败的晚期非小细胞肺癌，可使多数病人治疗后精神、体力、睡眠和食欲得到改善，生存质量提高；鸦胆子油乳剂进行前列腺体内注射加静脉滴注治疗中、晚期前列腺癌等。乳剂具有低黏度、稳定、吸收迅速等特点，并提高药物的生物利用度，降低毒副作用，临床前景广阔。乳剂有以下特点(1)作为油相的精制豆油及作为乳化剂的磷脂对人体无毒，在体内可完全生物降解和吸收；(2)大生产的技术已经解决；(3)性质稳定；(4)静注后不产生超过人体标准的渗透压。
本发明人通过精心研究，发明了一种替尼泊苷静脉注射用微乳新制剂，能显著降低现有替尼泊苷注射液中CremophorEL的用量，以减少它所带来的毒副作用，提供更安全的替尼泊苷注射剂。与现有替尼泊苷注射剂相比，两者AUC基本相等，而过敏反应毒副作用明显降低，患者顺应性明显增加。
本发明涉及将难溶性的替尼泊苷、注射用油、部分表面活性剂等溶解于有机溶剂中，制成替尼泊苷的预乳化浓缩液，临床使用时单独将预乳化浓缩液加入5％葡萄糖注射液中形成微乳的一种新的替尼泊苷静脉注射用微乳制剂，其特征是制剂中，替尼泊苷或替尼泊苷与紫杉醇、依托泊苷的混合物为0.05-5％，植物油为0.1-5％，乳化剂及助乳化剂为20-80％，有机溶剂为20-70％，上述原辅料的比例为重量百分比。所述乳化剂可以是大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、Tween60、PluronicF68、CremophorEL，或它们的混合物。所述有机溶剂是甘油、无水乙醇、丙二醇、苯甲醇、N，N-二甲基乙酰胺，或它们的混合物。所述植物油是玉米油、大豆油、芝麻油、红花油，或它们的混合物。
优选的制剂是将有效量的替尼泊苷加入到预定体积的乙醇中，向该制剂中加入所需的易溶于有机溶剂的乳化剂和注射用油，然后包装制成该预乳化浓缩液。在给药前，将预乳化浓缩液加入稀释的含乳化剂的5％葡萄糖注射液中，形成微乳。
本发明提供一种替尼泊苷注射用微乳的制备工艺，包括将替尼泊苷、注射用油、表面活性剂、助表面活性剂等溶解到有机溶剂中充分溶解，得到预乳化浓缩液，所得到的预乳化浓缩液为淡黄色油状溶液。
临床使用时，将预乳化浓缩液注入浓度为5％的葡萄糖溶液中，即可得到替尼泊苷注射用微乳制剂。该微乳制剂使用时，可采用静脉注射或静脉滴注方式给药。
为检验本发明的替尼泊苷注射用微乳制剂产品所具有的优良特征和效果，我们对该制剂做了以下一些考察1.含药量的测定采用高效液相色谱法考察了多组替尼泊苷注射用微乳制剂中的替尼泊苷的含量，结果表明微乳制剂中的替尼泊苷的含量为标示量的95％-105％，表明本发明制剂和制备方法具有良好的同一性和工业实用性。
2.稳定性试验考察了光、热(40℃、60℃)、常温(25℃)和低温(2-8℃)等因素对替尼泊苷微乳制剂稳定性的影响，结果表明替尼泊苷微乳制剂对光和热比较敏感，需要在低温(2-8℃)条件下保存，可稳定12个月。用常温加速试验(40℃、RH75％)3个月，各项指标均无明显变化。
3.生物利用度试验在生物利用度试验中，分别给予大鼠剂量为9mg/kg的替尼泊苷微乳制剂或替尼泊苷市售注射剂产品，结果表明，所研制的替尼泊苷微乳制剂的生物利用度是替尼泊苷市售注射剂产品的86％，统计检验未见明显差异，两制剂具有生物等效性。
4.急性刺激性试验实验动物健康豚鼠，雌雄各半，体重250-350g，每组8只；受试药物10％牛血清白蛋白，注射量为0.5ml，作为阳性对照；替尼泊苷注射液的空白溶剂，给药剂量为2.5mg/kg；自制乳剂的空白溶剂，剂量为2.5mg/kg；5％葡萄糖注射液，注射量0.5ml，作为阴性对照。按药理学实验讲义方法进行试验并对实验结果进行评分及判断。
实验结果阳性对照组实验动物出现严重的急性过敏性反应，如竖毛、抓鼻、咳嗽、颤抖、呼吸困难等。替尼泊苷注射液的空白溶剂组实验动物出现3级急性过敏性反应，如多次抓鼻，多次颤抖，喷嚏，竖毛，抽搐，呼吸困难，两例动物出现大小便失禁；自制乳剂空白溶剂组实验动物出现1级反应，如部分出现竖毛；葡萄糖注射液组实验动物呈阴性反应。
结论根据豚鼠过敏反应级数标准，反应级数达2级以上(包括2级)时，判定该供试品过敏反应试验呈阳性。注射剂量为2.5mg/kg的替尼泊苷注射液的空白溶剂，实验动物呈阳性反应；注射剂量为2.5mg/kg的自制微乳空白溶剂，实验动物呈阴性反应。此结果表明，由于大大减少了原制剂中CremophorEL的用量，自制微乳空白溶剂的急性刺激性明显低于替尼泊苷注射液的空白溶剂。
下面的实施例是对本发明进行进一步说明和解释，而不是对本发明进行任何限制。
实施例1处方替尼泊苷 0.24g无水乙醇 6.4g卵磷脂 4.5g大豆油 0.64gCremophorEL 6.32g5％葡萄糖溶液500ml制法将替尼泊苷0.24g溶解于6.4g的无水乙醇中，再加入卵磷脂4.5g、大豆油0.64g和CremophorEL6.32g，使它们混合均匀形成预浓缩液。将预浓缩液加入500ml浓度为5％的葡萄糖溶液中，震摇，形成微乳。
实施例2处方替尼泊苷 0.24g无水乙醇 8g卵磷脂 4g玉米油 0.8gCremophorEL 8g5％葡萄糖溶液500ml制法
将替尼泊苷0.24g、无水乙醇8g、卵磷脂4g、大豆油0.8g和CremophorEL8g混合均匀形成预浓缩液。将预浓缩液加入500ml浓度为5％的葡萄糖溶液中，震摇，形成微乳。
实施例3处方替尼泊苷0.24g卵磷脂 10g大豆油 1.1gCremophor EL6.4g无水乙醇24g5％葡萄糖溶液 500ml制法将替尼泊苷0.24g与卵磷脂10g、大豆油1.1g、Cremophor EL 6.4g和无水乙醇24g混合均匀形成预浓缩液。配制乳液时将预浓缩液注入500ml浓度为5％葡萄糖注射液中，形成微乳。
实施例4处方替尼泊苷 0.24gN，N-二甲基乙酰胺2g无水乙醇 5g卵磷脂 4g玉米油 0.8gCremophorEL 8g5％葡萄糖溶液500ml制法将替尼泊苷0.24g、N，N-二甲基乙酰胺、无水乙醇8g、卵磷脂4g、大豆油0.8g和CremophorEL8g混合均匀形成预浓缩液。将预浓缩液加入500ml浓度为5％的葡萄糖溶液中，震摇，形成微乳。
实施例5处方
替尼泊苷 0.24g紫杉醇 0.3g无水乙醇 5g卵磷脂 5g玉米油 1gCremophorEL 10g5％葡萄糖溶液500ml制法将替尼泊苷0.24g、紫杉醇0.3g、无水乙醇5g、卵磷脂5g、大豆油1g和CremophorEL10g混合均匀形成预浓缩液。将预浓缩液加入500ml浓度为5％的葡萄糖溶液中，震摇，形成微乳。
实施例6处方替尼泊苷 0.24g依托泊苷 0.3g无水乙醇 5g卵磷脂 5g玉米油 1gCremophorEL 10g5％葡萄糖溶液500ml制法将替尼泊苷0.24g、依托泊苷0.3g、无水乙醇5g、卵磷脂5g、大豆油1g、和CremophorEL10g混合均匀形成预浓缩液。将预浓缩液加入500ml浓度为5％的葡萄糖溶液中，震摇，形成微乳。
可以理解，本领域技术人员可以在本发明制剂的活性组分和辅料中分别或一起加入其他药学可接受的辅料或对各组分的比例进行微小改变而不影响药物制剂的基本性质。但是，由这些改变而得到的药物制剂及制备方法都没有脱离本发明的精神，也落在本发明的说明书和权利要求书的保护范围内。


本发明涉及一种替尼泊苷静脉注射用微乳新制剂的配方及制备，包含活性组分和辅料，其中所述活性组分为替尼泊苷，或替尼泊苷与紫杉醇、依托泊苷的混合物，辅料由植物油，乳化剂或助乳化剂，有机溶剂组成。将活性组分与辅料制备成预浓缩液，临床使用时加到浓度为5％的葡萄糖溶液中得到可供静脉注射用微乳。本发明的制剂具有使用方便，与原市售制剂生物利用度相等，且减少过敏反应毒性的特点。