Sb505124在制备治疗软骨损伤的药物中的应用的制作方法[0002]由于骨病、衰老、创伤等导致的软骨缺损常见于临床病例中，对于这些患者，软骨的缺损对其以后的正常工作生活会造成一系列的影响，严重的甚至可以导致瘫痪，以致使患者失去自理能力。目前解决软骨缺损这一问题最有效的方法是对缺损软骨进行人工代替，而临床上现有的替代材料主要是一些不可降解或可降解的生物材料，利用这些材料来修复缺损软骨都有其缺陷。例如，不可降解的材料会引起机体的排异反应，而可降解材料其降解产物又会对机体造成不良反应。1984年瑞典医学家Peterson等首次报道在兔关节软骨缺损模型中，用可吸收缝合线将自体骨膜缝合于软骨缺损周缘，然后将自体软骨细胞悬液注入缺损部位，术后16周检测证实关节软骨缺损被透明软骨修复。1987年瑞典哥德堡医疗中心Brittberg等报道采用该技术成功治疗人关节软骨缺损，这为随后深入开展的软骨组织工程推广应创造了有利条件。然而自体软骨细胞却不易获得。[0003]转化生长因子-β(Transforming growth factor β , TGF-β )是新近发现的调节细胞生长和分化的一个超家族，TGF-β超家族包括TGF-β、生长分化因子(Growth anddifferentiation factor, GDF)、Nodal、活化素(Activin)和抑制素(Inhibin)等 30 多个成员。TGF-β信号传导通路为=TGF-P在细胞表面与II型受体(TPRII)、I型受体(ΤβΚΙ，又称ALK5)形成一个双二聚体受体复合物，在这一过程中，III型受体(TiiRIII)也起到一定辅助作用。II型受体磷酸化激活I型受体，进而使得I型受体磷酸化其连接的Smad蛋白分子(Smad2/3)并释放到胞浆中，与Smad4蛋白形成复合物转移到细胞核内发挥信号作用。因此，有很多人提出利用TGF-β抑制剂来治疗和预防各种TGF-β参与的疾病。其中SB505124是一种TGF-β I型受体抑制剂。
[0004]本发明的目的在于提供一种SB505124在制备治疗软骨损伤的药物中的应用。[0005]本发明SB505124在制备治疗软骨损伤的药物中的应用。[0006]SB505124促进软骨再生的试验，具体如下:[0007]取胚胎发育14.5天的小鼠前肢的跖骨，去除骨膜，并用II型胶原酶在室温下处理2分钟,之后培养于组织培养基中，于含5 % CO2、37°C的温箱中培养。将开始培养的日期记为培养第O天。在培养第I天，将跖骨分为5组，将5组跖骨分别置于含有不同浓度SB505124的组织培养基中培养，之后每天更换一次培养基。对软骨进行照相观察，并且利用ScionImage软件分析软骨区域大小。
[0008]随着培养时间的延长，与对照组相比，经过不同计量SB505124处理的软骨组织不断增大，并且在15.0 μ M浓度培养基中最大。利用第7天的软骨面积与第I天的各组进行对比获得软骨增大率，15.0 μ M浓度SB505124处理的软骨增大294.122±5.92499，其增大率为各浓度中最多。结果表明，SB505124可以显著的提高软骨增长速率，促进软骨再生。
[0009]本发明的效果在于:用SB505124制备治疗软骨损伤的药物，促进软骨再生的效果显著。



[0010]图1为实施例1中培养第I天各组跖骨软骨区域生长状态比较图；图2为实施例1中培养第4天各组跖骨软骨区域生长状态比较图；图3为实施例1中培养第7天各组跖骨软骨区域生长状态比较图；图4为实施例1中培养第11天各组跖骨软骨区域生长状态比较图；图5为培养第7天的各组软骨与第I天的相比增大率的柱状图。

[0011]下面结合附图对本发明作进一步的详细说明。
[0012]实施例1:
[0013]SB505124促进软骨再生的试验，具体如下:
[0014]一、取胚胎发育14 .5天的小鼠前肢的跖骨，去除骨膜，并用II型胶原酶在室温下处理2分钟，之后培养于500 μ I组织培养基中，于含5% CO2、37°C的温箱中培养。将开始培养的日期记为培养第O天。所述组织培养基由500 μ I a -modified基础培养基、0.05mg/ml维生素C、0.25g/ml 二性霉素、ΙπιΜβ甘油磷酸酯和体积浓度为0.2%的胎牛血清组成。
[0015]二、在培养24h后记为培养第I天，在培养第I天，将跖骨分为5组，然后将5组跖骨分别置于含有不同浓度SB505124的组织培养基中培养，5种浓度分别为0、0.5μΜ、1.5 μ Μ、4.5 μ M和15.0 μ Μ，其中没有添加SB505124的为对照组，其他4组为实验组，之后每天更换一次培养基。
[0016]三、在培养的第1、4、7、11天分别在普通光学显微镜下对软骨进行照相观察，保证每次拍照时显微镜的放大倍数相同，然后利用Scion Image软件分析软骨区域大小。
[0017]所述a -modified基础培养基为购买自Invitrogen公司的a -modifiedessential medium without nucleosides, 二性霉素购买自 Invitrogen 公司的Fungizone,β甘油磷酸酯购买自Merck公司的β -glycerophosphate,胎牛血清购买自Gibco公司，SB505124购买自Simga公司。
[0018]结果分析:
[0019]实验组与对照组跖骨软骨区域生长状态见图1至图4所示，图1为培养的第I天各组跖骨软骨区域生长状态比较图，图2为培养的第4天各组跖骨软骨区域生长状态比较图，图3为培养的第7天各组跖骨软骨区域生长状态比较图，图4为培养的第11天各组跖骨软骨区域生长状态比较图。
[0020]由图1-4可知，在经SB505124处理第I天，实验组与对照组跖骨软骨区域大小基本相等；而培养第7天，经SB505124处理跖骨软骨普遍大于对照组，其中SB505124浓度15.0 μ M的组最为显著，培养第11天，同样也为SB505124浓度15.0 μ M的组处理的跖骨软骨区域生长最显著。
[0021]利用第7天的各组跖骨软骨区域面积与第I天的进行对比计算软骨增大率，如表1所示，经各浓度SB505124处理跖骨软骨增大率均显著高于对照组，其中经15.0 μ MSB505124处理的跖骨软骨增大率最大，为294.1222±5.92449。培养第7天的各组软骨与第I天的相比增大率的柱状图如图5所示。
[0022]结论:
[0023]本发明对SB505124的作用机制进行探究，SB505124的作用机制是阻断TGF-β信号。TGF-β 超家族大体上可分为 TGF-β/Activin/Nodal 和 BMP/⑶F/MIS(Muellerianinhibiting substance)两个亚家族,其中，TGF-β超家族信号通路的配体、配体拮抗分子、受体、信号转导分子均在软骨内成骨过程发挥各自独特的作用，参与调控软骨细胞的谱系分化、增殖、成熟、凋亡和矿化，BMP信号能起始间充质细胞向软骨细胞分化并维持软骨细胞的特性，在软骨发生过程中其主导作用。SB505124是TGF- β I型受体抑制剂，经SB505124处理前软骨细胞ATD5可以阻断细胞内源性TGF-β信号，进而抑制软骨细胞的分化、细胞外基质合成。
[0024]SB505124，作为一种能溶于水的TGF-β抑制剂，可以促进离体培养的小鼠前肢跖骨软骨再生，效果显著。可用SB505124制备治疗软骨损伤的药物。
[0025]表1
[0026]