多功能细胞洗脱罐的制作方法[0001]【技术领域】，涉及一种多功能细胞洗脱罐，该洗脱罐集细胞贴壁培养、换液、细胞消化、细胞洗涤收集、微载体排放等多功能为一体。[0003][0004]培养贴壁细胞一般是在搅拌式细胞培养罐中，用微载体悬浮培养，贴壁培养的优点是细胞紧密贴附于固相表面，可直接倾去旧培养液，清洗后直接加入新培养液，易更换培养液，因细胞固定于固相表面，不需要复杂的细胞截留系统，便于采用灌注培养，达到提高细胞的目的，对于牢固贴附在固体介质表面上生长的细胞要进行传代培养，消化是必不可少的操作步骤，消化后的细胞加入营养液制成细胞悬浮液，接种后细胞可以再次贴壁和增值。[0005]但是用普通的细胞培养罐进行消化十分困难，往往需将细胞连同微载体从培养罐中取出，放入专用的细胞洗脱罐进行消化，然后将消化下来的细胞再放入另一个大罐进行放大培养，另一方面，在普通细胞罐中换液培养也十分困难，需要将搅拌停下来，让培养罐静止下来，待微载体沉淀，再将沉淀物上面的培养液抽吸掉，再加新培养液，这样做换液不但不彻底，同时也会因细胞静止缺氧而遭到损伤。[0006]
[0007]为解决上述问题，本实用新型在搅拌式细胞培养罐下部装有可拆卸的不同滤网及排放装置，有效解决了细胞贴壁(微载体)培养，换液、消化、细胞洗涤收集、微载体排放等问题，细胞加入新培养液可直接转移去扩增。[0008]本实用新型的具体技术方案如下:[0009]多功能细胞洗脱罐，包括细胞培养罐、滤网支架和阀门，所述滤网支架中部开有阀门孔，阀门孔上安装第一阀门；滤网支架上至少还开有两组开槽，其中一组开槽上安装有过滤微载体的滤网，该滤网下面设有排液腔，排液腔底部设有排液孔，并在该排液孔上安装有第二阀门；另一组开槽上安装有过滤细胞的滤网，滤网下面设有排液腔，该排液腔底部也设有排液孔，该排液孔上安装有第三阀门。
[0010]本实新型的进一步设计在于:
[0011]所述滤网支架上的开槽为扇形槽、半圆环槽、同心圆环槽、矩形槽或多边形槽，其上的滤网形状与开槽结构相适配。
[0012]所述滤网支架上的开槽优选为二组。
[0013]所述排液腔截面呈矩形或V字形，排液孔设于矩形或V字形排液腔的底部。
[0014]在搅拌式细胞培养罐底部焊接或连接一个法兰，滤网支架与细胞培养罐底部法兰通过紧固件连为一体。
[0015]滤网支架采用不锈钢板制成，滤网与滤网支架采用焊接或通过粘合剂连接。
[0016]本实用新型相比现有技术具有如下优点:
[0017]1、本实用新型设计巧妙，集多功能于一体，换液不需要将微载体沉淀下来，再抽出上面清液，省时省力，而且采用该装置换液简单、彻底。
[0018]2、本实用新型使用时，细胞洗脱、收集不需要从罐里取出，可直接在罐中洗脱，收集细胞，可满足不同的洗脱、收集细胞的要求，可直接进行细胞转移，生产安全、可靠。
[0019]3、本实用新型解决了大规模生产贴壁细胞的瓶颈问题，可使微载体贴壁培养任意放大。
[0020]


[0021]图1为本实用新型的结构示意图。
[0022]图2为本实用新型中滤网支架和滤网的示意图。
[0023]图3为本实用新型中滤网支架的结构示意图。
[0024]图4为本实用新型的整体结构示意图。
[0025]图中:1-第二阀门；2_第二阀门；3-第一阀门；4-第一滤网；5_第二滤网；6-滤网支架；7_阀门孔；8_环形槽；9_排液腔；10_细胞培养罐。
[0026]
[0027]实施一:
[0028]本实例中，多功能细胞洗脱罐包括细胞培养罐(可采用搅拌式细胞培养罐)和阀门，细胞培养罐底部安装滤网支架，该滤网支架中部开有阀门孔，阀门孔安装第一阀门。滤网支架上还开有两组同心半圆环槽，开槽上设有滤网，该滤网下面设有排液腔，排液腔底部设有排液孔。其中一组半圆环槽上安装有过滤微载体的滤网，该滤网细胞可以通过，微载体不能通过，滤网下面有排液腔让透过滤网的液体流动，滤网下面槽底开有圆孔，用于安装第二阀门；另一组半圆环槽上安装有过滤细胞的滤网，该滤网细胞不能通过，滤网下面有排液腔让透过滤网的液体流动，滤网下面槽底开有圆孔，用于安装第三阀门。
[0029]两组同心半圆环槽下部的排液腔，其截面呈矩形，排液孔设于矩形的底部。
[0030]滤网支架采用不锈钢板制成，最外层钻有若干小孔用于与罐体下部法兰连接，亦可不钻孔，直接与罐体下部法兰焊死。
[0031]实施二:
[0032]如图1-图3所示，本实例的多功能细胞洗脱罐包括细胞培养罐10 (可采用搅拌式细胞培养罐)、滤网支架，以及各阀门。滤网支架中部开有阀门孔7，阀门孔7上安装第一阀门3。
[0033]滤网支架6上还开有两组同心环形槽，其中内圈环形槽上安装有过滤微载体的滤网(第一滤网4)，该滤网下面设有排液腔9，排液腔9底部设有排液孔，并在该排液孔上安装有第二阀门1，该滤网细胞可以通过，微载体不能通过，滤网下面有空间让透过滤网的液体流动。
[0034]外圈的环形槽8上安装有过滤细胞的滤网(第二滤网5)，滤网下面设有排液腔，该排液腔底部也设有排液孔，该排液孔上安装有第三阀门2，该滤网细胞不能通过，滤网下面有空间让透过滤网的液体流动。
[0035]两组同心环形槽下部的排液腔9，形状均为圆环形，其截面呈V字形，排液孔设于V字形的底部。
[0036]滤网支架6采用不锈钢板制成。滤网与滤网支架采用焊接方式连接。在细胞培养罐底部焊接或连接一个法兰，滤网支架与细胞培养罐底部法兰通过紧固件连为一体。
[0037]本实用新型的整体结构如图4所示。
[0038]本实用新型的使用过程如下:
[0039]细胞在培养前多功能细胞洗脱罐CIP (在位清洗)、SIP (在位灭菌)以后，第一阀门、第二阀门、第三阀门应该全部关闭，细胞贴附在微载体上培养，中途需要换液时，将细胞可以通过，微载体不能通过的第二阀门打开，培养液和悬浮在培养液中的死细胞及未贴壁细胞，经滤网及阀门排出罐外，若需要彻底更换老培养液可关闭第二阀门加PBS悬浮，然后再打开第二阀门排放PBS、最后关闭第二阀门，向罐内加新鲜培养液，重新培养。
[0040]培养完进行消化、收集细胞:
[0041 ] 培养完成以后打开第二阀门，将培养基排放干净，关闭第二阀门，PBS重悬微载体，然后停止搅拌，再次打开第二阀门，排清洗液，并关闭第二阀门，加入胰酶搅拌，消化细胞，待细胞消化下来以后，打开细胞不能通过滤网下面的第三阀门，排清消化液，关闭第三阀门，加终止消化液(或洗液)重新悬浮，进行细胞洗涤，然后打开第三阀门，排净洗液，并关闭第三阀门，加入悬浮细胞保护液或培养液，打开第二阀门进行细胞分装保存，或直接转移到下一个细胞罐继续进行扩增培养。
[0042]微载体的收集和排放:
[0043]细胞转移完成后，关闭第二阀门，加水悬浮载体，然后打开第一阀门，进行微载体的收集或排放。
[0044]最后进行多功能细胞洗脱罐的CIP和SIP，SIP完成后卸下滤网支架及阀门，用超声波再次清洗滤网及阀门，最后，重新装回细胞罐上，准备下一批的生产。
[0045]以上所述仅为本实用新型的一个【具体实施方式】，不构成对本实用新型的任何限制。凡在本实用新型的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。