专利名称：具有细胞因子拮抗剂和皮质类固醇的组合制剂的制作方法骨关节炎(A rthrose)描述的是超出年龄应有程度的〃关节磨损"。它伴随有受影响关节中的软骨缺损，由此产生疼痛和功能衰退。负荷过量、先天性或创伤引起的原因例如关节错位，或者由于骨疾病例如骨质疏松症引起的骨变形被看做是原因。它还可以导致其他疾病例如骨炎症发生或伴随有过度负载引起的渗出。原则上，所有关节都可能受骨关节炎变化影响。在德国，该疾病通常定位于膝关节。骨关节炎是普通医院事务中最经常的咨询原因。西方国家中大约10%的居民罹患骨关节炎。如果此外算上小椎骨关节炎和退行性椎间盘疾病的话，那么受影响人口甚至为大约15%-20%。骨关节炎发病的危险随着增长的年龄而增加。大约三分之二的超过65岁的人患有该疾病，然而并非所有受影响的人都遭受其症状。对于骨关节炎的治疗，已经知道几种治疗方式。保守(例如药物的)疗法和外科干预直至用假肢代替完整的关节均属于此。为了避免这样的大规模和不可逆的干预，原则上更希望有效的药物治疗，以便尽可能地拖延完全关节代替的时间点。然而，许多药物治疗也具有缺点。一方面，这是由于药物本身的副作用，但是也由于其效果部分地也只是有限提供的。用于治疗骨关节炎的常用药物物质是可的松和相关的皮质类固醇。它们全身性地但大多数情况下局部地作为注射剂在受影响的关节中施用。然而，在此情况下发现，皮质类固醇的阳性效果在仅一周后就明显地降低。这根据随机研究和临床经验从临床上得到确证。可以用于治疗骨关节炎的另一种药物是内源的蛋白质IL-I Ra或其具有相似活性的亚型(Isoform)或片段。如白介素-I (IL-I)那样，白介素_1受体拮抗剂(IL-1 Ra)与细胞表面上同样的受体结合，但在那里不触发通常由于IL-I结合所引起的信号级联。通过与IL-I-受体结合，IL-I Ra阻断了 IL-I的结合并且如此阻止了信号转导并因此阻止IL-I对靶细胞的促炎效果。用其中富集IL-I Ra且还含有其它因子的内源血清治疗患者是现有技术中已知的。如此使用的IL-I Ra也叫做Orthokin。令人惊讶的是,与此相反,与安慰剂处理相比，一种重组的IL-I Ra片段，阿那白滞素(Anakinra)，在治疗骨关节炎中不显示丝毫的效果。阿那白滞素是人白介素-I受体拮抗剂的缩短至氨基酸26-177并在末端L-甲硫氨酰化的亚型并且具有153个氨基酸的序列长度。该制备例如用重组方法通过大肠杆菌(Escherichiacoli)菌株来进行。鉴于现有技术，产生了这样的任务，即提供骨关节炎的药物治疗，其具有更好的效力，和特别是具有良好的长时效力。发明概述令人吃惊地，现在确定，在骨关节炎、骨关节炎的炎性形式和退行性脊柱疾病的情况下，可以通过额外施用细胞因子拮抗剂比如Orthokin和阿那白滞素而显著或协同地改善皮质类固醇例如可的松的效力，特别是长时效力。这特别在将治疗剂直接地局部施用于待治疗的关节时显示出来。特别地，鉴于下述事实这是非常令人惊讶的在额外施用天然IL-IRa比如Orthokin以及重组的IL-I Ra比如阿那白滞素的情况下出现上述优异效果，而单独的阿那白滞素经证实在治疗骨关节炎和退行性脊柱疾病的情况下不展示任何效果。本发明开启了使得重组的IL-I Ra适合用于治疗骨关节炎和脊柱疾病的可能性，因为其在单 独形式中并不适于治疗上述疾病。对于自身免疫性疾病比如神经性皮炎和斑秃,也发现到这些活性物质组合的相似的、令人吃惊的良好效力和高安全性，其中特别是抗炎效果发挥了作用。对于这种情况的一种可能解释是，细胞因子拮抗剂具有合成代谢效果并且可能抵消或甚至于逆转皮质类固醇的分解代谢效果。因此，在治疗例如骨关节炎中，除了细胞因子拮抗剂外，还将皮质类固醇备选地或额外地与合成代谢生长因子相组合，以取得相似甚或更佳的效果。那么，本发明还允许开发这样的皮质类固醇，其由于与细胞因子拮抗剂组合而在骨关节炎情况下不具有产生自软骨损伤增加的已知副作用。因此，在第一方面，本发明提供这样的药物组合物，其包含皮质类固醇以及细胞因子拮抗剂和任选的生长因子，其中所述细胞因子拮抗剂是天然存在的或重组的白介素-拮抗剂IL-I Ra-蛋白质，特别是Orthokin或阿那白滞素，以及其中所述药物组合物适于局部施用。同样，治疗剂也可以在两种不同的药物组合物中同时或在时间上相继地进行施用。相应地，在本发明的第二和第三方面提供，包含细胞因子拮抗剂和任选的生长因子的药物组合物，其用于与皮质类固醇一起在联合治疗中使用；以及提供包含皮质类固醇的药物组合物，其用于与细胞因子拮抗剂和任选的生长因子在联合治疗中使用。在本发明第二方面和第三方面的情况下，所述细胞因子拮抗剂是天然存在的或重组的白介素-拮抗剂IL-IRa-蛋白质，特别是Orthokin或阿那白滞素，并且所述药物组合物适用于局部施用。在本发明第四方面提供试剂盒，其包括含有细胞因子拮抗剂和任选的生长因子的药物组合物以及含有皮质类固醇的药物组合物。细胞因子拮抗剂是天然存在的或重组的白介素-拮抗剂IL-I Ra-蛋白质，特别是Orthokin或阿那白滞素，并且所述药物组合物适用于局部施用。此外，在第五方面本发明涉及细胞因子拮抗剂和任选的生长因子用于制备药物组合物的用途，所述药物组合物用于与皮质类固醇一起在联合治疗中使用，并且在第六方面本发明涉及皮质类固醇用于制备药物组合物的用途，所述药物组合物用于与细胞因子拮抗剂和任选的生长因子一起在联合治疗中使用。在本发明第五方面和第六方面的情况下，细胞因子拮抗剂是天然存在的或重组的白介素-拮抗剂IL-I Ra-蛋白质,特别是Orthokin或阿那白滞素，并且药物组合物适用于局部施用。本发明的其他实施方案在下面的详细描述中和在权利要求书中进行陈述。发明描述本发明基于令人吃惊的认识，即关节和脊柱疾病例如骨关节炎、骨关节炎的炎性形式和退行性脊柱疾病，以及在自身免疫性疾病例的情况下借助皮质类固醇的治疗，通过额外施用细胞因子拮抗剂和任选的生长因子，可以明显地得到改善。特别地，通过与皮质类固醇组合，使用重组的IL-I Ra阿那白滞素的治疗产生比皮质类固醇的单独效果高得多的效力，也即完全首次使得与皮质类固醇组合的阿那白滞素成为治疗上述疾病的有效药齐U。正是在骨关节炎的炎性过程或脊柱关节发炎或神经根发炎的情况下，在天然IL-I RaOrthokin的情况下观察到明显效力改善。因此，本发明的目的在于借助皮质类固醇以及细胞因子拮抗剂比如阿那白滞素或Orthokin和任选的生长因子进行这些疾病的联合治疗。在此，这些不同的活性物质可以同时地-以相同的制剂或以不同的制剂-或者也可以相继地进行施用。因此，根据本发明的药物组合物(其仅包含两种不同活性物质的一种)，以及根据本发明的试剂盒，可以被指定一方面用于细胞因子拮抗剂和皮质类固醇的同时施用，和另一方面用于它们的相继施用。然而，同时施用是优选的，特别是仅以一种制剂。这样，可以例如在向患者施用之前，以合适的比例混合本发明试剂盒的两种药物组合物，然后作为一种制剂进行施用。在相继施用细胞因子拮抗剂和皮质类固醇的情况下，在一周的时期内，优选地在5天、3天、I天内或在12小时内施用各种活性成分。根据本发明，细胞因子拮抗剂还可以与生长因子组合。任选地，在本发明药物组合物或本发明试剂盒中包含其它的细胞因子拮抗剂。根据本发明使用的细胞因子拮抗剂可以是这样的每种物质或每种物质混合物，其在患者的体内降低或抑制一种或多种细胞因子的至少一种，优选地基本上所有的生物学活性。在此，拮抗效果可以通过拮抗剂直接地实现或间接地实现，例如通过激活或抑制其他信号途径，其在它那方面对细胞因子的生物学活性产生影响。优选地，细胞因子的生物学活性通过阻止其与一个或多个它可以与其结合的受体的相互作用被抑制。这可以例如通过拮抗剂与相应的受体竞争性结合或通过拮抗剂与细胞因子本身结合来达到。优选地，所述细胞因子拮抗剂抑制细胞因子IL-I的效果。所述细胞因子拮抗剂可以例如是蛋白质、肽、核酸、脂质或有机化合物。所述细胞因子拮抗剂也可以由本文中所描述的两种或多种细胞因子拮抗剂的混合物组成。特别地，细胞因子拮抗剂可以是天然存在的肽或蛋白质，或也可以是重组制备的肽或蛋白质。此外，细胞因子拮抗剂可以是抗体或抗体的抗原结合片段，或者包含抗体或抗体的抗原结合片段，其可以结合所涉及的细胞因子或细胞因子受体。适合于细胞因子拮抗剂的例子为白介素拮抗剂，特别是IL-I拮抗剂例如IL-I Ra，肿瘤坏死因子(TNF)拮抗剂，特别是TNF- α -拮抗剂例如抗-TNF- α -抗体，干扰素拮抗剂，和趋化因子拮抗剂。特别优选的是天然存在的或重组的IL-I Ra蛋白，优选人IL-I Ra。IL-I Ra优选地包含下述的氨基酸序列或由其构成根据SEQ ID N0s:l、2、3、4或5的人的IL-I Ra的亚型或同源物、根据SEQ IDN0s:6或7的马的IL-I Ra的亚型，或根据SEQ ID N0:8的狗的IL-I Ra。优选地，根据本发明的药物组合物或者根据本发明的试剂盒还包含除天然存在或重组的IL-I Ra-蛋白质以外的细胞因子拮抗剂。此外，根据本发明，可以使用IL-I Ra的片段或衍生物作为细胞因子拮抗剂，只要其可以产生所希望的功能，即降低或抑制IL-I的一种或多种生物学功能。优选地，IL-I Ra的片段包含天然IL-I Ra序列的至少20个，更优选地40、60、80或100个氨基酸。优选地，该片段为IL-I Ra的天然存在的分泌型片段。在一个实施方案中，IL-I Ra包含人IL-I Ra的氨基酸26-177，优选地，根据SEQ ID NO: I的序列的氨基酸26-177。IL-I Ra的衍生物优选地与天然IL-I Ra同源，并且优选地在IL-I Ra的至少20个连续氨基酸，优选地至少40、60、80或至少100个连续氨基酸的范围内，最优选地在IL-I Ra的整个长度内，具有与天然IL-I Ra至少60%，更优选地至少70%、75%、80%、85%、90%、95%和最优选地至少98%的同源性或同一性。特别优选的是从天然生物样品例如血液分离IL-I Ra(也称为Orthokin)，以及具有人IL-I Ra的氨基酸26-177的IL-I Ra片段(也称为阿那白滞素)。Orthokin的获得尤其在专利申请WO 00/46249 Al和WO 03/080122 Al中作了描述。可以应用于本发明中的阿那白滞素以及其他IL-I拮抗剂，尤其在专利申请EP O 343 684 Al中作了描述。在从天然生物样品例如血液中获得IL-I Ra的情况下，例如在Orthokin的情况下，所获得的IL-I Ra溶液优选地也包含生长因子，其也能够导致本发明活性成分组合的令人惊讶的效果。因此，根据本发明，细胞因子拮抗剂也与一种或多种生长因子相组合地存在或者被一种或多种生长因子代替。根据本发明，所述生长因子优选地具有合成代谢效果。适合于生长因子的例子为TGF-β、IGF、BMP、HGF和VEGF。也包括这些生长因子的类似物、衍生物和片段，只要其具有所希望的效果，即特别是作为生长因子的效果。根据本发明使用的皮质类固醇可以是任何天然存在的以及合成制备的皮质类固醇。特别地，它可以是糖皮质激素、盐皮质激素或雄激素，其中优选地使用糖皮质激素。同样地，也可以使用由如本文中所描述的两种或多种皮质类固醇所组成的混合物。适合于糖皮质激素的例子为可的松、氢化可的松、泼尼松、泼尼松龙、氯泼尼醇、地夫可特、氟可丁、曲安西龙、地塞米松、甲基泼尼松龙、氟泼尼松龙、氯可托龙、氯倍他松、阿氯米松、氟米松、氟泼尼定、氟氢缩松、倍他米松、倍氯米松、氟可龙、莫米松、氟替卡松、齒米松、氟轻松(Fluocinolon)、二氟拉松、去轻米松、氟西奈德、安西奈德、哈西奈德、二氟可龙、氯倍他索和帕拉米松。适用于盐皮质激素的例子为醛固酮、去氧皮质酮和氟氢可的松，和适合于雄激素的例子为脱氢表雄酮(DHEA)和雌激素。皮质类固醇可以以自由的化合物或以盐、酯或前药的形式来使用。在优选的实施方案中，所使用的皮质类固醇为曲安西龙、可的松、氢化可的松、泼尼松龙或泼尼松。在优选的实施方案中，根据本发明的药物组合物或根据本发明的试剂盒指定用于关节疾病例如骨关节炎、关节炎、关节发炎以及炎性软骨缺损、肌腱损伤、退行性脊柱疾病以及自身免疫性疾病的治疗。待治疗的骨关节炎可以由于过量负荷而产生，具有先天性或创伤性原因或者是其他疾病例如炎症的结果。待治疗的骨关节炎优选地是发作中的骨关节炎或炎性骨关节炎。根据本发明的药物组合物可以用于每个任何关节例如膝关节、髋关节、踝关节、肩根据、脊柱关节、指关节、肘关节、趾关节、颌关节、腕关节处的骨关节炎和关节炎的治疗。待治疗的关节炎可以是感染引起的关节炎例如细菌性关节炎或非感染引起的关节炎例如类风湿性关节炎、牛皮癣关节炎或痛风性关节炎。备选地，根据本发明的药物组合物和/或根据本发明的试剂盒也指定用于与所提及的一种或多种疾病(例如类风湿性关节炎)不同的疾病的治疗。待治疗的退行性脊柱疾病可以例如是椎间盘突出。自身免疫性疾病尤其包括关节的自身免疫疾病例如白赫铁列夫症(Morbus Bechterew)、类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮，以及其他自身免疫性疾病例如特别是神经性皮炎和斑秃(环形脱 发)。根据本发明的药物组合物或根据本发明的试剂盒优选指定用于局部施用。因此，在优选的实施方案中，指定它们用于注射，特别地用于注射入待治疗的身体区域，特别是注射入受影响的关节，注射入受影响的神经根处或受影响的椎间盘中，或其局部环境中。因此，指定所述药物组合物特别地用于关节内和/或根周注射。备选地，可以将根据本发明的药物组合物特别配制为霜剂或凝胶剂用于局部施用，或配制为片剂、胶囊剂或锭剂的形式用于全身施用。因此施用方式尤其取决于待治疗的疾病。因此，在局部骨关节炎或退行性脊柱疾病的情况下，根据本发明的药物组合物的局部施用是优选的。在优选的实施方案中，根据本发明的药物组合物或根据本发明的试剂盒仅指定用于或适合干与全身施用不同的施用。总是以专业人员已知的方式，为不同的施用途径适当地配制根据本发明的药物组合物。因此，适合于注射的药物组合物优选地作为溶液或分散体存在，或者甚至作为干燥的形式例如粉剂或冻干物存在，其在注射之前，必须溶解在合适的溶剂例如水中。根据本发明的药物组合物包含治疗有效量的细胞因子拮抗剂和/或皮质类固醇。在此，细胞因子拮抗剂优选地以O. 5-150mg/剂的浓度存在于包含细胞因子拮抗剂的药物组合物中，但是也可以以非常小的浓度例如Ing/剂或更多，例如I-IOOOng/剂存在。小的剂浓度可以特别地在与生长因子组合的情况下使用和/或在天然IL-I Ra制备物例如具有Orthokin的组合物的情况下使用。高的剂浓度例如在重组制备的细胞因子拮抗剂例如阿那白滞素的情况下是优选的。所述皮质类固醇优选地以l_80mg/剂,更优选地5-40mg/剂的浓度存在于包含皮质类固醇的药物组合物中。此外，根据本发明的药物组合物还可以包含一种或多种载体物质和/或ー种或多种赋形剂。也可以指定本发明的药物组合物用于这样的患者的治疗，其已经经历了相关疾病，即例如骨关节炎、关节炎和/或退行性脊柱疾病的其他治疗，特别是如果该其他治疗没有成效或者尽管治疗开头有成效但疾病症状至少部分复发。在优选的实施方案中，该其他治疗是用细胞因子拮抗剂比如阿那白滞素说Orthokin、但不用皮质类固醇的治疗；或者是用皮质类固醇，特别是例如上面所描述的皮质类固醇，但不用细胞因子拮抗剂的治疗。在根据本发明的范围内，患者可以是患有本文中所描述疾病的人或动物。因此，根据本发明的药物组合物可以适合于人和/或动物，例如狗、猫、马、牛、猪、山羊、骆驼等的治疗。在本发明的又ー实施方式中，根据本发明的药物组合物指定用于与外来体一起在联合治疗中使用。外来体是小的、由脂质膜包围起来的囊泡，其发现于例如人体的细胞外空间。它们通过从细胞质膜分离而从细胞形成和分泌。通常，这些外来体也包含蛋白质，它们从其来源细胞接收这些蛋白质。外来体可以直接包含在本发明的药物组合物中或者在分离的组合物中同时或相继施用。优选地，外来体从血液样品中获得，其中外来体根据待治疗的患者优选是自体的或外源的。用于获得和施用外来体的方法例如描述于专利申请WO 2006/007529 A2中。因此，预计这样的优选实施方式，其中本发明药物组合物指定用于这样的治疗，在所述治疗中首先自患者血液样品获得外来体，井随后将其与细胞因子拮抗剂和皮质类固醇再施用于该患者。对于联合治疗牵涉得自患者血液样品的外来体的情況，在某些情况下优选进行至少100 OOOg的离心步骤以浓缩所述外来体，原因是这种高相对离心速度非常适用于外来体的离心。这对本发明的第一、第二、第三、第四、第五和/或第六方面是通用的(包含皮质类固醇和细胞因子拮抗剂的药物组合物；包含细胞因子拮抗剂的药物组合物，用干与皮质类固醇一起在联合治疗中使用；包含皮质类固醇的药物组合物，用干与细胞因子拮抗剂ー起在联合治疗中使用；细胞因子拮抗剂或皮质类固醇的试剂盒和/或用途)。优选地，在其中治疗升高浓度的外来体有意义的疾病的情况下进行上述离心步骤，优选在治疗类风湿性关节炎的情况下。特别优选地，这样的离心步骤通常针对这样的情况进行，即联合治疗涉及从患者的血液样品获得的外来体。该使用至少100 OOOg的离心步骤优选地进行至少30分钟，特别地，至少60分钟，这是因为此后浓缩就是特别有效的。实施例下面描述了具有晩期骨关节炎的患者的各种不同的病理研究。用细胞因子拮抗剂(例如，重组IL-I Ra或从自体血液样品获得的IL-I Ra)和皮质类固醇对其进行治疗。缩写 re 右边Ii 左边bds 双侧IRO内旋转ARO外旋转VAS痛觉的视觉模拟评分(O至10)WOMAC对骨关节炎的患者调查表CRP C-反应蛋白，在血液中可检测到的炎症标志物OSG髋骨关节I.阿那白滞素和可的松的局部施用病例I A.，69 岁诊断右侧髋关节炎，X线照相为III-IV级；髋部疼痛伴随跛行约3年，患者不希望进行髋骨替换；临床保护性跛行，IR0/AR0右侧髋部5/0/5，还发现包柔氏螺旋体病；治疗姆周5x注射Img阿那白滞素并施用IOmg曲安西龙。结果治疗末期(在接受第5次治疗之后)保护性跛行消失。IR0/AR0右侧目前为10/0/15 ；VAS从8改善为3 ；70%疼痛减少(患者个人相对治疗前疼痛(100%)评价当前疼痛(30%)，疼痛减少表示为当前疼痛与治疗前疼痛的差异(100%-30%=70%))。在3个月的复查中相对治疗末期的改善状态没有改变。病例II :R.，54岁，女性诊断临床和发射学，中度右腕关节炎，強烈疼痛(VAS 6)，具有抓握物品的功能障碍。以往的可的松注射没有效果。治疗对右手拇指鞍状关节进行5次O. 5mg阿那白滞素与Img曲安西龙(在第I次、第3次和第5次治疗)组合的注射治疗。结果在治疗末期不再疼痛，100%改善；VAS为O ;右手功能恢复正常；治疗之后3个月的复查中仍保持为改变的良好效果。病例III :W.，49 岁，男性诊断临床和放射学，多年来的中度双侧膝关节炎，II-III级。以往的膝关节透明质酸注射和可的松注射没有效果。治疗进行6次阿那白滞素治疗，在第1、3和5次治疗使用IOmg曲安西龙。结果在治疗末期右膝100%疼痛改善，左膝70%疼痛改善。病例IV :T.，45岁，男性，音乐家诊断放射学和临床，2年的右侧肩撞击综合征；以往的可的松注射没有效果；夕卜展受限约15度。治疗进行50mg阿那白滞素和IOmg曲安西龙的注射，并进行复查。阿那白滞素和IOmg曲安西龙的注射剂在注射器中混合并抽取。结果在治疗一周以后的后续复查中完全不再疼痛(改善100%)，功能正常。由于良好的治疗效果不再安排继续治疗。后续复查未发现病况。病例V :Κ·，45岁，男性诊断临床和放射学，多年的右膝内侧和髌后关节炎，IV级；外部推荐尝试移位截骨术或右膝替换。然而，患者希望进行保守疗法尝试。以往注射透明质酸和可的松(曲安西龙)没有临床效果。治疗每周进行10次阿那白滞素治疗(IOOmg/治疗)，平行施用IOmg曲安西龙(治疗总剂量50mg)2次。结果3个月后治疗末期65%疼痛减少。病例VI :Μ·，50岁，男性诊断临床和发射学(MRT)，右膝内侧半月板伤，III级，右膝内侧明显的功能损伤和疼痛。推荐手术，患者希望非手术替代手段。治疗进行一次注射IOmg曲安西龙和Img阿那白滞素。结果注射后I个月80%疼痛改善，由于帮助很大，患者不再希望手术，而是希望继续注射。在治疗之后6个月的后续复查中患者依然不希望手术，并且不再疼痛。病例VII :G.，42 岁，男性诊断临床和放射学，多年来的下关节面炎症，还发现憩室。在下关节面用可的松注射进行静态治疗没有效果。治疗进行6次治疗，每周2次，在下关节面注射6mg阿那白滞素。在首次注射情况下，施用额外的3mg曲安西龙，而在后续2-6次治疗仅施用6mg阿那白滞素。结果60%疼痛改善，VAS从治疗前的7改善至治疗后的3。5个月后复查没有改变。表I :采用阿那白滞素和可的松的治疗。对一系列情况的统计评价。之前的疼痛水平之后的疼痛水平~ ~10030 ~100O ~10030


本发明涉及与细胞因子拮抗剂和皮质类固醇一起用于联合治疗的药物组合物。通过该联合治疗可以治疗疾病例如骨关节炎、肌腱损伤和/或退行性脊柱疾病。