龙血竭复方及其在制备治疗愈创药物中的应用的制作方法【技术领域】，具体地，涉及龙血竭或血竭为主要成分的药物复方制剂，制备该复方制剂的方法及其在制备治疗愈创或组织修复的药物中的应用。[0002]血竭性温、平，味甘、咸，无毒，入血分，归肺、脾、肾三经，具有活血化瘀、收敛止血、软坚散结、生肌敛疮等显著功效，常用于内外诸科，如:跌打损伤、瘀血、出血、痈疽溃疡、疮面久不愈合等病症，是许多古方和经验方的重要组成药材，被喻为“活血之圣药”提示血竭具有创伤修复作用。我国最早使用的药用血竭“出自西域”，其基源植物是产于西亚和北非的龙舌兰科植物龙血树(Dracaena draco)。明清以来，印度尼西亚和马来西亚棕榈科黄藤属植物麒麟竭(Daemonorops dracoBL.)所产红色树脂成为我国药用血竭的主要来源，即《中华人民共和国药典》2010版收载的“血竭”(the resin from Daemonorops draco, RDD,本文称麒麟竭)。上世纪七十年代，著名植物学家蔡希陶教授在云南省发现能够分泌出红色树脂的龙舌兰科龙血树属植物剑叶龙血树(Dracaena cochinchinensis Lour.S.C.Chen),成功开发了国产血竭，于1999年列入部颁《国家药品标准》(WS3-082(Z-016)-99(Z))，命名为龙血竭(the resin from Dracaena cochinchinensis, RDC),从而为名贵中药血竭的国产化开辟了途径。然而，国产龙血竭(RDC)和进口麒麟竭(RDD，即血竭)植物科属不同，化学成分有显著差异。目前龙血竭和麒麟竭(即:血竭)都在临床上用于活血化瘀、生肌敛疮，但两种血竭在愈创领域药用效果方面缺乏基础研究，龙血竭是否能够替代麒麟竭用于愈创方面也未见报道。对于血竭的化学成分研究，从不同基源植物得到的结果不尽相同。血竭化学成分的复杂性使得其活性成分的确定尤为困难。目前以单体形式被确认为愈创活性成分的只有从大戟科巴豆属植物Croton salutaris, C.1echleri所产生血竭中分离到的生物碱taspine。国内学者对龙血竭的化学研究认为其主要成分是黄酮类和酚类，进口麒麟竭主要含有多酚性成分和萜类成分，但两者皆不含taspine。血竭的现代药理学研究一直集中在它对血液系统的作用上。动物实验表明，血竭能降低红细胞压积、全血粘度及血浆粘度，能抑制血小板聚集,扩张血管,提高微循环血流量,体现活血作用；同时可缩短凝血时间、血浆复钙时间及优球蛋白溶解时间，并具有抗肝素作用，可用于止血。血竭的活血-止血双向调节机制解释了它对冠心病、脑缺血、子宫异常出血等与凝血-溶血平衡破坏有关疾病的治疗作用。Tao Yi等比较了龙血竭和麒麟竭的体内、体外抗血小板聚集作用，结果显示两者皆有显著抗凝作用，麒麟竭效果略优。血竭的另一项显著药效——敛疮生肌——也在大量的临床实践中得以证实。长期以来，血竭在外科及皮肤科被广泛应用于软组织挫伤、褥疮、压疮、糖尿病足溃疡、静脉曲张性下肢溃疡以及口腔溃疡的治疗，取得了良好的效果。这证实临床上龙血竭、血竭除具有止血-活血双向调节作用外，还具有促进创伤愈合的作用。[0003]目前国内外对创伤愈合的基础研究表明，创伤愈合分为三个阶段:炎症、组织形成以及组织重塑。三个阶段交迭进行，每个阶段均有特定的细胞因子和化学因子参与，通过对各阶段因子的调控作用，药物可以加速创伤愈合过程并减少疤痕组织生成。[0004]龙血竭在临床应用中较为普遍，市场上常见的以口服剂型为主。它主要的剂型为胶囊和分散片等，主要药理作用为活血化瘀。但是口服制剂具有药效发挥时间较缓慢对胃肠道具有刺激性，肝脏首过效应等，现在临床上治疗创伤或者褥疮等常使用龙血竭干粉和其他药物相配合或者是使用龙血竭的软膏剂的方法。迄今，现有技术中未见有以龙血竭、血竭为主方组成中药复方用于制备治疗愈创或组织修复的药物中的应用的报道。
[0005]为了克服现有技术存在的上述不足之处，本发明的目的在于针对患者对服药依从性差，使药物对于创伤患者能够快发挥药效，将龙血竭、血竭做成凝胶剂、涂膜剂、巴布剂、创口贴剂、透皮制剂(如贴剂)等外用制剂，既减少药物的毒副作用又能够通过局部发挥全身作用。[0006]为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案:[0007]一种龙血竭/血竭复方，其组成为重量份的龙血竭:冰片9:1或血竭:冰片9:1。
[0008]一种龙血竭复方，其组成为重量份的龙血竭:黄连素:冰片9:4:1或龙血竭:黄连素:冰片1:1:0.15。
[0009]一种血竭复方，其组成为重量份的血竭:黄连素:冰片9:4:1或血竭:黄连素:冰片 1:1:0.15。
[0010]用上述的复方作为凝胶剂、涂膜剂、巴布剂、创口贴、透皮制剂、贴剂。
[0011 ] 本发明还提供了上述的复方在制备治疗愈创、组织修复药物中的应用。
[0012]所述的应用中，其中所述的药物为治疗创面伤口、瘀血伤口、化脓伤口、皮炎、青春痘、脉管炎、静脉曲张的药物。
[0013]本发明同时提供了一种凝胶剂，取本发明的上述复方，其复方药物重量为0.15g，用2.5mL丙二醇的混匀，加入卡波姆9.85g，用三乙醇胺调节，pH值为7.0，所得凝胶剂具有制剂要求的光泽度、涂展性、均匀性和离心性。
[0014]和，一种涂膜剂，取本发明的上述复方，称取该复方药物0.2g，少量多次溶于丙二醇1.0g中，使其充分溶解作为A相；取4%聚乙烯醇8.0g,加入羧甲基纤维素钠0.2g和聚乙烯吡咯烷酮0.5g，水浴70°C -80°C，使辅料充分溶胀溶解作为B相；将B相加入到A相中搅拌均匀混合，最后加入表面活性剂吐温-80来保持涂膜剂的稳定性，将涂膜剂均匀涂抹在涂有液体石蜡的玻璃板上，在烘箱内37°C烘干，所得涂膜剂的外观具有均匀性、涂展性、流动性及膜柔韧性。
[0015]以及，一种巴布剂，取适量卡波姆用44:56的丙二醇-水混合溶剂，溶胀后得到20g3%卡波姆，在其中加入50g2%酒石酸水溶液，充分混匀，备用；取本发明的上述复方药物6g，用15g丙二醇:95%乙醇3:12的混合溶剂，50°C水浴溶解，备用；取聚丙烯酸钠4g、CMC-Na2g、氢氧化铝0.3g、EDTA0.5g加入烧杯中，加入22g甘油调匀，备用；将溶解后药物加入聚丙烯酸钠-甘油等混合相，充分混匀后，将卡波姆-酒石酸迅速加入其中，迅速搅拌均匀，防治局部结块，再继续搅拌60分钟，待膏体变软，颗粒感消失时进行涂布，室温放置3天后即得。
[0016]本发明涉及龙血竭(或血竭)复方制剂,其组成为龙血竭(或血竭):冰片9: 1、龙血竭(或血竭):黄连素:冰片9:4: 1、龙血竭(或血竭):黄连素:冰片1:1:0.15。该复方在制备愈创或组织修复药物中的应用，在治疗创面伤口、瘀血伤口、化脓伤口、皮炎、青春痘、脉管炎等愈创和组织修复药物中的应用。所述复方与药用赋形剂或辅料组成药物，其制剂形式为:凝胶剂、涂膜剂、巴布剂、创口贴、透皮制剂(如贴剂)等外用制剂。本发明研究表明:该龙血竭(血竭)复方制剂能促进小鼠、大鼠、兔背部皮肤缺损创伤的愈合。脱痂时间、愈合时间分别明显缩短，显示龙血竭具有促进伤口愈合、加快伤口结痂、脱痂作用；实验中还观察到龙血竭组疤痕组织较少，创伤处毛发生长恢复良好。



[0017]图1为阴性对照品色谱图；
[0018]图2为复方龙血竭(龙血竭:黄连素:冰片9:4:1)凝胶剂HPLC色谱图；
[0019]图3为龙血素A,龙血素BHPLC标准品色谱图；
[0020]图4为龙血素A标准曲线；
[0021]图5为龙 血素B标准曲线；
[0022]图6为龙血素A释放度曲线图；
[0023]图7为龙血素B释放度曲线图；
[0024]图8为大鼠创面表面渗出情况以及在给药后创面红肿、感染、创缘新生表皮增生情况。8A为龙血竭低剂量组,8B为龙血竭高剂量组,8C为血竭低剂量组,8D为血竭高剂量组，8E为空白基质 组，8F为美加丝组，8G为京万红组，8H为纯空白组。

[0025]下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。
[0026]实施例1
[0027]一、复方龙血竭/血竭组方的确定:
[0028]复方龙血竭在小鼠创伤试验模型中表现出一定促进结痂、脱痂愈合的治疗作用，与龙血竭本身具有祛腐生肌促进创面愈合的药理作用相吻合。黄连在本处方中具有泻火解毒、清热润燥的功效，能使创口感染率降低，减少创伤初期局部渗出是复方龙血竭处方治疗作用之一。因为在开放性创口中由于皮肤表面的保护层被破坏，细菌容易侵入使得伤口处容易造成感染，所以在创面保持不被感染的情况下同时对伤口具有收敛作用减小创伤面积。冰片具有清凉、减少疼痛作用。选三种药物组成复方龙血竭药物I组(龙血竭或血竭:黄连素:冰片1:1:0.15)、复方龙血竭药物2组(龙血竭或血竭:黄连素:冰片9:4:1)，确定二者对组织修复的效果。
[0029]选用40只昆明种小鼠，由昆明医科大学实验动物学部提供，体重在22~25g，自由饮水与摄食，随机分为4组，每组10只小白鼠，腹腔注射戊巴比妥钠40mg/Kg麻醉，背部去毛，70%酒精常规消毒，铺无菌巾，在背部切取直径为1.2cm大小的皮肤，深及筋膜肌肉，4组分别给予不同处理:阳性对照组、空白组、复方龙血竭I组和复方龙血竭2组。阳性对照组涂克林霉素利多卡因凝胶剂，空白组外涂凝胶剂基质，药物组分别外涂复方龙血竭药物I组、复方龙血竭药物2组。所有创面均直接用药棉进行涂抹，厚度约为1mm，每次均应将药物完全覆盖创面，每组为I笼。创面每天、涂药2次，分别于术后I天、3天、6天、9天、12天对每组的小白鼠进行创伤面积的数码采用数码照相的方法记录用药后3、6、9、12天的伤口面积，使用图像软件分析创面面积。将用药前的创伤面积减去用药后的创伤面积比用药前的创伤面积，得到的比例为创面皮肤愈合百分率，并计算开始脱痂天数和愈合天数，作为一次结果评价受试药物的作用。末次用药后次日监测大鼠血像，然后脱颈处死，剪取创伤部位皮肤，固定于10%甲醛溶液中，石蜡包埋切片，HE染色，显微镜下观察比较各组大鼠烫伤皮肤的表皮修复、真皮胶原纤维束修复、真皮毛囊增生、真皮及皮下组织炎症细胞浸润的愈合程度。
[0030]所有动物术后全身情况良好，无腹泻、拒食等不良反应，术后第二天麻醉药解除后精神正常、饮食正常，造模后所有创面均有出血、组织液有渗出和周围组织水肿。术后立即涂药，第2天创面伤口处无血流流出，皮肤创伤口发干变硬，精神和饮食正常。在第5天左右创伤口开始有较厚的痂皮覆盖在伤口处，无创面周围组织水肿明显减轻，分泌物较少。第12天后创面开始脱痂，伤口处为新生皮肤，毛发随之增长，但是仍有未被覆盖的皮肤。
[0031]其中阳性对照药、空白组、药物I组、药物2组分别对结痂时间、脱痂时间和愈合率愈合时间进行组间比较，结果见表1和表2。
[0032]表1实验创伤面积减少率