一种抗白血病药物制作方法

曹进, 赵燕, 刘箭卫

2002年11月6日

2001年4月2日

2001年4月2日

中南大学

A61P35/00GK1377644SQ0110698

白血病 药物

1.一种抗白血病药物，其特征在于本发明以茶叶中儿茶素单体-表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)为原料，按常规制剂工艺，制备成浓度范围为50-500μg/ml的制剂，可以是口服药，也可以是注射剂2.根据权利要求1所述的药物，其特征在于更优选的浓度范围为250-500μg/ml

本发明涉及一种抗白血病药物，特别是采用表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)为主要原料的抗白血病药物白血病的发病除遗传因素之外，还与环境因素密切相关我国每年新增白血病人4-5万，白血病复发病人15万以上在急性早幼粒白血病治疗方面，目前多采用全反式维甲酸(ATRA)作为分化诱导剂，可使大多数患者病情缓解但维甲酸耐药及维甲酸综合症可导致患者短期复发，再使用ATRA治疗则因耐药产生而达不到治疗效果骨髓移植是治疗慢性粒细胞白血病较理想的方法之一，但供体困难，加之异基因或自体移植都需经预处理杀灭恶性增殖的克隆后，才能植入新的干/祖细胞，临床上较多应用的干扰素疗法其疗效也不甚满意1992年以来，我国学者将三氧化二砷(As2O3)用于治疗急、慢性，耐药性白血病临床，获得了很好的疗效，在国际上引起很大反响进一步的基础研究表明，As2O3抗白血病的机制是，可显著诱导白血病细胞的凋亡然而As2O3为重金属化合物，有极强细胞毒效应，在体内易蓄积且不易代谢，接受治疗的病人存在强烈的毒性反应本发明的目的是提供一种抗白血病的作用、机制一致，但无蓄积、无毒性反应的抗白血病药物本发明以茶叶中儿茶素单体-表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)为原料，按常规制剂工艺，制备成浓度范围为50-500μg/ml的制剂，可以是口服药，也可以是注射剂更优选范围为250-500μg/mlEGCG是茶中儿茶素最主要的一个单体，具有极强的供氢能力，其分子结构式如下 本发明为适合于治疗白血病人的临床药物剂型，特别是注射剂，用以治疗急性早幼粒白血病，慢性粒细胞白血病，维甲酸耐药早幼粒细胞白血病本发明可以是口服药，也可以是注射剂本发明是一种白血病基因调控剂，具有显著抑制急性早幼粒白血病细胞HL-60的生长，并可诱导其凋亡的作用，且无积蓄、无任何毒副作用，具有高效、低毒的抗急性、慢性、耐药性的特点，是一种理想的白血病治疗药物实施例1.EGCG对白血病细胞生长影响的实验将人急性早幼粒白血病NK4细胞，人急性早幼粒白血病HL-60细胞，慢性粒细胞白血病K562细胞，维甲酸耐药早幼粒白血病MR-2细胞分别接种于RPMI-1640培养液中，于37℃含5％CO2的培养箱内培养传代，接种于96孔培养板，接种时加不同浓度EGCG，每浓度平行4孔，48小时后MTT还原反应测定肿瘤生长抑制率，结果见表1表1 不同浓度EGCG对白血病细胞生长的影响(x±s) 从表1结果看到，EGCG对各种白血病细胞的生长都有较强的抑制作用，而且呈明显的剂量-效应关系，即随EGCG浓度的提高，对白血病细胞生长的抑制作用也逐步增强细胞凋亡是当前肿瘤学研究的一个热点，尤其在筛选抗肿瘤的药物时被广泛运用细胞凋亡有着独特的生化和形态学特征，通过对被EGCG作用后的各种白血病细胞的死亡形式进行了观察，结果如下被250-500μg/ml浓度间EGCG作用后各种白血病细胞均出现细胞凋亡所特有的形态学特征核皱折，染色质凝集，裂解成碎片后形成由膜包绕的凋亡小体被250-500μg/ml浓度间EGCG作用后各种白血病细胞，在以核小体间DNA降解为标志的凝胶电泳观察中，均可见典型的DNA条带，证实EGCG的诱导癌细胞凋亡作用流式细胞术是一种先进、精确的定量检测凋亡细胞的方法实验观察表明，EGCG在250-500μg/ml浓度范围内，诱导人急性早幼粒白血病NK4细胞，人急性早幼粒白血病HL-60细胞，慢性粒细胞白血病K562细胞，维甲酸耐药早幼粒白血病MR-2细胞凋亡率分别达到71.85％、75.63％、81.22％、69.12％结果还表明，EGCG对癌细胞分化阻断作用主要发生在细胞分化早期