青蒿素在制备防治神经性疾病药物中的应用的制作方法[0002]青蒿素(artemisinin)是从菊科植物艾属黄花蒿中提取的一种化合物，已被广泛用于各型疟疾的治疗，青蒿素对疟原虫的杀灭作用主要作用于红细胞内期，对于红细胞外期以及红细胞前期则效果很弱。除了具有突出的抗疟作用外，青蒿素还有显著的抗菌、抗病毒作用，其抗菌谱包括表皮葡萄球菌、卡他球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌，同时对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌、结核杆菌等也有一定的抑制作用。青蒿中提取得到的谷留醇和豆甾醇亦有抗病毒作用。另，青蒿素还具有免疫调节作用，对体液免疫有明显的抑制作用，对细胞免疫则有一定的促进作用。青蒿素类物资在临床应用时，毒性较低，使用安全，一般无明显不良反应。关于青蒿素在中枢神经系统疾病的作用，目前的研究还很少，有研究显示二氢青蒿素对体外培养的小鼠神经母细胞瘤N2a的细胞增殖有一定的抑制作用，提示青蒿素对中枢神经系统的肿瘤可能有一定的抑制作用。有关青蒿素对神经细胞的保护作用及其作为神经保护剂治疗神经退行性疾病及视神经病变还未见有报道。[0003]NO是一种较小的生物活性分子，在较低浓度下，能参与脑内许多生理功能的调节，尽管其化学结构简单，却能以相对特异的方式控制神经元的功能或生理功能；而在较高浓度下，NO对人皮层神经元和神经细胞具有毒性作用。作为外源性NO供体，硝普钠(SNP)制备的神经元损伤模型是相关实验研究的理想体外实验模型。[0004]当代医学的进步延长了人类的生命，而由此导致老年急慢性神经性疾病的上升，例如阿耳茨海默氏症、中风、帕金森症等。这些神经性疾病以疾病进程中特定神经元变性的不断发展为特征。由于成熟神经元细胞在其死亡后不能再生，在上述神经性疾病中神经元的死亡可能导致大脑基本功能(包括识别、感觉和行动功能)的不能治愈的损伤以及由此产生的经济和社会的过重负担。[0005]氧化应激(oxidativestress)和细胞凋亡(apoptosis)被认为是神经元死亡的主要途径，氧化应激(oxidativestress)和多种神经性疾病(如各种神经退行性疾病及神经性眼病)有关。[0006]目前，对青蒿素类药物对神经细胞的作用了解不多，同时，青蒿素在神经细胞的氧化应激和细胞凋亡中是否具有保护作用仍不清楚。
[0007]为了解决上述问题，本发明以大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12神经细胞株、视网膜神经细胞株RGC-5和原代皮质神经元为代表，作为实验对象，以硝普钠(SNP)、双氧水(H2O2)来摸拟诱导神经细胞的氧化应激和细胞凋亡，发现青蒿素及其衍生物在硝普钠、双氧水诱导的相应细胞损伤中具有保护作用，并初步探讨了青蒿素及其衍生物保护作用的机制，说明青蒿素及其衍生物可作为神经保护药用于预防和治疗各种神经性疾病，如各种神经退行性疾病、急慢性神经变性疾病、神经性眼病等，这些主要与氧化应激损伤、细胞凋亡有关的神经性疾病。
[0008]本发明的目的在于提供青蒿素及其衍生物在制备防治神经性疾病药物中的应用。
[0009]本发明所采取的技术方案是:
青蒿素及其衍生物在制备防治神经性疾病药物中的应用。
[0010]进一步的，上述的神经性疾病包括急慢性神经变性疾病、神经性眼科疾病。
[0011]进一步的，上述的神经性疾病为与氧化应激损伤相关的神经性疾病。
[0012]进一步的，上述的青蒿素衍生物为以青蒿素为母核的化合物或其药物可接受的盐。
[0013]进一步的，上述的以青蒿素为母核的化合物选自青蒿素甲醚、青蒿琥酯、二氢青蒿素、去氧青蒿素。
[0014]本发明的有益效果是:
O本发明证明了青蒿素及其衍生物在SNP、H2O2引发的神经细胞损伤中具有一定的保护作用，且初步探索了青蒿素及其衍生物的作用机制，其可能是通过激活或者部分激活MAPK/Erk信号通路来实现在SNP损伤神经细胞中的保护作用，由于青蒿素类药物已经用于临床，研究这些药物的神经保护作用，对于寻找其可能靶点、新的药理作用，对该类药物的安全使用具有重要的意 义。
[0015]2)本发明说明了青蒿素及其衍生物可作为神经保护药用于预防和治疗各种神经性疾病，如各种神经退行性疾病、急慢性神经变性疾病、神经性眼病等，为神经性疾病的治疗和预防带来了新方向。



[0016]图1为PC12细胞在不同浓度的SNP处理的细胞活力情况，#表示Ρ〈0.05，##Ρ〈0.01 ；
图2为不同浓度的青蒿素在SNP损伤PC12细胞中的保护作用，#表示尸<0.05,##表示 7X0.01 ；
图3为Hochest染色检测青蒿素在SNP诱发PC12细胞凋亡中的保护作用；
图4是对图3中细胞凋亡数目的统计分析，#/Χ0.01，##表示/X0.01 ；
图5为在抑制剂PD98059存在下青蒿素在SNP损伤PC12细胞中的保护情况，A为青蒿素，LY 为 LY294002, PD 为 PD98059, 林/X0.01, ## 表示/X0.01 ；
图6为青蒿素可能通过MAPK/Erk信号通路在SNP损伤PC12细胞中的起保护作用；
图7为SNP对RGC-5细胞的损伤作用，*/X0.01 ；
图8为不同浓度的青蒿素在SNP损伤RGC-5细胞中的保护作用(**表示P〈0.01)；
图9为青蒿素对SNP诱导的RGC-5细胞凋亡的保护作用，A为Hoechst染色实验，B是对A中各组细胞中凋亡比例的统计分析，ART:青蒿素(Artemisnin), mP<0.01, **7X0.01 ；图10为SNP对皮质神经元细胞的损伤作用，*/X0.01 ；
图11为不同浓度的青蒿素在SNP损伤皮质神经元细胞中的保护作用(#^0.05，
林/X0.01)；
图12为H2O2对RGC-5细胞的损伤作用，*/X0.01 ；图13为不同浓度的青蒿素在H2O2损伤RGC-5细胞中的保护作用(#表示P〈0.01)。
[0017]下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
[0018]实施例1青蒿素在SNP损伤PC12神经细胞中的保护作用 一、材料与方法
(I)材料与主要试剂
青蒿素购于大连美仑生物科技有限公司；硝普钠(SNP)购于碧云天生物技术研究所；DMEM培养基、胎牛血清和马血清购于美国Gibco公司；噻唑蓝(MTT )、二甲亚砜(DMS0)、购于美国 Sigma 公司;LY294002、PD98059 购自美国 Sigma-Aldrich 公司!Western blot相关试剂购自广州碧云天生物技术研究所；Western所用抗体Ant1-phospho_Akt (Ser473)antibody和Ant1-phospho_p44/42 MAPK (Erkl/2) (Thr202/Tyr204) antibody 购自 CellSignaling Technology (Woburn, USA);辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗(IgG)购自美国Santa Cruz公司；化学发光底物试剂盒购自美国Thermo公司。
[0019](2)主要仪器双人单面净化超净台(苏州净化设备有限公司)；Model 2323 二氧化碳培养箱(美国SHELLA公司)；LX71荧光倒置相差显微镜，S8F-3显微照相系统(日本Olympus公司)！western blot垂直电泳及转印系统(Bio-Rad公司)。
[0020](3)方法 I)细胞培养
高分化PC12细胞株由加拿大Mcgill university道格拉斯研究中心Remi Quirion馈赠，依据郑文华等建立的方法进行培养:使用体积分数分别为5%胎牛血清和5%马血清、青霉素100U/ml、链霉素100U/ml的DMEM培养基，置于37 °C，体积分数为5%的CO2气体的培养箱中培养。隔两天用0.25%胰酶-0.02%EDTA消化传代备用。
[0021]2)原代神经元培养
a.实验前准备:将实验所用的手术器械浸泡在75 %的酒精中，需浸泡30 min以上，预先准备好分离皮质所需的小培养皿、离心管等器材，配好I XHBSS，消化终止液及培养基。
[0022]b.Poly-D-Lysine包被:6孔板每孔加1.5 mL Poly-D-Lysine,其他孔板按此类推，10-30 min后用IXPBS洗两次。
[0023]c.原代神经元培养所用的孕鼠来自中山大学实验动物中心，选取孕18天的昆明孕小鼠，鼠腹部喷75%的酒精，脱臼处死，沿腹中线切开腹部，找到子宫，快速取出，置于预先准备的培养皿内，迅速转移至超净台。
[0024]d.剪开子宫，取出孕鼠，断头，分离头骨，取出全脑，置于盛有IXHBSS的培养皿内。
[0025]e.超净工作台内，用眼科手术镊、手术剪，小心分离海马及皮质，置于IXHBSS中漂洗。
[0026]f.用眼科手术镊仔细去除皮质及海马组织表面的脑膜及血丝，在培养皿内用镊子尽量撕碎脑组织，将撕碎的组织转移至10 mL EP管中。
[0027]g.加IXHBSS冲洗数次，发现有悬浮的血丝，立即去除，加胰酶，置37°C CO2培养箱消化8 min。[0028]h.加含10 % FBS的培养基终止消化，轻弹离心管，持续1.5-2 min。
[0029]1.吸去FBS，加IXHBSS I mL，巴斯德吸管反复吹打直至呈单细胞并分散均匀，如见有组织块或结缔组织，则吸起弃去。
[0030]j.吹打均匀后，取10 μ L细胞悬液进行计数，800 rpm XlO min离心。
[0031]k.吸去上清，加预先准备好的细胞培养基，制成单细胞悬液，根据细胞计数量种板，置于CO2培养箱培养。种板时所用培养基为:DMEM+10% FBS+0.2 % PSA, 6 h后贴壁后换液，换为Neurobasal + 2 % B27 +0.2 % PSA，定期观察细胞。
[0032]3) MTT法检测细胞活力 将PC12细胞以IXlO4个/孔密度接种于96孔板，细胞贴壁后，加入青蒿素(3~100 μ M)、SNP ( 500 μ Μ)，于给药后在37 V、体积分数为5%的CO2气体的培养箱中培养24h，加入MTT液(0.5mg/ml)，在37°C孵育4h后弃去上清，每孔加入100 μ L DMSO振荡，待结晶完全溶解后在酶标仪上检测490 nm波长处吸光度(A49tl )，检测细胞活力。
[0033]4)免疫印迹法检测下游信号通路蛋白磷酸化水平
将上述培养的PC12细胞消化后进行细胞计数，以含1%FBS的DMEM培养基接种到用多聚赖氨酸包被的12孔板中。细胞贴壁后，用LY294002、PD98059处理后，洗去细胞培养液，用冰冷的PSB轻轻冲洗，收获细胞后获取细胞总蛋白，BCA法蛋白定量后将蛋白浓度调至等浓度。以30yg/Well的蛋白样品经8%的聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分离，再转印至PVDF膜上。用含5%脱脂奶粉的TBST室温封闭转印膜1.5h，加入各种抗体(Ant1-phospho-Akt(Ser473)antibody, Ant1-phospho_p44/42 MAPK (Erkl/2) (Thr202/Tyr204) antibody)室温孵育过夜。洗膜后,再用辣根过氧化物酶标记的二抗室温孵育lh。ECL化学发光系统检测蛋白信号。
[0034]5)统计学方法
采用SPSS 16.0进行统计学分析，剂量资料多组间比较采用单因素方差分析(One-wayAN0VN)，各组均数的多重比较采用最小显著插值法(LSD)，P < 0.05为差异有统计学意义。
[0035]二、结果 (1)3咿能诱导？(:12细胞损伤
PC12细胞剥夺血清后，使用不同浓度的SNP (200~1000 μ M)处理PCl2细胞，另设置含1% FBS (v/v)以及不含血清(CTL)的DMEM培养基处理PC12细胞作为对照，培养24h后通过MTT法检测细胞活力的变化，检测结果如图1所示，从中可以看出随着SNP浓度的增加，PC12细胞的活力逐渐降低，当SNP浓度达到800 μ M及以上时，对PC12细胞活力的损伤具有极显著差异(Ρ〈0.01)。
[0036]上述结果说明SNP对PC12细胞的损伤具有剂量依赖性，800 μ M的SNP即可用于诱导PC12细胞损伤的实验。
[0037](2 )青蒿素在SNP损伤PC12细胞活力中的保护作用
PC12细胞剥夺血清后，加入不同浓度的青蒿素(0、3.125,6.25,12.5、25、50、100 μ Μ，用DMEM培养基配制)预处理lh，随即再加入800 μ M SNP(用DMEM培养基配)，处理24h后，通过MTT法检测细胞活力，另外设立对照组CTL (加入相同体积的DMEM培养基)，检测结果如图2所示，从中可以看出在800 μ M SNP的处理下，随着青蒿素(Artemisnin)浓度的增加，PC12细胞活力被损伤的程度逐渐降低，当青蒿素浓度达到25 μ M及以上时，降低SNP对PC12细胞活力的损伤作用具有显著差异Ρ〈0.01。
[0038]上述结果说明，青蒿素在SNP诱导的PC12细胞氧化应激损伤中具有保护作用，且这种保护作用具有剂量依赖性，当青蒿素浓度达到25 μ M及以上时几乎可阻断SNP对PC12的毒性损伤作用。
[0039] (3)青蒿素在SNP诱发PC12细胞凋亡中的保护作用
上述MTT结果表明青蒿素可以保护SNP所诱导的细胞损伤,接下来进一步采用Hoechst染色法来观察青蒿素抑制SNP诱导细胞凋亡的作用。
[0040]PC12细胞剥夺血清后，加入25 μ M的青蒿素预处理lh，随即再加入800 μ M SNP处理24h后，相关对照组的设置如图3和图4所示，处理后进行Hochest33258染色，检测各组细胞凋亡情况。
[0041]Hoechst染色结果如图3所示，对照组细胞胞核圆润饱满，着色均匀；给予SNP处理后，在正常的PC12细胞核之间散在分布一些出现凋亡特征的细胞核，如细胞核体积变小皱缩，可见到核碎裂成小叶状或呈现浓染致密的颗粒块状，呈现高强度的蓝色荧光(如图中箭头所示);然而在给予25 μ mol/L青蒿素(Artemisinin)干预下,细胞核皱缩数减少且核碎裂的现象有所缓解。这表明青蒿素在SNP诱导PC12细胞凋亡中有一定的保护作用。
[0042]细胞凋亡计数结果如图4所示:与正常培养的PC12细胞相比，SNP处理后，PC12细胞凋亡数量显著高于正常组(/X0.01)，而给予药物青蒿素干预后，可以一定程度上逆转SNP的毒性作用，其凋亡坏死的细胞数显著减少，且其保护效应具有统计学差异(/X0.01)。
[0043]上述结果说明青蒿素在SNP诱导的神经细PC12的氧化应激和细胞凋亡等细胞损伤(PC12细胞的SNP损伤模型)中具有保护作用。
[0044](5)青蒿素可能通过MAPK/Erk信号通路在SNP损伤PC12细胞中的起保护作用 已有研究报道青蒿素类药物可能通过MAPK信号通路在细胞内发挥药效作用，为了进
一步探索青蒿素是通过怎样的信号途经起到保护PC12细胞的作用，本发明选取PI3K/Ak和MAPK/Erk信号通路进行探索。
[0045]PC12细胞剥夺血清后，分别使用PI3K/Akt信号通路的特异性抑制剂LY294002(25 μ Μ),MAPK/Erk信号通路的特异性抑制剂PD98059 (50 μ Μ)预处理PC12细胞30min后，加入25 μ M青蒿素处理lh，随即加入SNP处理24h后，通过MTT法检测处理组和相应的对照组的细胞活力，如图5所示。从图5中可以看出，抑制剂LY294002和TO98059本身并不会明显降低PC12细胞活力，且在青蒿素和SNP同时存在时PC12细胞活力几乎也不受影响，但当在青蒿素、SNP和抑制剂TO98059同时存在时，PC12细胞活力明显降低，这说明当有抑制剂PD98059存在时青蒿素在SNP损伤PC12细胞中的保护作用丧失，推测青蒿素可能通过MAPK/Erk信号通路在SNP损伤PC12细胞中的起保护作用。
[0046]为了进一步探索上述推测是否正确,接下来通过western blot进一步检测MAPK/Erk信号通路中相关蛋白激酶在青蒿素作用下的磷酸化情况，细胞处理方法同上，实验设计和检测结果如图6所示。
[0047]从图6中可以看出当SNP与青蒿素同时处理PC12细胞后，ρ-Erk水平显著增高；加入PI3K/Akt的特异性抑制剂LY294002不能降低Erk的磷酸化水平，而加入MAPK/Erk的特异性抑制剂PD98059后，Erk磷酸化水平降到对照组水平。说明青蒿素对SNP损伤PC12的保护作用可能是通过MAPK/Erk信号通路发挥作用。[0048]丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activatedprotein kinases, MAPK)信号转导通路是近年来的研究热点之一，它能将细胞表面信号转导至细胞核内。该家族通过影响动物细胞内基因的转录和调控，从而影响细胞的增殖、分化、转化、凋亡等。目前在哺乳动物细胞中一共发现了 4条并行的MAPK信号通路:MAPK家族的信号通路主要包括细胞外信号调控的蛋白激酶(ERK)、c-Jun N端激酶(JNK) /应激激活的蛋白激酶(SAPK)、P38MAPK以及ERK5/BMK1四条途径。其中，Ras-Raf-ERK途径迄今研究得比较清楚的一条通路，该通路参与了细胞生长、发育、增殖、分化等多种生理、病理过程。生长因子与受体结合激活酪氨酸激酶，通过衔接蛋白将信号传递给Ras蛋白，Ras-GTP直接与Raf相结合，形成一个短暂的膜锚定信号。活化的Raf通过磷酸化促分裂原激活的蛋白激酶的激酶(MEK)环上的丝氨酸残基而将其激活。MEK再将促分裂原激活的蛋白激酶(ERK)激活，进而磷酸化许多与胞质和胞膜相连的底物而促进细胞增殖。在我们的研究中发现，PD98059能抑制青蒿素对SNP损伤的PC12细胞的保护作用，即可说明青蒿素保护SNP损伤的PC12细胞，可能是通过激活或者部分激活MAPK/Erk信号通路而促进细胞的增殖，从而达到神经保护作用。而激活该通路的具体机制，则有待进一步的研究。
[0049]综上所述,本研究在PC12细胞中证明青蒿素对SNP损伤的神经细胞具有保护作用，其作用可能是通过激活或者部分激活MAPK/Erk信号通路，但其具体的机制还有待更深入的研究。由于青蒿素类药物已经用于临床，研究这些药物的神经保护作用，对于寻找其可能靶点、新的药理作用，对该类药物的安全使用具有重要的意义。
[0050]实施例2青蒿素在SNP损伤视网膜神经细胞RGC-5中的保护作用 一、材料与方法
同实施例1。
[0051]二、结果
(I)SNP能诱导RGC-5细胞损伤
RGC-5细胞剥夺血清后，使用不同浓度的SNP (62.5~1000 μ M)处理RGC-5细胞以及DMEM培养基培养RGC-5细胞作为对照(CTL)，培养24h后通过MTT法检测细胞活力的变化，检测结果如图7所示，从中可以看出低浓度的SNP促进细胞增殖(I~250μΜ)，当达到500 μ M时SNP出现毒性，在750 μ M细胞存活率降为59%左右，此浓度作为SNP细胞毒性模型。
[0052](2)青蒿素在SNP损伤RGC-5细胞活力中的保护作用
在已建立的SNP诱导的细胞损伤模型的基础之上，采用750 μ mol/L的SNP对RGC-5细胞进行处理，MTT法检测青蒿素是否对SNP诱导的RGC-5细胞损伤具有保护作用，青蒿素的溶度分别选用6.25、12.5、25、50和100 μ mol/L,检测结果如图8所示，随着青蒿素浓度的增加，SNP诱导RGC-5细胞损伤的作用逐渐减弱，细胞的存活率逐渐增加，当青蒿素的浓度达到50 ymol/L时，其保护作用已经具有显著性差异(7X0.01)。这表明，低浓度的青蒿素对SNP诱导的RGC-5细胞损伤具有保护作用，且呈剂量依赖性(O~50 μ mol/L)。
[0053](3)青蒿素在SNP诱发RGC-5细胞凋亡中的保护作用
上述MTT结果表明青蒿素可以保护SNP所诱导的细胞损伤,接下来进一步采用Hoechst染色法来观察青蒿素抑制SNP诱导细胞凋亡的作用。
[0054]Hoechst染色结果如图9 A所示，对照组细胞胞核圆润饱满，着色均匀；给予SNP处理后，在正常的RGC-5细胞核之间散在分布一些出现凋亡特征的细胞核，如细胞核体积变小皱缩，可见到核碎裂成小叶状或呈现浓染致密的颗粒块状，呈现高强度的蓝色荧光(如图中箭头所示);然而在给予25 μ mol/L青蒿素干预下，细胞核皱缩数减少且核碎裂的现象有所缓解。这表明青蒿素在SNP诱导RGC-5细胞凋亡中有一定的保护作用。
[0055]细胞凋亡计数结果如图9 B所示:与正常培养的RGC-5细胞相比，SNP处理后，RGC-5细胞凋亡数量显著高于正常组(/X0.01)，而给予药物青蒿素干预后，可以一定程度上逆转SNP的毒性作用，其凋亡坏死的细胞数显著减少，且其保护效应具有统计学差异0°〈0.01)。
[0056] 上述结果说明青蒿素在SNP诱导的RGC-5视网膜神经细胞的氧化应激损伤中具有保护作用。
[0057]实施例3青蒿素在SNP损伤皮质神经元中的保护作用 一、材料与方法
同实施例1。
[0058]二、结果
(I) SNP能诱导皮质神经元细胞损伤
皮质神经元细胞剥夺血清后，使用不同浓度的SNP (12.5~1000 μ Μ)处理皮质神经元细胞以及DMEM培养基培养皮质神经元细胞作为对照(CTL)，培养24h后通过MTT法检测细胞活力的变化，检测结果如图10所示，从中可以看出从12.5 ymol/L到100 ymol/L之间SNP可明显降低神经元的存活率，MTT的值呈现剂量依赖性下降，50 μ mol/L的SNP即可显著抑制神经元的存活，后续神经元损伤的SNP的剂量选择为50 μ mol/L。
[0059](2)青蒿素在SNP损伤皮质神经元细胞活力中的保护作用
在已建立的SNP诱导的细胞损伤模型的基础之上，采用50 μ mol/L的SNP对皮质神经元细胞进行处理，MTT法检测青蒿素是否对SNP诱导的皮质神经元细胞损伤具有保护作用，青蒿素的溶度分别选用6.25、12.5、25、50和100 μ mol/L,检测结果如图11所示，随着青蒿素浓度的增加，SNP诱导皮质神经元细胞损伤的作用逐渐减弱，细胞的存活率逐渐增加，当青蒿素的浓度达到25 μ mol/L时，其保护作用已经具有显著性差异(/X0.01 )。这表明，在25 -1OOymol内，青蒿素对SNP诱导的皮质神经元细胞凋亡有显著的抑制作用，且呈明显的剂量效应。
[0060]上述结果说明青蒿素在SNP诱导的皮质神经元细胞的损伤中具有保护作用。
[0061]实施例4青蒿素在H2O2损伤视网膜神经细胞RGC-5中的保护作用 一、材料与方法
同实施例1。
[0062]二、结果
(I) H2O2能诱导RGC-5细胞损伤
RGC-5细胞剥夺血清后，使用不同浓度的H202( 10~100 μ Μ)处理RGC-5细胞以及DMEM培养基培养RGC-5细胞作为对照(CTL)，培养24h后通过MTT法检测细胞活力的变化，检测结果如图12所示，从中可以看出高浓度的H2O2浓度(60~100 μ M )依赖性地引起RGC-5细胞死亡，100 μ M H2O2可引起大约40~60%细胞死亡。
[0063](2)青蒿素在H2O2损伤RGC-5细胞活力中的保护作用在已建立的H2O2诱导的细胞损伤模型的基础之上，采用100 μ mol/L的H2O2对RGC-5细胞进行处理，MTT法检测青蒿素是否对H2O2诱导的RGC-5细胞损伤具有保护作用，青蒿素的溶度分别选用6.25、12.5、25、50和100 μ mol/L。检测结果如图8所示，随着青蒿素浓度的增加，H2O2诱导RGC-5细胞损伤的作用逐渐减弱，细胞的存活率逐渐增加，当青蒿素的浓度达到25 μ mol/L时，其保护作用已经具有显著性差异(/X0.05)。这表明，低浓度的青蒿素对H2O2诱导的RGC-5细胞损伤具有保护作用，且呈剂量依赖性(O~100 μ mol/L)。
[0064]上述结果说明青蒿素在H2O2诱导的神经细胞(PC12)的氧化应激和细胞凋亡等细胞损伤中具有保护作用。
[0065]同样,对青蒿素衍生物(如青蒿素甲醚Artemether、青蒿琥酯Artesunate、二氢青蒿素Dihydroartemisinin及去氧青蒿素Deoxyartemisinin等)或其药物可接受的盐进行上述实施例中类似的实验研究，发现其衍生物均有与青蒿素类似的保护神经细胞、增强神经细胞抵抗损伤能力的作用，从而也可以说明以青蒿素为母核的类似物也具有类似的作用。
[0066]上述相关青蒿素及其衍生物结构式如下:
青蒿素 Artemisinin