专利名称：降血脂口服液及其制备方法 血脂为血液中所含脂类物质的总称。如果血脂过多，容易造成血稠，在血管壁上沉积，逐渐形成小斑块，这些斑块增多、增大，逐渐堵塞血管，使血流变慢，严重时血流被中断。这种情况如果发生在心脏，就引起冠心病；发生在脑，就会出现脑中风。目前已经公认高脂血症，包括高胆固醇血症、高甘油三脂血症及复合性高脂血症是促进动脉粥样硬化和危及人类健康的冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)的主要危险因素之一，而降低血脂，可以降低冠状动脉粥样硬化性心脏病的发生率。据统计资料显示，每降低总胆固醇水平均1％，可以降低2％的心肌梗塞的发生率。另外，血脂的降低已被证实可以减慢已形成的粥样硬化斑块的进展，甚至使其消退，并有可能减低冠状动脉粥样硬化性心脏病的病死率。治疗与控制高脂血症的重要意义是改变异常血脂状况及降低发生冠心病的风险，治疗方法一般分成药物治疗与非药物治疗两方面。高脂血症的控制一般需要很长时间甚至终生进行，所需费用相当昂贵，而且目前所有降脂药物均具有一定毒副作用，部分研究资料结果显示，药物干预(特别是非那汀类降脂药)并不能使人群总死亡率降低。因此，提供一种无毒副作用、具有较好的辅助降血脂功能作用且口感和风味易为患者所接受的保健制品具有重要的现实意义。
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种无毒副作用、能够有效降低血脂且口感和风味俱佳的口服液。本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的一种降血脂口服液，每100毫升该口服液含有以下重量的组分低聚木糖4-8g，聚葡萄糖2-6g，几丁聚糖1-4g和维生素C0.1-0.5g； 优选的，上述各组分的重量是低聚木糖6g，聚葡萄糖4g，几丁聚糖2.7g和维生素C0.3g。为了从保健功能、口感和风味上达到更好的效果，本发明降血脂口服液每100毫升还可含有以下重量的组分麦芽糖2-6g，果葡萄浆2-6g，蜂蜜2-4g，柠檬酸0.5-2g，乳酸0.05-0.5g，葡萄柚香精0.05-0.5g。
优选的，各组分的重量是麦芽糖4g，果葡萄浆4g，蜂蜜3g，柠檬酸1g，乳酸0.1g，葡萄柚香精0.1g。
本发明口服液以水溶性植物纤维(聚葡萄糖)加动物纤维(几丁聚糖)与其它活性成分(维生素C，低聚木糖等)配合而成。
低聚木糖又称寡木糖，是一种优良的双歧杆菌增值因子。低聚木糖增值双歧杆菌的功能是其他聚和糖的20倍，且对于肝道有双向调节作用，可使便秘或泻痢状况得到缓解。低聚木糖可改善肠内菌群，促进肠道蠕动，加剧食物通过肠道，抑制肠内有毒发酵产物生成，因而具有降低胆固醇的作用，低聚木糖有较好的降低血脂的功效。
聚葡萄糖聚葡萄糖是一种优良的水溶性膳食纤维，是一种β-1，6葡聚糖。其生理保健功能为在大肠中发酵，产生短链脂肪酸，增加粪便体积，减少胃排空时间，聚葡萄糖能防止胆固醇和胆甾烷醇这类固醇的重吸收。聚葡萄糖在小肠形成粘膜层，有效阻碍甘油三酯和胆固醇在小肠的吸收；聚葡萄糖可以与胆酸结合，增加胆红素排出，减少胆固醇的形成，还可通过形成凝胶吸附胆酸，使机体利用胆固醇合成胆酸，降低血清胆固醇。
几丁聚糖又称壳聚糖、脱乙酰甲壳素等。几丁聚糖是带正电荷的阳离子动物性食物纤维，又是自然界唯一存在的碱性多糖，因而决定了其具有重要的生理功能。血液中的总胆固醇和甘油三脂的含量过高，会诱发各种心血管病，直接威胁着人的生命。食物中脂类的消化需要胆汁酸作为乳化剂，正电性的几丁聚糖与负电荷的胆汁酸结合后排出体外，使脂肪不被乳化，从而阻碍脂肪的消化吸收。因胆固醇主要在肝脏中转化为胆汁酸减少，这就促进肝脏将胆固醇转化成胆汁酸，从而使血胆固醇降低。在体外一定比例的几丁聚糖可较好的络合胆汁酸，干扰机体对脂肪的吸收，几丁干扰脂肪吸收的功能。
维生素C维生素C(VC)是人体内重要的还原剂，参与多种氧化—还原过程。在正常人体内胆固醇约有80％转化为胆酸排出体外，VC参与并促进其转化过程。患有高胆固醇血症时，胆固醇的代谢消耗大量的VC，因此及时补充适量的VC能有效降低总胆固醇。
聚葡萄糖可在小肠内形成一层膜，并缠裹部分食物脂肪，能有效限制消化道内脂肪的吸收，促进类脂化合物的排泄，并增加饱腹感，减少进食量，从而达到调节血脂，减少脂肪堆积，预防肥胖症等功效。聚葡萄糖能吸附胆汁酸，胆固醇变异原等有机分子，抑制总胆固醇(TG)浓度升高，降低胆酸及其盐类的合成与吸收，降低人体血浆和肝脏胆固醇水平，防治血液黏稠及预防心脑血管疾病。
几丁聚糖是一种天然的多糖类物质，是存在于虾蟹等甲壳类动物的壳中的甲壳素脱乙酰酰基而得到的可溶于酸性水溶液的聚氨基葡萄糖，具有较好的生物相容性，基本无毒副作用。服用几丁聚糖能够抑制血浆胆固醇的上升。
壳聚糖是一种弱的阴离子交换剂，壳聚糖衍生物对胆酸的结合能力随着6-O-所联的烷基碳链增长而增大。表明壳聚糖骨架上正电荷及壳聚糖6-O-烷基的疏水性在胆酸的结合能力方面起着重要的作用并且有一定的降血脂作用。壳聚糖也是一种粘性的多糖类纤维素，与燕麦胶等类似可以通过胃的排空延迟而起到降脂作用的特性。几丁聚糖能够减少胆固醇在小肠吸收，增加中性固醇的粪便排泄，同时能降低甘油三酯，胆固醇等脂溶性物质的吸收减少，随之增加了排泄而达到调血脂作用。
维生素C与几丁聚糖抑制脂肪的消化吸收有协同增效作用，通过试验发现，如果在给予大鼠高脂饮食的同时持续大量给予几丁聚糖和维生素C钠盐，大鼠在脂肪消化吸收方面明显可受到抑制。
低聚木糖很难被人体内的消化酶分解，几乎不产生能量，特别适宜肥胖症，糖尿病，高血压，动脉硬化患者服用。它具有双歧因子的作用，其增殖双歧杆菌的选择性高于其他功能性低聚糖；它与食物的配合性良好，只需添加少许，即可促进钙的吸收，达到保健效果；此外，低聚木糖还可以防止便秘。
本发明将低聚木糖，聚葡萄糖，几丁聚糖和维生素C按照一定比例配伍在一起后，相互之间具有协同增效作用，共同起到辅助降低血脂的显著保健功效。
本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种制备本发明口服液的方法。
本发明所要解决的另一个技术问题是通过以下技术方案来实现的一种制备本发明口服液的方法，包括以下步骤(1)按下述重量称取各组分低聚木糖4-8g，聚葡萄糖2-6g，几丁聚糖1-4g和维生素C0.1-0.5g；(2)将纯净水加热到60-70℃后，边搅拌边加入低聚木糖，聚葡萄糖，几丁聚糖，直至全部溶解；
(3)将步骤(2)所得到的溶液在80-90℃温度下加热10-20分钟，冷却至室温，备用；(4)将维生素C用纯净水溶解后，加入到步骤(3)所制备的溶液中，搅拌均匀，补加纯净水至100ml，搅拌均匀，过滤，滤液灌装、灭菌，即得。
上述制备方法中，步骤(2)中优选将纯净水加热到65℃后，边搅拌边加入低聚木糖，聚葡萄糖，几丁聚糖；步骤(3)中优选将步骤(2)所得到的溶液在85℃温度下加热15分钟。
更优选的，一种制备本发明口服液的方法，包括以下步骤(1)按下述重量称取各组分低聚木糖4-8g，聚葡萄糖2-6g，几丁聚糖1-4g和维生素C0.1-0.5g，麦芽糖2-6g，果葡萄浆2-6g，蜂蜜2-4g，柠檬酸0.5-2g，乳酸0.05-0.5g和葡萄柚香精0.05-0.5g；(2)将纯净水加热到60-70℃后，边搅拌边加入低聚木糖，聚葡萄糖，几丁聚糖，麦芽糖，果葡萄浆，蜂蜜，柠檬酸和乳酸，直至全部溶解；(3)将步骤(2)所得到的溶液在80-90℃温度下加热10-20分钟，冷却至室温，备用；(4)将维生素C用纯净水溶解后，加入到步骤(3)所制备的溶液中，搅拌均匀，加入葡萄柚香精，补加纯净水至100ml，搅拌均匀，过滤，滤液灌装、灭菌，即得。
上述制备方法中，步骤(2)中优选将纯净水加热到65℃后，边搅拌边加入低聚木糖，聚葡萄糖，几丁聚糖，麦芽糖，果葡萄浆，蜂蜜，柠檬酸和乳酸；步骤(3)中优选将步骤(2)所得到的溶液在85℃温度下加热15分钟。

以下通过实施例来进一步描述本发明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的范围。
实施例1按下述重量称取各组分低聚木糖6kg，聚葡萄糖4kg，几丁聚糖2.7kg和维生素C0.3kg，麦芽糖4kg，果葡萄浆4kg，蜂蜜3kg，柠檬酸1kg，乳酸0.1kg，葡萄柚香精0.1kg；将纯净水加热到65℃后，边搅拌边加入低聚木糖，聚葡萄糖，几丁聚糖，麦芽糖，果葡萄浆，蜂蜜，柠檬酸和乳酸，直至全部溶解，接着在85℃温度下加热15分钟，冷却至室温，备用；将维生素C用纯净水溶解后，加入到上述步骤所制备的溶液中，搅拌均匀，加入葡萄柚香精，补加纯净水至溶液的总重量达到100kg，搅拌均匀，过滤，滤液灌装、灭菌，分装(规格100ml/支，每100ml口服液含有低聚木糖6g，聚葡萄糖4g，几丁聚糖2.7g和维生素C0.3g，麦芽糖4g，果葡萄浆4g，蜂蜜3g，柠檬酸1g，乳酸0.1g，葡萄柚香精0.1g)。
实施例2按下述重量称取各组分低聚木糖4kg，聚葡萄糖2kg，几丁聚糖1kg和维生素C0.1kg，麦芽糖2kg，果葡萄浆2kg，蜂蜜2kg，柠檬酸0.5kg，乳酸0.05kg，葡萄柚香精0.05kg；将纯净水加热到60℃后，边搅拌边加入低聚木糖，聚葡萄糖，几丁聚糖，麦芽糖，果葡萄浆，蜂蜜，柠檬酸和乳酸，直至全部溶解，接着在80℃温度下加热20分钟，冷却至室温，备用；将维生素C用纯净水溶解后，加入到上述步骤所制备的溶液中，搅拌均匀，加入葡萄柚香精，补加纯净水至溶液的总重量达到100kg，搅拌均匀，过滤，滤液灌装、灭菌，分装(规格100ml/支，每100ml口服液含有低聚木糖4g，聚葡萄糖2g，几丁聚糖1g和维生素C0.1g，麦芽糖2g，果葡萄浆2g，蜂蜜2g，柠檬酸0.5g，乳酸0.05g，葡萄柚香精0.05g)。
实施例3按下述重量称取各组分低聚木糖8kg，聚葡萄糖6kg，几丁聚糖4kg和维生素C0.5kg，麦芽糖6kg，果葡萄浆6kg，蜂蜜4kg，柠檬酸2kg，乳酸0.5kg，葡萄柚香精0.5kg；将纯净水加热到75℃后，边搅拌边加入低聚木糖，聚葡萄糖，几丁聚糖，麦芽糖，果葡萄浆，蜂蜜，柠檬酸和乳酸，直至全部溶解，接着在90℃温度下加热10分钟，冷却至室温，备用；将维生素C用纯净水溶解后，加入到上述步骤所制备的溶液中，搅拌均匀，加入葡萄柚香精，补加纯净水至溶液的总重量达到100kg，搅拌均匀，过滤，滤液灌装、灭菌，分装(规格100ml/支，每100ml口服液含有低聚木糖8g，聚葡萄糖6g，几丁聚糖4g，维生素C0.5g，麦芽糖6g，果葡萄浆6g，蜂蜜4g，柠檬酸2g，乳酸0.5g，葡萄柚香精0.5g)。
实施例4按下述重量称取各组分低聚木糖6kg，聚葡萄糖4kg，几丁聚糖2.7kg和维生素C0.3kg；将纯净水加热到60℃后，边搅拌边加入低聚木糖，聚葡萄糖，几丁聚糖，直至全部溶解，接着在85℃温度下加热15分钟，冷却至室温，备用；将维生素C用纯净水溶解后，加入到上述步骤所制备的溶液中，搅拌均匀，补加纯净水至溶液的总重量达到100kg，搅拌均匀，过滤，滤液灌装、灭菌，分装(规格100ml/支，每100ml口服液含有低聚木糖6g，聚葡萄糖4g，几丁聚糖2.7g和维生素C0.3g)。
实施例5按下述重量称取各组分低聚木糖4kg，聚葡萄糖2kg，几丁聚糖1kg和维生素C0.1kg；将纯净水加热到65℃后，边搅拌边加入低聚木糖，聚葡萄糖，几丁聚糖，直至全部溶解，接着在85℃温度下加热15分钟，冷却至室温，备用；将维生素C用纯净水溶解后，加入到上述步骤所制备的溶液中，搅拌均匀，补加纯净水至溶液的总重量达到100kg，搅拌均匀，过滤，滤液灌装、灭菌，分装(规格100ml/支，每100ml口服液含有低聚木糖4g，聚葡萄糖2g，几丁聚糖1g、维生素C0.1g)。
实施例6按下述重量称取各组分低聚木糖8kg，聚葡萄糖6kg，几丁聚糖4kg、维生素C0.5kg；将纯净水加热到65℃后，边搅拌边加入低聚木糖，聚葡萄糖，几丁聚糖，直至全部溶解，接着在85℃温度下加热15分钟，冷却至室温，备用；将维生素C用纯净水溶解后，加入到上述步骤所制备的溶液中，搅拌均匀，补加纯净水至溶液的总重量达到100kg，搅拌均匀，过滤，滤液灌装、灭菌，分装(规格100ml/支，每100ml口服液含有低聚木糖8g，聚葡萄糖6g，几丁聚糖4g和维生素C0.5g)。
试验例1本发明口服液毒理学试验1试验材料1.1供试样品本发明实施例1-6所制备的口服液。人体口服推荐剂量为50mL/次×1次/天，以每人60kg体重计算，折合剂量0.833mL/kg/天。取送检的4.2倍浓缩液(比重1.2683g/mL)备用。
1.2实验动物及环境湖南农业大学动物科技学院实验动物养殖场提供的清洁级昆明种小鼠和SD大鼠，实验动物生产许可证号为SCXK(湘)2003-0003。实验动物使用许可证号为SYXK(湘)2003-0002。实验期间动物房环境温度为21℃-24℃，湿度56％-58％。
1.3急性经口毒性试验采用最大耐受理试验。选用体重为18g-22g的健康昆明种小鼠20只，雌雄各半。取本发明口服液4.2倍浓缩液(比重1.2683g/mL)给小鼠按20mL/kg.bw体积一次性经口灌胃，剂量达25366mg/kg.bw。灌胃前禁食16小时。灌胃后连续观察两周，记录中毒表现及死亡情况。试验结果见表1。
表1本发明口服液对小鼠的急性经口毒性试验结果

1.4Ames试验采用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株菌株进行试验。五个试验剂量分别为5000、1000、200、40、8ug/皿，同时设自发回变、溶剂对照(蒸馏水)和阳性突变剂对照。样品配制时，取1.49mL本发明口服液4.2倍浓缩液(含固形物1.25g)加蒸馏水定容至25mL，混匀，配成5000ug/皿浓度组受试液；从中取5.0mL加蒸馏水定容至25mL，混匀，配成1000ug/皿浓度组受试液；从1000ug/皿浓度组受试液中取5.0mL加蒸馏水定容至25mL，混匀，配成200ug/皿浓度受组试液；依此类推，配成40、8ug/皿浓度组受试液，灭菌后备用。试验采用多氯联苯(PCB)诱导的大鼠肝微粒体酶(S-9)作为体外代谢活化系统。在顶层琼脂中加入0.1mL试验菌株增菌液、0.1mL受试液和0.5ml S-9混合液(当需要代谢活化时)，混匀后倒入底层培养基平板上。37℃培养48小时，计数每皿菌落数。如果受试动物的回变菌落数超过自发回变菌落数的2倍以上，并有剂量-反应关系者定为阳性。整套试验在相同试验条件下重复做两次。试验结果见表2和表3。
表2本发明口服液Ames试验结果(第一次)

注以上结果为3个平皿的均值±标准差。阳性对照TA97+S9、TA98+S9、TA100+S9采用2-AF(剂量10.0μg/皿)TA97-S9、TA98-S9采用9-芴酮(剂量0.2μg/皿)TA100-S9采用NaN3(剂量1.5μg/皿)TA102+S9采用1，8-二羟蒽醌(剂量50.0μg/皿)TA102-S9采用MMC(剂量0.5μg/皿)，表3同。
表3本发明口服液Ames试验结果(第二次)

由表2、3可见，对TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株，加与不加S9，样品各剂量组回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍，亦无剂量一反应关系，提示受试物为诱变阴性。
1.5小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验采用间隔24小时两次经口灌胃法。取体重为25-30g的健康昆明种小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。以40mg/kg·bw剂量的环磷酰胺为阳性对照，蒸馏水为阴性对照。试验组3个剂量分别为10000、5000、2500mg/kg·bw，试验时分别取本发明口服液4.2倍浓缩液25.00g、12.50g、6.25g加蒸馏水定容50mL，环磷酰胺阳性对照取100mg环磷酰胺加蒸馏水定容至50mL，给小鼠按0.20mL/10g·bw体积间隔24小时灌胃2次。末次给样后6小时颈椎脱臼处死动物，取胸骨骨髓用小牛血清稀释涂片，甲醇固定，Giemsa染色。光学显微镜下，每只动物计数1000个嗜多染红细胞(PCE)，微核发生率以含微核的PCE千分率计，按X2检验统计处理。计数200个嗜多染红细胞，计算嗜多染红细胞与成熟红细胞的比例(PCE/NCE)。
试验结果见表4，经x2检验，样品各剂量组微核率与阴性对照组比较差异无显著性(P＞0.05)，而各剂量组和阴性对照组微核率显著低于环磷酰胺组(P＞0.01)。各组PCE/NCE比值均在正常范围内。提示样品对小鼠骨髓细胞未见损伤作用。
表4本发明口服液对小鼠骨髓微核发生率的影响

1.6小鼠精子畸形试验取体重25g-35g的雄性昆明种小鼠25只，随机分为5组，每组5只。以40mg/kg·bw剂量的环磷酰胺为阳性对照，蒸馏水为阴性对照。试验组三个剂量分别为10000mg/kg·bw、5000mg/kg·bw、2500mg/kg·bw，试验时分别取本发明口服液4.2倍浓缩液25.00g、12.50g、6.25g加蒸馏水定容至50mL，环磷酰胺阳性对照取100mg环磷酰胺加蒸馏水定容到50mL，给小鼠按0.20mL/10g·bw体积灌胃，每次边搅边灌。每日一次，连续5天，于末次灌胃后的第30天处死动物，取两侧副睾，置于放有2mL生理盐水的平皿中，用眼科剪将副睾纵向剪1-2刀，静置3～5min，轻轻摆动，用四层擦镜纸过滤，吸滤液涂片，干燥后甲醇固定5min，2％伊红染色1h，用水轻冲、干燥。每只动物计数1000个结构完整的精子，计数畸变精子发生率。按x2检验统计处理。
试验结果见表5。经x2检验，样品各剂量组精子畸形率与阴性对照组比较差异无显著性(P＞0.05)，而各剂量组和阴性对照组精子畸形率显著低于环磷酰胺组(P＜0.01)。华雨牌清雪清口服液对小鼠精子不产生畸变作用。
表5本发明口服液对小鼠精子畸形发生率的影响

1.7 30天喂养试验1.7.1剂量组选择与受试物给予方式SD大鼠80只，雌雄各半，雄鼠体重72.3±5.5g，雄鼠体重73.4±5.5g。随机分为四组，即对照组及三个受试物组，每组20只，雌雄各半。本发明口服液低、中、高剂量分别为41.67mL/Kg·bw、62.50mL/Kg·bw、83.33mL/Kg·bw，分别相当于人体推荐剂量的50、75、100倍。低、中剂量受试液配制时分别取本发明口服液4.2倍浓缩液99.2mL、148.8mL加蒸馏水定容至200ml，给大鼠按2.0mL/100g·bw体积灌胃，高剂量组大鼠采用4.2倍浓缩液直接给大鼠按2.0mL/100g·bw体积灌胃，对照组灌胃给予等体积蒸馏水，每日一次，连续30天。
1.7.2主要仪器与试剂主要仪器雅培CD3700全自动血球计数仪，OLYMPUSAU400全自动生化分析仪，TD5A-WS台式低速离心机等。主要试剂总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、血糖(GLU)试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)购自上海复星长征医学科学有限公司肌酐(Cr)购自上海申能一德赛诊断技术有限公司；胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)购自浙江东瓯生物工程有限公司。
1.7.3实验方法实验期间所有动物给予普通饲料，单笼饲养，自由摄食饮水，每天观察动物的活动和生长情况，每周加食2次，记录给食量和剩食量，每周称一次体重，计算每周进食量和食物利用率，实验末计算总食物利用率。实验末期，禁食14小时后，每只大鼠摘眼球采集两份血抗凝血用雅培CD3700全自动血球计数仪测定血红蛋白(Hb)、红细胞压积(HCT)，进行红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)计数及WBC分类；非抗凝血静置后分离血清，用OLYMPUSAU400全自动生化分仪测定TP、ALB、ALT、Cr、BUN、AST、CHOL、TG和GLU。采血后颈椎脱臼处死动物作大体解剖，称肝、肾、脾、睾丸重量，计算脏/体比值，取肝、肾、脾、胃、十二指肠、睾丸、卵巢作病理切片检查。在对各剂量组动物作大体检查未发现明显病变和生化指标改变时，只进行最高剂量组及对照组动物主要脏器的组织病理学检查，如发现病变则对较低剂量组相应器官及组织进行检查。
1.7.4实验数据统计用Excel、Spss、Instat软件进行数据转化和统计分析。用Spss软件分析时，先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Dunnett法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较。若方差不齐则对原始数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到方差齐的目的，改用秩和检验进行统计，发现总体比较有差异，则采用不要求方差齐性的Tamhan’esT2检验进行两两比较。30天喂养期间，各动物生长发育良好，无异常行为和中毒症状，无死亡。试验结果见表6-20。
1.7.5实验结果1.7.5.1本发明口服液对大鼠体重及体重增长的影响表6本发明口服液对大鼠体重及体重增长的影响

经方差齐性校检验，雌、雄鼠各时点体重及试验期间体重增长值方差齐，采用单因素方差分析进行统计，结果未见各剂量组与对照组之间有显著性差异(P＞0.05)。
1.7.5.2本发明口服液对大鼠进食量及食物利用率的影响试验结果见表7。经方差齐性检验，雄鼠第2、4周进食量、雌雄鼠第1周食物利用率方差不齐，采用秩和检验，雌、雄鼠其他周及总进食量、其他周及总食物利用率方差齐，采用单因素方差分析进行统计，结果显示各剂量组与对照之间各周及总进食量、食物利用率无显著性差异(P＞0.05)。
表7本发明口服液对大鼠进食量的影响

1.7.5.3本发明口服液对大鼠食物利用率的影响表8本发明口服液对大鼠食物利用率的影响

1.7.5.4本发明口服液对大鼠血液学指标的影响试验结果见表9-10。方差齐性检验示雌鼠血红蛋白、红细胞压积方差不齐，采用秩和检验，各组雌雄大鼠白细胞、红细胞、血小板总数、白细胞分类方差齐，采用单因素方差分析进行统计，结果显示各剂量组与对照组上述各项指标无显著性差异(P＞0.05)。
表9本发明口服液30天喂养试验血液学检查结果

表10本发明口服液30天喂养试验对白细胞分类的影响

1.7.5.5本发明口服液对大鼠生化指标的影响试验结果见表11和表12。方差齐性检验示雌雄鼠各项生化指标均方差齐，采用单因素方差分析进行统计处理，结果显示各剂量组与对照组之间各项生化指标无显著性差异(P＞0.05)。
表11本发明口服液30天喂养试验末期生化检验结果

表12本发明口服液30天喂养试验末期生化检验结果

1.7.5.6本发明口服液对大鼠脏器绝对重量和脏器/体重比值的影响试验结果见表13-14。经方差齐性检验，各组雌雄大鼠肝脏、脾脏、肾脏、雄鼠睾丸绝对重量和及肝/体、脾/体、肾/体比值及雄鼠的睾丸/体重比值方差齐，采用单因素方差分析进行统计分析，结果显示各剂量组与相应对照组之间各脏器绝对重量及脏体比值较无显著性差异(P＞0.05)。
表13本发明口服液对大鼠脏器绝对重量的影响

表14本发明口服液对大鼠脏体比的影响

1.7.5.7大体解剖及组织学检查结果在对各剂量组动物作大体解剖检查时，未发现明显病变，只进行高剂量组及对照组动物主要脏器的组织病理学检查。组织病理切片检查结果见表15-21。
表15肝脏组织病理学检查结果

注1/10表示10只动物中1只动物出现病变(以下同)，以上病变出现在同一只大鼠表16脾脏组织病理学检查结果

表17肾脏组织病理学检查结果

表18胃组织病理学检查结果

表19十二指肠组织病理学检查结果

表20雌鼠卵巢组织病理学检查结果

表21雄鼠睾丸组织病理学检查结果

3 试验结论3.1 急性经口毒性试验以25366mg/kg·bw剂量的本发明口服液4.2倍浓缩液给两种性别的昆明种小鼠灌胃后未见明显中毒症状，观察14天无死亡。本发明口服液对雌、雄昆明种小鼠的急性经口毒性试验最大耐受剂量(MTD)大于25366mg/kg·bw(见表1)。根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中的急性毒性分级标准，属无毒物。
3.2 遗传毒性试验三项遗传毒性试验(Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验及小鼠精子畸形试验)结果均为阴性。
3.3 30天喂养试验以41.67mL/kg·bw、62.50mL/kg·bw、83.33mL/kg·bw剂量(分别相当于人体推荐量的50、75、100倍)的本发明口服液给大鼠经口灌胃30天，实验期间，各组动物生长发育良好，样品各剂量对大鼠体重、体重增长、平均进食量及食物利用率无显著影响(P＞0.05)。实验末，各剂量组血液学指标(血红蛋白、红细胞总数、红细胞压积、血小板总数，白细胞总数及分类)、血生化指标(血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总蛋白、白蛋白、胆固醇、苷油三酯、尿素氦、肌酐、血糖)、脏体比值(肝/体、脾/体、肾/体比值及雄鼠的睾九/体重比值)与相应对照组比较，无显著性差异(P＞0.05)。大体解剖和组织病理检查未见与样品有关的异常改变。试验结果说明本发明口服液30天喂养对大鼠无毒副作用。
试验例2本发明口服液辅助降血脂作用动物实验1、材料和方法11受试样品本发明实施例1-6所制备的口服液。人体口服推荐剂量为50mL/次×1次/天，以每人60kg体重计算，折合剂量0.833mL/kg/天。
1.2实验动物湖南农业大学动物科技学院实验动物养殖场(实验动物生产许可证号为SCXK(湘)2003-0003)提供的清洁级雄性SD大鼠40只，体重187.7±28.9g。实验期间环境温度为21℃-24℃，湿度56％～58％，实验动物使用许可证号为SYXK(湘)2003-0002。
1.3剂量选择试验分四组高脂对照组和低、中、高剂量组。低、中、高剂量分别为4.17、8.33、16.66mL/kg.bw(分别相当于人体推荐量的5、10、20倍)，试验时分别取本发明口服液原液41.7mL、83.3mL、166.6mL加蒸馏水定容至200mL，配制成相应浓度的受试液，按2.0mL/100g.bw体积给大鼠灌胃，每日一次，连续30天。对照组灌胃给予等体积蒸馏水。
1.4主要仪器与试剂OLYMPUSAU400全自动生化分析仪；胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)试剂盒由中生北控生物科技股份有限公司提供。
1.5高脂饲料基础饲料78.8％，胆固醇1％，蛋黄粉10％，猪油10％，胆盐0.2％。
1.6实验方法以基础饲料喂饲大鼠一周后，禁食14小时，取尾血，用OLYMPUSAU400全自动生化分析仪测定血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，根据TC水平兼颐TG将动物随机分为4组高脂对照组和三个受试物组。自正式试验开始，各组动物换用高脂饲料，受试物组按1.3中剂量设计灌胃给予不同剂量的本发明口服液，高脂对照组灌胃给予同体积的蒸馏水，连续30天后，禁食14小时，拔眼球采血测定各项血脂指标。
1.7效据处理用Excel、Spss软件进行数据转换和统计分析。用Spss软件进行统计分析时，先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Dunnett法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较。若方差不齐，则对原始数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后的数据进行统计若变量转换后仍未达到方差齐的目的，改用秩和检验进行统计，发现总体比较有差异，则采用不要求方差齐性的Tamhane′sT2检验进行两两比较。试验前后血清总胆固醇。甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醉比较采用配对比较的t检验。
1.8结果判定1.8.1辅助降血脂功能结果判定在血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇检测中，血清总胆固醇、甘油三酯二项指标阳性，可判定该受试样品辅助降血脂功能动物实验结果阳性。
1.8.2辅助降低甘油三酯结果判定①甘油三酯二个剂量组结果阳性；②甘油三酯一个剂量组结果阳性，同时高密度脂蛋白胆固醇显著高于对照组，可判定该受试样品辅助降低甘油三酯动物实验结果阳性。
1.8.3辅助降低血清总胆固醇结果判定①血清总胆固醇二个剂量组结果阳性②血清胆固醇一个剂量组结果阳性，同时高密度脂蛋白胆固醇显著高于对照组，可判定该受试样品辅助降低血清总胆固醇动物实验结果阳性。
2试验结果2.1本发明口服液对大鼠体重的影响试验期间，各组动物生长正常。各剂量组动物初始体重、中期体重、终末体重及增重与高脂对照组比较，无显著性差异(P＞0.05，见表22)。
表22本发明口服液对大鼠体重的影响

2.2对大鼠血清TC、TG、HDL-C的影响方差齐性检验示各组动物试验前后血清TC、TG、HDL-C方差齐，配对t检验显示高脂对照组动物试验后血清TC、TG显著高于试验前(均P＝0.001)，提示造模成功.以不同剂量的本发明口服液给大鼠灌胃30天，与高脂对照组相比，4.17ml/kg.bw剂量可显著降低饲高脂饲料大鼠血清TC、TG水平(P＜0.05)(表23、24)；4.17、8.33、16.66mL/kg.bw，剂量组血清TC分别下降24.3％、14.2％和12.7％(表23)，TG分别下降41.2％、31.1％和22.0％(表25).样品对血清HDL-C水平无显著影响；(P＞0.05)(表23-25)。
表23实验前后各组血清TC水平

表24实验前后各组血清TC水平

表25实验前后各组血清HDL-C水平

3小结以4.17、8.33、16.66mL/kg.bw剂量的受试样品给大鼠灌胃30天，与高脂对照组比较，4.17mL/kg.bw剂量可显著降低饲高脂饲料大鼠血清TC、TG水平(P＜0.05＝，各剂量对大鼠血清HDL-C水平无显著影响(P＞0.05)。提示受试样品辅助降低血脂动物实验结果阳性。
采用自身对照及组间对照法，选择符合试验条件的志愿受试者服用受试样品45天后，结果表明服用受试样品试食组自身配对比较，试验组试食后CHOL、TG与试食前比较，差异有显著意义(P＜0.05或P＜0.01>，试食后试食组CHOL、TG与对照组比较，差异有显著意义(P＜0.05或P＜0.01>。且试食后试食组HDL-C与对照组比较差异无显著性(P＞0.05)。实验结果表明受试样品具有良好的辅助降血脂功能。
试验例3本发明口服液降血脂作用人体试食实验1材料和方法1.1样品1.1.1供试样品本发明实施例所制备的口服液(50.0mL/支)。
1.1.2对照样品安慰剂(由蒸馏水所制备而成)(50.0mL/支)。
1.2受试者选择1.2.1纳入标准，受试者选自湖南省长沙市岳麓区咸家湖社区，性别不限。年龄18-65岁，身体健康状况良好，无明显脑、心、肝、肺、肾、血液疾患，无长期服药史，志愿受试保证配合。
1.2.2受试者排除标准妊娠或哺乳期妇女，对保健食品过敏者；合并有心、肝、肾和造血系统等严重疾病患者短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果判断者；不符合纳入标准，未按规定食用受试样品，无法判定功效或资料不全影响功效或安全性判定者。
1.3实验设计与分组采用自身和组间两种对照设计。按受试者血脂水平随机分为供试样品试食组和安慰剂对照组，尽可能考虑影响结果的主要因素如年龄、性别等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性。按双盲法进行试食试验。
1.4试验方法受试者于2004年10月16日第一次采血测血脂，血脂异常者于2005年01月18日第二次采血测血脂，两次均异常者纳入试验，试验于2005年01月20日开始，受试者每天服用供试样品1次，每次1支，连续服用45天。试验期间不改变原来的饮食习惯，正常饮食。
2.观察指标各项观察指标于试食试验开始及结束时各测定一次。
2.1安全性指标2.1.1一般体格检查试验前详细询问并了解受试者的精神、睡眠、饮食、大小便、血压等情况。
2.1.2血常规红细胞计数、白细胞计数及分类、血红蛋白含量测定等。
2.1.3尿常规pH值、白细胞、尿糖等。
2.1.4粪便常规。
2.1.5腹部B超、心电图、X线胸部透视检查。
2.1.6肝功能检查血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)测定。
2.1.7肾功能检查血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、血糖(GLU)测定。
2.2功效指标胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)3.结果判定3.1CHOL降低＞10％；TG降低＞15％；HDLC上升＞0.104mmol/L；各功效观察指标试验前后自身比较和试食后组间比较均有统计学意义，方可判定该指标阳性；3.2血清胆固醇、甘油三脂二项指标阳性，高密度脂蛋白胆固醇不显著低于对照组，可判定受试样品具有辅助降血脂功能作用；血清胆固醇、甘油三脂二项指标中一项阳性，高密度脂蛋白胆固醇不显著低于对照组，可判定受试样品具有辅助降低血清胆固醇或辅助降低甘油三脂作用。
4.统计学处理资料结果用均数±标准差表示，自身配对资料采用配对t检验，试验组和对照组之间在方差齐性的前提下，均数比较采用成组t检验，否则进行变量转化后满足方差齐性后采用t检验，如果方差仍然不齐，采用秩和检验。
5.结果双盲法观察结束揭晓；服食2号者为华雨牌清雪清口服液，服食1号者为安慰剂。
5.1安全性观察5.1.1一般情况试食组54例，对照组54例。经过45天试验后，试验组有4例受试者因无法判断疗效被筛除，对照组有2例受试者因间断服用受试品被筛除。最后有效试验人群试验组50例，对照组52例。试食前后，受试者精神状况、睡眠状况、大小便状况未见异常；试食前后尿常规、大便常规均未见异常，试食组男/女为26/24，年龄40.52±8.76；对照组男/女为25/27，年龄为41.12±8.36。
5.1.2腹部B超、心电图、X线胸部透视检测均在正常范围。
5.1.3试食试验前后血常规指标变化情况试食样品前、后试食组及对照组血常规变化值均在正常范围内(表26)。
表26试食试验前后血常规指标变化情况

5.1.4试食试验前后肝功能指标变化情况试食样品前、后试食组及对照组血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)均在正常值范围内(表27)。
表27试食试验前后肝功能指标变化情况

5.1.5试食试验前后肾功能指标变化情况试食样品前、后试食组及对照组血清肌酐(Cr)、血糖(GLU)、血清尿素氮(BUN)均在正常值范围内(表28)。
表28试食试验前后肾功能指标变化情况

5.1.6功效观察试食试验前后血清CHOL、TG、HDL-C水平变化情况见表29、表30和表31。试验前，对照组和试食组血清CHOL、TG、HDL-C水平比较，无统计学意义，提示两组之间具有可比性。试验后，自身比较，试食组试食后CHOL、TG与试食前比较，差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01>，对照组试食后CHOL、TG与试食前比较差异无显著性(P＞0.05)。试食后试食组CHOL、TG与对照组比较，差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01>。且试验后试食组HDL-C与对照组比较差异无显著性(P＞0.05)。提示供试样品具有较好的辅助降血脂功能。
表29试食试验前血清CHOL、TG、HDL-C水平情况

表30试食试验前后血清CHOL、TG、HDL-C水平变化情况

注*与试食前比较P＜0.05**与试食前比较P＜0.01#与对照组比较P＜0.05##与对照组比较P＜0.01
表31试食前后血清CHOL、TG、HDL-C变化率

6.小结采用自身对照及组间对照法，选择符合试验条件的志愿受试者服用供试物45天后，结果表明服用供试样品试食组自身配对比较，试验组试食后CHOL、TG与试食前比较，差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01>，试食后试食组CHOL、TG与对照组比较，差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01>。且试食后试食组HDL-C与对照组比较差异无显著性(P＞0.05)。试验结果表明，本发明口服液具有确切的降血脂功效。


本发明公开了一种无毒副作用、能够有效降低血脂且口感和风味俱佳的口服液及其制备方法。本发明口服液每100毫升含有以下重量的各组分低聚木糖4－8g，聚葡萄糖2－6g，几丁聚糖1－4g和维生素C 0.1－0.5g。动物和人体试食实验表明，本发明口服液无毒副作用、降血脂功效显著。