专利名称：癌细胞凋亡的制作方法美国专利No. 4，876，276中公开的地塞米诺(dexanabinol)为1，1 二甲基庚基-(3S，4S)-7-羟基-Δ6-四氢大麻酚。地塞米诺是一种不影响精神状态的大麻素 (carmabinoid)，之前已经证明其能够在体外快速杀死黑素瘤细胞。国际专利申请W02009/007700描述了地塞米诺在治疗黑素瘤癌细胞中的用途。其描述了地塞米诺的致凋亡作用，但没有公开其作用机制，并且在当时也没有完全理解该作用机制。因此，此前也就无法预见该药物在用于除黑素瘤以外的其它癌细胞中的可应用性。 在该已有申请中，公开了地塞米诺是通过抑制黑素瘤细胞的核因子κ-B (NF κ B)，从而治疗黑素瘤的。此外，也已经证明了地塞米诺在黑素瘤中既诱导凋亡，又抑制细胞的增殖。我们已经发现与仅通过与NFK B结合相比，地塞米诺的作用机制要更加复杂。与 WO ‘700中预期的相比，本发明的创造性在于以下创新点由于对作用机制的新的认识，从而确定了地塞米诺能够在其中诱导凋亡的其它类型的癌症。其具有复杂的结合属性以及其它间接作用。这使我们认识到，地塞米诺出乎意料地在更多的癌症中起作用，而不仅仅是黑素瘤，并且其还具有所需的选择性致凋亡作用。目前我们已经惊奇地发现，地塞米诺不仅在黑素瘤中有效，其在其它一些癌症中也有效。地塞米诺的至今未公开的结合属性以及间接作用表明，其能够在其他类型的癌症中有效地诱导凋亡，而不仅仅是黑素瘤。由于对地塞米诺的作用方式的新的认识，目前我们已经通过研究确定了那些对地塞米诺诱导的凋亡敏感的癌症。基于此，已经对相关的细胞系进行了检测，并且已经证实了该推测。国际专利申请No. W003/077832描述了地塞米诺在降低癌细胞增殖中的用途。此外，还描述了该增殖的降低与炎症相关基因的调控有关。WO ‘832仅提供了针对胰腺肿瘤和结肠直肠肿瘤的可能性证据。实验结果表明， “高达15 μ M的地塞米诺的存在对Aspc-I的增殖没有影响，而在相同浓度下，Panc-I细胞的增殖被抑制26%”。其还指出，“通过调节促/抗炎介质而起作用的”地塞米诺“也许对某些类型的肿瘤的治疗有效”。因此，虽然地塞米诺在癌症治疗中的用途已被公开，但是本领域的技术人员可以理解，细胞增殖的减少可以通过防止癌的扩散或生长来降低癌症的影响，但是不会对癌本身有致命性地影响，因此，可以依靠(例如)外科手术技术或者其它化学疗法来使得癌发生细胞凋亡。然而，虽然地塞米诺对炎症有效果、从而对细胞增殖有效果，但是没有任何证据表明其具有任何凋亡作用。WO ‘832承认其没有清楚地了解地塞米诺的作用机制。其在第1页第M至25行实际指出，“尽管如此，仍然不清楚大麻素类衍生物的某些治疗效果的机制”。此外，WO ‘832 描述了对于脊椎损伤导致的神经损伤、大脑局部缺血和神经退行性疾病(例如阿尔兹海默症和帕金森病)而言，地塞米诺和其它大麻素将是引人注意的治疗候选物。就这点而言，可以容易地理解这些大麻素的任何凋亡作用将不是人们所希望的。现有技术暗示了地塞米诺可治疗这些癌症，但并不是通过诱导凋亡而进行的。关键点在于选择性凋亡的诱导，这是现有技术所预料不到的。发明概述本发明公开了一种导致癌细胞凋亡的化合物，这提供了一种特别有利的使癌细胞凋亡的疗法，并且所述化合物减少了细胞增殖。已经公开了地塞米诺是一种非竞争性NMDA受体阻断剂，除此以外，还表明其能够抑制NF κ B。然而，目前我们已经令人惊奇地证明，地塞米诺能够有效地结合于或间接地作用于大量至今仍不知道其与地塞米诺发生相互作用的蛋白质位点。这些蛋白质位点包括N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体、环氧合酶_2 (C0X-2)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)和核因子-κ B (NF κ B)。之前已经报道了地塞米诺在这些位点具有活性。然而之前没有报道的是，除在这些位点具有活性以外，地塞米诺还在以下位点具有活性，即，细胞周期蛋白依赖性激酶(例如，⑶Κ2/Α和⑶Κ5/ρ25)、组蛋白乙酰转移酶(HAT) 和法尼基转移酶。本发明进一步研究了作用机制，并且目前了解到，地塞米诺及其衍生物对很多癌细胞都有凋亡作用。因此，利用地塞米诺及其衍生物使除黑素瘤以外的癌细胞发生凋亡本身就是新颖的。由于发现地塞米诺可导致癌细胞的凋亡，因此，这提供了一种特别有利的疗法，其可减少细胞增殖并且导致细胞凋亡。更详细地，地塞米诺的已知的直接和间接的靶标为N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体地塞米诺原本被开发为神经保护剂。其神经保护作用是由于其能够阻断NMDA受体。它立体特异性地阻断NMDA受体，这通过与这样的位点发生相互作用，该位点接近但区别于非竞争性NMDA受体拮抗剂的位点，并区别于谷氨酸、甘氨酸和聚胺的识别位点。与其它一些非竞争性NMDA受体拮抗剂不同的是，地塞米诺不会产生影响精神状态的效果，并且通常在人体中具有良好的耐受性。环氧合酶-2(C0X-2)地塞米诺具有与其NMDA受体阻断能力无关的抗炎症以及抗氧化特性。该抗炎症活性与地塞米诺能够减少由环氧合酶-2 (COX-幻产生的PGE2的分泌有关。C0X-2是环氧合酶异构体中的一种，其中所述环氧合酶异构体与花生四烯酸(AA)代谢为前列腺素(PG)和其它类花生酸有关，其中类花生酸是一个已知的表现出炎症性质并且与炎症有关的化合物家族。大多数常见的NSAID(非留族抗炎症药物)通过对酶活性位点进行修饰来抑制COX 的活性，从而防止AA底物转化为PGE2 (参见文献Hinz B. et al，J. Pharm. Exp. Ther. 300 367-375,2002)。W02003/077832公开了地塞米诺所显示出的PGE2抑制活性不是在C0X-2 酶活性的水平上，而是发生在基因调控的水平上。肿瘤坏死因子α (TNF-α )已发现地塞米诺能够阻断TNF-α的产生或作用。这种抑制作用最可能发生在转录后的水平上。如国际专利申请W097/11668和W001/98289所公开的，已发现地塞米诺阻断了 TNF- α的产生或作用。由于在头部损伤模型中地塞米诺未影响TNF- α的mRNA水平，因此推测对细胞因子的抑制发生在转录后阶段(参见文献Siohami E. et al.，J. Neuroimmuno. 72 169-77，1997)。人TNF- α首先被翻译成一个27kd的跨膜前体蛋白，其被TNF- α转化酶(TACE)切割成17kd的分泌形式。在RT-PCR实验的基础上，Shoshany等人报道了地塞米诺对TNF- α 的mRNA没有显著影响，但是却显著降低了 TACE的mRNA水平，这支持了该药物在分泌抑制的水平上发挥作用的假设。核因子κ B (NF κ B)有实验证据表明，地塞米诺通过抑制IKB2的磷酸化和降解，来间接抑制核因子 κ B (NF κ B) οJuttler, E 等人 Q004) (Neuropharmacology 47(4) :580-92)提供了地塞米诺抑制NF κ B的证据。地塞米诺抑制了⑴NF- κ B抑制剂I κ B α的磷酸化和降解，以及NF- κ B 向细胞核的转运；地塞米诺降低了⑵NF-K B的转录活性以及(3) NF-κ B靶基因肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-6 (TNF- α和IL-6)的mRNA累积。地塞米诺的之前未知的靶标为细胞周期蛋白依赖性激酶⑶K2/A和⑶K5/p25直接检测时，地塞米诺在抗⑶Κ2和⑶Κ5方面没有显著的直接活性。然而我们相信，在存在更多的可能介导该作用的细胞内网络的情况下，CDK会受到间接的影响。组蛋白乙酰转移酶(HAT)组蛋白乙酰转移酶是一个已知的癌症靶标。没有检测数据表明地塞米诺是否在抗该靶标方面具有活性，但是在该靶标处具有预测活性，因此这将是有利的。法尼基转移酶法尼基转移酶是一个已知的癌症靶标。没有检测数据表明地塞米诺是否在抗该靶标方面具有活性，但是在该靶标处具有预测活性。本文描述了地塞米诺可作用于不止一种被认为在癌症和癌症治疗中重要的蛋白。 在这些作用中，有些是直接的，而有些是间接的。有着重要意义的是，地塞米诺可作用于很多靶标，这使该化合物在一系列癌症中是有益的。细胞系数据表明，地塞米诺在乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、非小细胞肺癌和成胶质细胞瘤中是有效的。因此，根据本发明的第一个方面，我们提供了一种治疗剂，该治疗剂能够同时、依次、或分别地作用于以下蛋白Ν-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、环氧合酶-2(C0X-2)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)、核因子-KB(NFkB)、细胞周期蛋白依赖性激酶(例如，⑶Κ2/Α和 CDK5/p25)、组蛋白乙酰转移酶(HAT)和法尼基转移酶。本发明的该方面尤其在以下方面是特别有益的其提供了用于结合上述蛋白的单一治疗剂。应当理解，本发明的一个具体方面提供了地塞米诺或其衍生物，其用于同时、依次、或分别地作用于以下蛋白Ν-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、环氧合酶-2(C0X-2)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)、核因子-KB(NFkB)、细胞周期蛋白依赖性激酶(例如，⑶Κ2/Α和 ⑶Κ5/ρ25)、组蛋白乙酰转移酶(HAT)和法尼基转移酶。因此，根据本发明的另一方面，我们提供了一种能够同时、依次、或分别地作用于以下蛋白Ν-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、环氧合酶-2(C0X_2)、肿瘤坏死因子α (TNF-α )、 核因子-κ B (NF κ B)、细胞周期蛋白依赖性激酶(例如，⑶Κ2/Α和⑶Κ5/ρ25)、组蛋白乙酰转移酶(HAT)和法尼基转移酶的治疗剂，该治疗剂用于癌细胞的凋亡，其中，所述癌细胞选自原发癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、淋巴瘤、间皮瘤、肝癌、 肝内胆管癌、食道癌、胰腺癌、胃癌(stomach cancer)、喉癌、脑癌、卵巢癌、睾丸癌、宫颈癌、 口腔癌、咽癌、肾癌、甲状腺癌(thyroid cancer)、子宫癌、膀胱癌、肝细胞癌、甲状腺肿瘤 (thyroid carcinoma)、骨肉瘤、小细胞肺癌、白血病、骨髓瘤、胃肿瘤(gastric carcinoma) 和转移癌中的一种或多种。如上文所述，地塞米诺可直接或间接地作用于上述蛋白质位点，这使得其成为一种用于多种癌细胞凋亡的合适的治疗剂。根据本发明的另一方面，我们提供了地塞米诺或其衍生物，其用于使患者的癌发生凋亡，其中，所述癌选自胰腺癌、成胶质细胞瘤、胃肿瘤、食道癌、卵巢癌、肾癌和甲状腺肿瘤中的一种或多种。根据本发明的另一方面，我们提供了地塞米诺或其衍生物，其用于使患者的癌发生凋亡，其中，所述癌选自原发癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、淋巴瘤、间皮瘤、肝癌、肝内胆管癌、食道癌、胰腺癌、胃癌、喉癌、脑癌、卵巢癌、睾丸癌、 宫颈癌、口腔癌、咽癌、肾癌、甲状腺癌、子宫癌、膀胱癌、肝细胞癌、甲状腺肿瘤、骨肉瘤、小细胞肺癌、白血病、骨髓瘤、胃肿瘤和转移癌中的一种或多种。因此，地塞米诺或其衍生物应是治疗有效量的。根据本发明，治疗有效量应当指凋亡作用的有效量。除凋亡作用以外，根据(特别是)癌症的性质，地塞米诺或其衍生物还可以提供其它的治疗癌症的特性，例如抑制肿瘤生成、抑制细胞增殖、诱导细胞毒性。从对地塞米诺及其衍生物的作用机制的描述中，应当认识到，根据本发明可对多种癌症进行凋亡作用方面的治疗。可述及的具体的癌包括但不限于乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、淋巴瘤、肝癌、肝内胆管癌、食道癌、胰腺癌、胃癌、喉癌、脑癌、卵巢癌、睾丸癌、宫颈癌、口腔癌、咽癌、肾癌、甲状腺癌、子宫癌、膀胱癌和转移癌。 可述及的更具体的癌包括选自胰腺癌、成胶质细胞瘤、胃肿瘤、食道癌、卵巢癌、肾癌和甲状腺肿瘤中的一种或多种的癌。可述及的更具体的癌包括选自原发癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、淋巴瘤和转移癌中的一种或多种的癌。因此，根据本发明的发生凋亡的癌细胞可以是癌变前的、恶性的、转移性的、或者多重耐药性的癌细胞， 以及它们的组合。特别的是，我们发现地塞米诺或其衍生物在转移性癌细胞的凋亡中是有效的。根据本发明的另一方面，我们提供了地塞米诺或其衍生物在制备用于使患者的癌凋亡的药物中的用途，其中，所述癌选自原发癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、 成胶质细胞瘤、淋巴瘤、间皮瘤、肝癌、肝内胆管癌、食道癌、胰腺癌、胃癌、喉癌、脑癌、卵巢癌、睾丸癌、宫颈癌、口腔癌、咽癌、肾癌、甲状腺癌、子宫癌、膀胱癌、肝细胞癌、甲状腺肿瘤、骨肉瘤、小细胞肺癌、白血病、骨髓瘤、胃肿瘤和转移癌中的一种或多种。在本发明的一个优选的实施方案中，提供了地塞米诺或其衍生物在制备用于使患者的癌凋亡的药物中的用途，其中，所述癌选自胰腺癌、成胶质细胞瘤、胃肿瘤、食道癌、卵巢癌、肾癌和甲状腺肿瘤中的一种或多种。在本发明的另一个优选的实施方案中，提供了地塞米诺或其衍生物在制备用于使患者的癌凋亡的药物中的用途，其中，所述癌选自原发癌、 乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、淋巴瘤和转移癌中的一种或多种。根据本发明的这个方面，我们提供了如上文所述的用途，其中，对患者施用的地塞米诺或其衍生物的量足够使地塞米诺的血浆浓度达到10 μ M至20 μ M。根据本发明的另一方面，我们提供了如上文所述的用途，其中，地塞米诺或其衍生物的量足以使治疗剂的血浆浓度达到至少 ο μ Μ,并且在患者体内维持至少2小时。根据本发明的另一方面，我们提供了一种治疗癌症的方法，其中，所述方法包括使癌凋亡，其包括向所需患者施用凋亡作用有效量的地塞米诺或其衍生物，其中，所述癌选自原发癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、淋巴瘤、间皮瘤、肝癌、肝内胆管癌、食道癌、胰腺癌、胃癌、喉癌、脑癌、卵巢癌、睾丸癌、宫颈癌、口腔癌、咽癌、肾癌、 甲状腺癌、子宫癌、膀胱癌、肝细胞癌、甲状腺肿瘤、骨肉瘤、小细胞肺癌、白血病、骨髓瘤、胃肿瘤和转移癌中的一种或多种。在本发明的一个优选的实施方案中，提供了一种如上文所述的治疗癌症的方法， 其中，所述癌选自胰腺癌、成胶质细胞瘤、胃肿瘤、食道癌、卵巢癌、肾癌和甲状腺肿瘤中的一种或多种。在本发明的另一个优选的实施方案中，提供了一种治疗如上文所述的原发癌、 乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、淋巴瘤和转移癌等癌症的方法。本发明尤其提供了一种治疗癌症的方法，其中，所述方法包括使癌凋亡，其包括施用治疗有效量的制剂，该制剂能够同时、依次、或分别地直接或间接地作用于以下蛋白Ν-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、环氧合酶-2(C0X_2)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)、核因子-K B (NF κ B)、细胞周期蛋白依赖性激酶(例如⑶Κ2/Α和⑶Κ5/ρ25)、组蛋白乙酰转移酶 (HAT)和法尼基转移酶。本发明的这个方面尤其在以下方面是特别有益的其提供了一种方法，该方法包括施用作用于上述蛋白的单一治疗剂。更具体而言，根据本发明的该方面的方法包括对需要施用该疗法的患者施用治疗有效量的地塞米诺或其衍生物。本发明的方法可包括施用足以抑制癌细胞的肿瘤生成的治疗有效量的地塞米诺或其衍生物。可选的或除此以外的是，所述方法可包括施用足以在癌细胞中诱导细胞毒性的治疗有效量的地塞米诺或其衍生物。可以向患者施用的治疗剂(例如地塞米诺)的量，(尤其)可以根据癌症的性质、 癌症的严重性等进行改变。因此，例如，向患者施用的地塞米诺的治疗有效量可足以使地塞米诺的血浆浓度达到10 μ M至20 μ Μ。更具体而言，所述方法可包括施用有效量的治疗剂，例如地塞米诺或其衍生物， 所述有效量足以使治疗剂的血浆浓度达到至少10 μ Μ，并且在患者体内维持至少2小时。我们还提供了一种同时、依次、或分别地作用于蛋白N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、环氧合酶-2(C0X_2)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)、核因子-κ B(NFkB)、细胞周期蛋白依赖性激酶(例如CDK2/A和CDK5/p25)、组蛋白乙酰转移酶(HAT)和法尼基转移酶的方法，该方法包括施用有效量的地塞米诺或其衍生物。根据本发明的另一方面，我们提供了一种包含地塞米诺或其衍生物的药物组合物，其中，所存在的地塞米诺或其衍生物的量足以使地塞米诺的血浆浓度达到ΙΟμΜ至 20 μ Mo我们还提供了一种包含地塞米诺或其衍生物的药物组合物，其中，地塞米诺或其衍生物的量足以使地塞米诺的血浆浓度达到至少10 μ Μ，并且在患者体内维持至少2小时。本发明预期，癌细胞可以是癌变前的、恶性的、原发的、转移性的、或多重耐药性的。可选的是，对癌症的治疗可包括通过使有效量的地塞米诺或其衍生物与癌细胞相接触，从而抑制癌细胞的肿瘤生成。抑制肿瘤生成还可以包括在癌细胞中诱导细胞毒性和/或细胞凋亡。此外，本发明的方法是有益的，尤其是因为与目前所使用的化疗剂相比，其显示出毒性的降低、副作用的减少和/或耐药性的降低。可进一步预期的是，可以将第二治疗剂和地塞米诺或其衍生物联合提供至癌细胞，从而治疗和/或抑制癌。第二治疗剂可以包括化疗剂、免疫治疗剂、基因治疗剂、或者放射治疗剂。当根据本发明的治疗方法中包含第二治疗剂时，该第二治疗剂可以分别、同时、 或依次与地塞米诺或其衍生物一起施用。虽然多种第二治疗剂或者其它治疗剂可用于与地塞米诺或其衍生物联合使用，但是优选的是，第二治疗剂或其它治疗剂可选自由化疗剂、免疫治疗剂、基因治疗剂和放射治疗剂所组成的组中。本文所使用的术语“衍生物”应包括地塞米诺的任何通常已知的衍生物，例如(尤其是)溶剂化物。制备、纯化和/或处理本文所述的化合物的相应溶剂化物可能是方便的或合乎需要的，其可以用于任何一种所述的用途/方法中。本文所使用的术语溶剂化物是指溶质(例如化合物或化合物的盐)与溶剂的复合物。如果溶剂是水，则溶剂化物可以称为水合物，例如，根据每分子底物中所存在的水分子的数量，可以为一水合物、二水合物、三水合物等。术语衍生物应尤其包括盐。合适的地塞米诺的盐是公知的，并且在现有技术中进行了描述。有机酸和无机酸以及碱的盐可以用于制备可药用的盐。所述酸包括但不限于氢氟酸、盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸、柠檬酸、琥珀酸、马来酸和棕榈酸。所述碱包括诸如氢氧化钠和氢氧化铵这样的化合物。本领域的技术人员熟知可以用于制备地塞米诺的可药用季铵衍生物的季铵化剂。其包括但不限于碘甲烷和碘乙烷以及硫酸盐。地塞米诺、其衍生物和/或它们的组合物本身是已知的，并且可以利用本领域技术人员已知的方法进行制备，或者可以通过商购获得。特别是，美国专利No. 4，876，276公开了地塞米诺及其制备方法。根据本发明的另一方面，我们提供了如上文所述的地塞米诺或其衍生物的用途或者方法，其中，将地塞米诺或其衍生物以与可药用的佐剂、稀释剂、或载体形成的混合物的形式进行施用。根据(尤其是)待治疗的癌症的性质，可以以多种方式施用地塞米诺或其衍生物。因此，可以局部、透皮、皮下、静脉、或经口施用地塞米诺或其衍生物。我们尤其提供了地塞米诺或其衍生物的用途，或者治疗方法，其包括局部施用地塞米诺或其衍生物。因此，在本发明的用途、方法和/或组合物中，可以以下形式提供化合物片剂、 胶囊、糖衣药丸、栓剂、悬浮液、溶液、注射液(例如静脉注射液、肌肉注射液、或腹膜内注射液)、植入剂、局部(例如透皮)制剂(例如，凝胶、乳剂、药膏、气雾剂、或聚合物体系)、或者吸入剂(例如气雾剂或粉末制剂)。适合经口施用的组合物包括片剂、胶囊、糖衣药丸、悬浮液、溶液和糖浆剂；适合对皮肤局部施用的组合物包括乳剂(例如水包油乳剂、油包水乳剂)、药膏、 凝胶、洗剂、软膏、润肤剂、胶态分散体、悬浮液、乳液、油、喷雾剂、泡沫、摩丝等。适合局部施用的组合物还可以包括(例如)由脂类或专用洗涤剂制成的脂质体载体。其它的佐剂、稀释剂、或载体的例子为用于片剂和糖衣药丸的是填充剂，例如乳糖、淀粉、微晶纤维素、滑石和硬脂酸； 润滑剂/助流剂，例如硬脂酸镁和胶体二氧化硅；崩解剂，例如淀粉乙醇酸钠和羧甲基纤维素钠；用于胶囊的是预糊化淀粉或乳糖；用于口腔或可注射溶液或灌肠剂的是水、二醇类、醇类、甘油、植物油；用于栓剂的是天然油或氢化油，或者蜡。可以通过(例如)透皮给药装置或合适的媒介物，或者通过(例如)结合至缓释膏药的软膏基质，来透皮施用所述的化合物或衍生物和/或它们的组合物，或者上述任何组合形式。这些装置是有益的，这是因为与(例如)口服或静脉注射药物相比，它们可以延长治疗期。透皮给药装置的例子可包括(例如)适于通过患者的皮肤释放化合物或物质的膏药、敷料、绷带或石膏。本领域技术人员熟知可用于透皮递送化合物或物质的材料和技术， 并且 GB2185187、US3249109、US3598122、US4144317、US4262003 和 US4307717 给出了示例性的透皮给药装置。下面仅通过实施例的方式对本发明进行说明。发明详述实施例1用于评价地塞米诺对细胞系凋亡的作用的体外检测试验方法在M小时的时间点上，对3种黑素瘤细胞系(A375、G-361、^^6_4)、2种乳腺癌细胞系(MCF7、MDA-MB-231)、成纤维细胞(46BR. 1G1)、结肠癌(HCT116)、前列腺癌(PC-3)、 成胶质细胞瘤(U373)和非小细胞肺癌(NSCLC) (DMS-114)进行检测。在37°C、5%湿CO2的条件下，在包含10% (ν/ν)加热灭活的胎牛血清(得自英国的Sigma公司)和2mM L-谷氨酸的RPMI 1640培养基(得自英国的Sigma公司) 中，对上述细胞系进行培养。收集、洗涤细胞，将其重悬于生长培养基中，并进行计数 (Beckman-Coulter Vi-CELL XR)。以 1. 6 X IO5 细胞 /ml 至 2. 4X IO5 细胞 /ml 的浓度、 12. 5 μ 1/孔的等分试样，将细胞铺在384组织培养板的中间的240个孔中。向外周的孔中等份加入50 μ 1生长培养基。每种细胞系准备2板。在37°C、5%湿CO2的条件下将上述细胞板培养过夜。在生长培养基中制备2倍于检测终浓度(125μΜ、31.3μΜ、7. 81μΜ、2. ΟΟμΜ、 0· 49 μ Μ、0· 12 μ Μ、0· 031 μ M和0. 008 μ Μ)的地塞米诺(DMS0的浓度在此稀释梯度内保持恒定，为 0.5% )。使用顺氯氨钼作为阳性对照。检测终浓度为10μ g/ml、2. 5μ g/ml、0. 63μ g/ml、 0. 156μ g/ml、0. 039 μ g/ml、0. 010μ g/ml、0. 002 μ g/ml 和 0. 0006μ g/ml。以每孔 12. 5μ 1 向板中加入地塞米诺或顺氯氨钼稀释液，做6个重复。将12. 5 μ 1生长培养基加入培养基对照孔中。在37°C、5%湿(X)2的条件下将上述细胞板孵育M小时。使用Apo-ONE 均质半胱天冬蛋白酶-3/7检测试剂盒检测半胱天冬蛋白酶3/7 的水平。在加入半胱天冬蛋白酶底物1小时、2小时、3小时和4小时之后，利用FlexStation II384酶标仪检测荧光。将上述4个时间点的读板结果用于分析。使用CellTiter-Blue (Promega)试剂，在同一个板上对每种细胞系进行细胞存活性检测平行实验。简言之，每孔加入25 μ 1 CellTiter-Blue (Promega)试剂。以500rpm震荡细胞板1分钟，之后将其在37°C、5% CO2中孵育4小时。禾Ij用FlexStation H384酶标仪 (激发波长570nm，发射波长600nm，截止波长590nm)检测荧光。在同一个图表中叠加显示地塞米诺和顺氯氨钼的细胞毒性效应。结果图 1-10 分别示出了 A375、G-361、W1C66-4、MCF7、MDA-MB-231、46BR· IGl、HCTl 16、 PC-3、U373和DMS-114细胞与顺氯氨钼或者地塞米诺共孵育M小时之后的凋亡诱导结果， 并且在表1中对该结果进行了总结。此外，还示出了细胞存活性的评价结果，其是采用显示细胞毒性的CellTiter-Blue 检测来进行检测的。顺氯氨钼被用作阳性对照，除U373MG和MDA-MB231 (其显示出了一定程度的对细胞毒性反应的抗性)以外，在所有细胞系中均观察到了细胞毒性反应，其IC5tl值大约为 5-20 μ g/ml 0在DMS 114细胞和PC3细胞中观察到不充分的剂量响应，因此不能够确定它们的IC5tl值。由于不充分的剂量曲线(6-361、丽沈6-4和PC3)或者差的半胱天冬蛋白酶 3/7诱导结果(MDA-MB231、MCF-7、HCT116、DMS114和U373MG)，因此不易于对凋亡的诱导进行量化。总体而言，三种黑素瘤细胞系(A375、G-361和WM266-4)、结肠癌细胞系(HCT116) 以及成纤维细胞系G6BrlGl)对顺氯氨钼的细胞毒性效应最敏感，其诱导了凋亡的增加以及细胞存活性的降低。地塞米诺在大多数细胞系中诱导了细胞毒性反应，其IC5tl值在10-25 μ M的范围内。由于不充分的剂量响应曲线(A375、G-361、PC3、46Br. IGl和DMS-114)或者不响应的细胞(MCF-HCT116和U373MG)，因此对所有的细胞系均未进行凋亡诱导的量化。凋亡的峰值响应发生在2. 5 μ M，并且在最高浓度为10 μ M时下降，这可能是由于细胞的溶解和损失造成的。总体而言，三种黑素瘤细胞系(A375、G-361和WlC66-4)、2种乳腺癌细胞系(MDA-MB231 和MCF7)以及前列腺癌细胞系(PC3M)对地塞米诺最敏感，而DMS 114和U373最不敏感。表1 结果数据总结本发明描述了一种治疗剂，其能够同时、依次、或分别地直接或间接地作用于以下蛋白N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、环氧合酶-2(COX-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子-κB(NFκB)、细胞周期蛋白依赖性激酶(例如，CDK2/A和CDK5/p25)、组蛋白乙酰转移酶(HAT)和法尼基转移酶。本发明尤其描述了作为治疗剂的地塞米诺，或其衍生物。