专利名称：Il-17家族细胞因子组合物及用途的制作方法
提供了涉及细胞因子再工程化(reengineering)的组合物和方法。在一个方面，本公开内容表征了一种分离的抗体(包括全长抗体、抗体片段和结构域)，所述抗体特异性地结合IL-17细胞因子多肽，例如，通过结合下述的一种或多种IL-17F 的大约氨基酸 21-41、42-78、82-103 或 104-133 ;IL_17A 的大约氨基酸 21-39、40-76,80-101 或 102-131 ;IL_17C 的大约氨基酸 44_65、78_117、121-143 或 153-179 ；IL-17D 的大约氨基酸 32-53、66-105、110-131 或 134-163 ;IL_17E 的大约氨基酸 27-49、50-87,93-114 和 / 或 120-148 ；或 IL-17B 的大约氨基酸 32_53、66_105、110-131 或135-158，根据图4D中的编号。在一个实施方案中，所述抗体结合在IL-17细胞因子的区域I中的表位，其中区域I对应着IL-17F的大约氨基酸21-41、IL-17A的大约氨基酸21-39、IL-17C的大约氨基酸44-65、IL-17D的大约氨基酸32-53、IL-17E的大约氨基酸27-49或IL-17B的大约氨基酸32-53，它们根据图4D中的编号。在一个实施方案中，所述抗体结合在IL-17细胞因子的区域2中的表位，其中区域2对应着IL-17F的大约氨基酸42-78、IL-17A的大约氨基酸40-76、IL-17C的大约氨基酸78-117、IL-17D的大约氨基酸66-105、IL-17E的大约氨基酸50-87或IL-17B的大约氨基酸66-105，它们根据图4D中的编号。在一个实施方案中，所述抗体结合在IL-17细胞因子的区域3中的表位，其中区域3对应着IL-17F的大约氨基酸82-103、IL-17A的大约氨基酸80-101、IL-17C的大约氨基酸121-143、IL-17D的大约氨基酸110_131、IL_17E的大约氨基酸93-114或IL-17B的大约氨基酸110-131，它们根据图4D中的编号。在一个实施方案中，所述抗体结合在IL-17细胞因子的区域4中的表位，其中区域4对应着IL-17F的对应着大约氨基酸104-133、IL-17A的大约氨基酸102-131、IL-17C的大约氨基酸153-179、IL-17D的大约氨基酸134-163、IL-17E的大约氨基酸120-148或IL-17B的大约氨基酸135-158，它们根据图4D中的编号。在一个方面，本公开内容表征了一种分离的抗体(包括全长抗体、抗体片段和结构域)，其特异性地结合IL-17RA (SEQ ID NO: 14)的氨基酸22-36、氨基酸83-96、氨基酸118-147、氨基酸 152-179 或氨基酸 256-271。在另一个方面，本公开内容表征了一种分离的抗体(包括全长抗体、抗体片段和结构域)，其特异性地结合IL-17RB (SEQ ID NO: 15)的氨基酸25-39、氨基酸86-100、氨基酸126-155、氨基酸160-187或氨基酸254-269，和/或SEQ ID NO: 15的氨基酸32-44 (例如，38-44),82-98 (例如，88-98)和 252-269 (例如，256-263)。在另一个方面，本公开内容表征了一种分离的抗体(包括全长抗体、抗体片段和结构域)，其特异性地结合IL-17RC (SEQ ID NO: 16)的氨基酸15-30、氨基酸70-84、氨基酸96-124、氨基酸 129-156 或氨基酸 227-237，和 / 或 SEQ ID NO: 16 的氨基酸 24_35、78_91 和248-257。本公开内容也表征了 一种分离的白介素-17F (IL-17F)多肽，其中一个或多个选自下述的氨基酸被突变成任何其它氨基酸或被删除SEQ ID NO: 12的大约21-41、42-78、82_103和104-133，且例如其中所述多肽包括与SEQ IDNO: 12具有至少90、92、94、95、96、97或98%同一性、但不具有ιοο%同一11"生的序列； 一种分离的白介素-17A (IL-17A)多肽，其中一个或多个选自下述的氨基酸被突变成任何其它氨基酸或被删除SEQ ID勵:2的大约21-39、40-76、80-101和102-131，且例如其中所述多肽包括与SEQ IDNO: 2具有至少90、92、94、95、96、97或98%同一性、但不具有100%同一11"生的序列； 一种分离的白介素-17B (IL-17B)多肽，其中一个或多个选自下述的氨基酸被突变成任何其它氨基酸或被删除SEQ ID N0:4的32-53、66-105、110-131和135-158，且例如其中所述多肽包括与SEQ ID N0:4具有至少90、92、94、95、96、97或98%同一性、但不具有100%同一11"生的序列； 一种分离的白介素-17C (IL-17C)多肽，其中一个或多个选自下述的氨基酸被突变成任何其它氨基酸或被删除SEQ ID N0:6的大约44-65、78-117、121-143和153-179，且例如其中所述多肽包括与SEQ IDNO: 6具有至少90、92、94、95、96、97或98%同一性、但不具有100%同一1丨生的序列； 一种分离的白介素-17D (IL-17D)多肽，其中一个或多个选自下述的氨基酸被突变成任何其它氨基酸或被删除SEQ ID N0:8的32-53、66-105、110-131和134-163，且例如其中所述多肽包括与SEQ ID N0:8具有至少90、92、94、95、96、97或98%同一性、但不具有100%同一11"生的序列； 一种分离的白介素-17E (IL-17E)多肽，其中一个或多个选自下述的氨基酸被突变成任何其它氨基酸或被删除SEQ ID NO: 10的27-49、50-87、93-114和120-148，且例如其中所述多肽包括与SEQ ID NO: 10具有至少90、92、94、95、96、97或98%同一性、但不具有100%同一性的序列。所述多肽可以包括另外的特征，包括N-和C-端序列，诸如标签和免疫球蛋白恒定结构域。在另一个方面，本公开内容表征了一种组合物，所述组合物包括第一种和第二种IL-17多肽，其中所述第一种和第二种多肽中的至少一种是修饰的IL-17多肽(例如，突变的IL-17多肽)。例如，所述组合物包括与第二种IL-17多肽可操作地连接的第一种修饰的IL-17多肽(例如，突变的)。在一个实施方案中，所述第二种IL-17多肽也是修饰的(例如，突变的)IL_17多肽。在另一个实施方案中，所述第二种IL-17多肽与天然存在的IL-17多肽(例如，成熟的人 IL-17，例如，IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E 和 IL-17F)相同。所述第一种和第二种多肽可以相互作用，以形成与IL-17 二聚体(例如，单链二聚体)相对应的结构。第一种多肽可以位于第二种多肽的N-端，反之亦然。所述多肽链还可以包括其它元件；例如，它可以是融合蛋白。相对于参照IL-17多肽(诸如人IL-17，例如，IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E和IL-17F)，一种或两种多肽可以是修饰的，例如，突变的。在一个实施方案中，所述第一种和第二种多肽是相同多肽链的组分。在一个实施方案中，所述第一种和第二种多肽通过卷曲螺旋结构域或亮氨酸拉链可操作地相连。在一个实施方案中，所述第一种多肽包括修饰的IL-17A多肽(例如，突变的人IL-17A，其与SEQ ID NO: 2或20具有例如至少85、90、95或98%同一性)，且所述第二种多肽包括选自下述的修饰的 IL-17 多肽IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E 和 IL-17F(例如，突变的人IL-17细胞因子，其与这样的细胞因子的天然成熟形式具有例如至少85、90、95或98%同一性，例如，如在本文中公开的)，或与天然成熟形式(例如，SEQ ID N0:2、4、6、8、10、12或20)具有100%同一性的多肽。因此，示例性的组合物包括与A/A同二聚体或A/F异二聚体相对应的多肽。在一个实施方案中，所述第一种多肽包括修饰的IL-17F多肽(例如，突变的人IL-17F，其与SEQ ID NO: 12具有例如至少85、90、95或98%同一性)，且所述第二种多肽包括选自下述的修饰的 IL-17 多肽IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E 和 IL-17F (例如，突变的人IL-17细胞因子，其与这样的细胞因子的天然成熟形式具有例如至少85、90、95或98%同一性，例如，如在本文中公开的)，或与天然成熟形式(例如，SEQ ID N0:2、4、6、 8、10、12或20)具有100%同一性的多肽。因此，示例性的组合物包括与F/F同二聚体或A/F异二聚体相对应的多肽。在一个实施方案中，所述第一种多肽包括修饰的IL-17细胞因子多肽(例如，突变的人 IL-17B、IL-17C、IL-17D 或 IL-17E，其与 SEQ ID N0:4、6、8 或 10 具有例如至少 85、90,95%同一性)，且所述第二种多肽包括选自下述的修饰的IL-17多肽IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E和IL-17F (例如，突变的人IL-17细胞因子，其与这样的细胞因子的天然成熟形式具有例如至少85、90、95%同一性，例如，如在本文中公开的)。因此，示例性的组合物包括与B/B、C/C、D/D、E/E同二聚体和各种异二聚体相对应的多肽。在另一个方面，本公开内容表征了一种组合物，其包含分离的多肽，所述多肽包含IL-17RA的IL-17结合决定簇，其中所述多肽与IL-17RA的胞外结构域不同。例如，所述 IL-17 结合决定簇选自IL-17RA (SEQ IDNO: 14)的氨基酸 22_36、83_96、118-147、152-179和256-271。所述结合决定簇可以是肽，例如，包括IL-17RA的氨基酸22-36、83-96、118-147、152-179和256-271或由其组成的肽。所述结合决定簇可以是，例如，IL-17F、IL-17A或IL-17C结合决定簇。在一个实施方案中，所述多肽能够结合IL-17F和/或IL-17A。所述多肽与IL-17A的结合可以包括，与一个或多个选自下述的氨基酸接触IL-17A的大约21-39、40-76、80-101和102-131。所述多肽与IL-17C的结合可以包括，与一个或多个选自下述的氨基酸接触IL-17C的大约44-65、78-117、121-143和153-179。在一些实施方案中，所述多肽能够形成半胱氨酸结基序或四螺旋束基序。在一个实施方案中，所述多肽可操作地结合IL-17RA多肽(例如，IL-17RA多肽的胞外区)和IL-17RC多肽(例如IL-17RC多肽的胞外区)。在另一个方面，本公开内容表征了一种组合物，其包含分离的多肽，所述多肽包含IL-17RC的IL-17结合决定簇，其中所述多肽与IL-17RC的胞外结构域不同。所述多肽可以与结合配偶体可操作地结合，所述结合配偶体选自IL-17RA多肽(例如，IL-17RA多肽的胞外区)和IL-17RC多肽(例如，IL-17RC多肽的胞外区)。所述多肽可以结合IL-17细胞因子，例如，结合IL-17A并接触一个或多个选自下述的氨基酸IL-17A的大约21_39、40_76、80-101和102-131，或结合IL-17C并接触一个或多个选自下述的氨基酸IL_17C的大约44-65、78-117、121-143 和 153-179。在另一个方面，本公开内容表征了一种IL-17R结合蛋白，其包括第一和第二IL-17亚基，且其中所述亚基形成二聚体，所述二聚体具有第一面和第二面，所述第一面能够与第一 IL-17受体亚基相互作用，所述第二面与对应的天然IL-17蛋白相比，具有减少的与第二 IL-17受体亚基相互作用的能力或不具有该能力。例如，所述第一亚基和第二亚基彼此不同。每个亚基可以与成熟的IL-17细胞因子具有至少85、87、90、92、94、95、96、97或98%同一性，所述成熟的IL-17细胞因子是例如人IL-17细胞因子(SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12或20)或鼠IL-17细胞因子，例如，对于两个亚基而言，相同的参照细胞因子，或不同的参照细胞因子(例如，IL-17A和IL-17F)。在某些实施方案中，每个亚基与成熟的IL-17细胞因子在与SEQ IDN0:127的1-127 或 SEQ ID NO:20 的 1-126 相对应的区域中具有至少 85、87、90、92、94、95、96、97 或98%同一性。在一个实施方案中，每个亚基与成熟的人IL-17细胞因子(SEQ IDN0:2、4、6、8、 10、12或20)相比具有1、2、3、4、5、6、7或更多个置换或删除，优选地少于12、10、9、8、7、6或5个。在一个实施方案中，一个亚基与成熟的人IL-17细胞因子(SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12或20)相比具有I至5个、7个或8个突变，另一个亚基与成熟的人IL-17细胞因子(SEQID N0:2、4、6、8、10、12或20)相比具有至少1、2、3、4或5个氨基酸的C-端删除和任选的1-5个置换。在一个实施方案中，所述二聚体的第二面包含至少1、2或3个突变，例如，至少I、2或3个置换。例如，所述二聚体的第二面具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个突变(例如，置换)。所述突变可以位于一个或多个位点。所述第一面可以是这样的，它与成熟的IL-17细胞因子相比不含有任何突变，所述成熟的IL-17细胞因子例如成熟的人IL-17细胞因子(SEQ ID N0:2、4、6、8、10、12 或 20)。在一个实施方案中，所述二聚体的第二面包含至少1、2或3个在位点I中的突变，例如，至少1、2或3个置换。例如，所述二聚体的第二面具有I至3个、4个、5个或6个在位点I中的突变(例如，置换)。在一个实施方案中，所述二聚体的第二面包含至少1、2或3个在位点2中的突变，例如，至少1、2或3个置换。例如，所述二聚体的第二面具有I至3个、4个、5个或6个在位点2中的突变(例如，置换)。在一个实施方案中，所述二聚体的第二面包含至少1、2或3个在位点3中的突变，例如，至少1、2或3个置换。例如，所述二聚体的第二面具有I至3个、4个、5个或6个在位点3中的突变(例如，置换)。所述第一亚基和第二亚基可以共价地连接，例如，它们可以是相同多肽链的组分。例如，它们可以通过柔性连接物相连。在一个实施方案中，所述结合蛋白具有小于1%的IL-17A/A的细胞因子活性。例如，它基本上不激动IL-17受体,例如,基于本文所述的试验。在一个实施方案中，所述结合蛋白对IL-17RA或IL-17RC的亲和力不超过100倍，50倍，20倍，10倍弱于IL-17A/A、IL-17F/F或IL-17A/F。通常，所述结合蛋白不会结合IL-17RA和IL-17RC并形成含有结合蛋白以及IL-17RA和IL-17RC的复合物。所述结合蛋白可以具有本文所述的其它特征和性质。本文所述的结合蛋白可以包括2个IL-17亚基，其中每个亚基与成熟的IL-17细胞因子(例如，人IL-17细胞因子(SEQ ID NO: 2、4、6、8、10、12或20))具有至少85、87、90、92、94、95、96、97或98%同一性，并且共同地，所述亚基相对于这样的成熟的IL-17多肽包括至少2、3、4、5或更多个下述的置换或删除 在第一亚基中，在与R47 (根据在SEQ ID NO: 12中的编号)相对应的位置处的置换(例如，R47E、R47A 或 R47D)， 在第一亚基中，在与S65 (根据在SEQ ID NO: 12中的编号)相对应的位置处的置换(例如，S65K、S65R 或 S65W)， 在第一亚基中，在与W68 (根据在SEQ ID NO: 12中的编号)相对应的位置处的置换(例如，W68A、W68V、W68S、W68Q 或 W68N)， 在第一亚基中，在与R102 (根据在SEQ ID NO: 12中的编号)相对应的位置处的置换(例如，R102A、R102V、R102S 或 R102T), 在第二亚基中，在与N89 (根据在SEQ ID NO: 12中的编号)相对应的位置处的置换(例如，N89A或N89V)， 在第二亚基中，在与Q95 (根据在SEQ ID NO: 12中的编号)相对应的位置处的置换(例如，Q95A或Q95W)，和 在第二亚基中，在与127-132 (根据在SEQ ID NO: 12中的编号)相对应的位置处的一个或多个置换或删除(例如，至少与128-132相对应的位置的删除)。例如，针对上面指出的位置，所述结合蛋白可以具有至少一个或多个的下述突变组合(例如，配对)(R47、S65)、(R47、W68)、(R47、R102)、(S65、W68)、(S65、R102)、(R47、N89)、(R47、Q95)、(N89、R102)、(N89、删除 128-132)、(R47、N89、R102)、(N89、Q95)、(W68、R102)、(N89、W68)、(R47、S65、N89)、(R47、W68、N89)、(R47、N89、R102)、(R47、W68、N89、删除 128-132)、(R47、S65、N89、删除 128-132)、(S65、N89、删除 128-132)、(R47、S65、删除128-132)和(N89、Q95、删除128-132)。所述结合蛋白可以具有本文所述的其它特征和性质。还表征了核酸，其包括编码本文所述的多肽的序列，包括编码本文所述的一种或多种细胞因子亚基的序列。所述核酸可以另外包括载体序列、以及转录和翻译控制序列。还表征了含有这样的核酸的宿主细胞，和包括表达这样的核酸(例如，在细胞中)的方法。所述方法可以另外包括，回收蛋白，例如，通过从细胞或细胞培养基中纯化。现在，将在下面的详细描述和权利要求书中更具体地描述其它特征和优点。附图简述图I是IL-17RA-IL-17F复合物的结构的示意图。通过球-和-棒(ball-and-stick)表示法显示了与IL-17F(链A和链B)结合的IL-17RA，N-连接的聚糖的条带图。IL-17RA包含2个通过短螺旋连接物相连的纤连蛋白III型结构域(Dl和D2)。右侧的图显示了绕着y-轴旋转60°的复合物。图2的示意图证实了 IL-17F与IL-17RA的结合由3个独特界面介导。(A)位点2，IL-17RA Dl C-C’环插入在N-端螺旋区和IL-17F链B的链I和2之间。N-端螺旋在未结合构象和结合构象之间经历构象变化。(B)位点2,knob-in_hole IL-17F结合槽互补性的表面表示。(C)位点1，IL-17RA Dl N-端结合位点。(D)位点3，IL-17RA D2结合位点。接触残基被显示为棒模型。虚线表示氢键和盐桥。图3是异二聚的IL-17信号传递复合物的装配和模型。(A)通过表面等离子体共振(SPR)测量IL-17受体-细胞因子亲和力。将IL-17RA、IL-17RB和IL-17RC固定化在SPR芯片表面上，测量IL-17A、IL-17F或IL-17E的结合亲和力。在指明的情况下，然后测量第二受体与在芯片上的预装配的受体-细胞因子复合物的结合亲和力。对于动力学实验(前3行)，将代表性的SPR传感图显示为彩色线，将曲线拟合显示为黑线。针对应答(RU，共振单位)和以秒(S)为单位的时间绘图。注射浓度显示在传感图的右侧。对于平衡实验(第4行)，针对代表性实验的最大应答(RU)和注射浓度(M)绘图；将曲线拟合显示为黑线，将解离常数(Kd)标记为垂直线。插图显示了结合事件的图形表示。将Kd报告为至少2个独立实验的平均值土平均值标准误差。(B)异二聚的信号传递复合物形成模型。假定两种受体以相同朝向结合IL-17F，建立第二受体(红紫色)的模型。受体的C-端结构域(D2)变得紧邻，如通过框突出显示的。图4的示意图显示了结合界面和保守的IL-17残基。IL-17F的表面表示是白色，条带形式的IL-17RA是黄色。(A)IL-17RA-IL-17F接触残基用青色突出显示。(B)将在IL-17A和IL-17F中保守的残基映射到IL-17F结构上；以点刻法表示相同的残基，以浅粉红色表示保守置换。(C)指明了在4、5或6个IL-17细胞因子家族成员中相同的残基，还鉴定了在所 有6个细胞因子之间的保守置换。(D)人IL-17细胞因子的比对。在IL-17RA-IL-17F结构中形成接触的残基用在IL-17F序列上和在比对的下方的黑框突出显示。以点刻法表示在4、5或6个细胞因子中相同的残基；还用标记在所有6个细胞因子中相同的残基；用‘’标记保守基团。所述序列分别对应着SEQ ID N0:12、2、6、8、10和4。图5是IL-17RA-IL-17F受体复合物与同二聚的半胱氨酸-结生长因子受体复合物的对比。(A) IL-17RA-IL-17F、(B) P75NTR-NGF 和(C) TrkA-NGF 被显示为条带模型。详细描述为了更容易地理解本发明，在下面以及在本说明书中定义了某些术语和短语。定义本文使用的术语“有效量”表示，引起希望的生物学应答所需的量。药物的有效量可以随诸如下述因素而变化希望的生物学终点、要递送的药物、任何其它有活性的或无活性的成分的组成等。术语“表达”在本文中用于表示，从DNA产生多肽的过程。所述过程包括，基因转录成mRNA，和该mRNA翻译成多肽。根据它所使用的背景，“表达”可能表示RNA、蛋白或二者的产生。本文使用的术语“基因产物”是指，由该基因编码的RNA (例如，信使RNA (mRNA)或微RNA (miRNA))或蛋白。本文使用的术语“分离的”表示，基本上纯的分子。分离的蛋白可以是基本上纯的，例如，60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%不含有其它不同的蛋白分子。本文使用的术语“调节”和“调控”通常表示，被特异性地靶向的基因(包括它们的RNA和/或蛋白产物)、信号传递途径、细胞和/或被靶向的表型的下调(即，抑制或压抑)，或被靶向的基因的上调(即，诱导或增加)。例如，“调节”和“调控”可以表示IL-17受体信号传递的下调。“患者”或“受试者”是指哺乳动物,例如人,其具有疾病或病症(诸如炎性疾病)或处于发展所述疾病或病症的风险中，或其具有或被诊断为具有炎性疾病，或其能够以其它方式从本文所述的组合 物和方法获益。本文使用的术语“减少”表示，表达或基因产物活性的任何抑制、减少、下降、压抑、下调或阻止。例如，表达或活性的水平可以是，例如，未抑制的表达或活性的100%或小于100%，例如小于95%、小于90%、小于85%、小于80%、小于75%、小于70%、小于65%、小于60%、小于55%、小于50%、小于45%、小于40%、小于35%、小于30%、小于25%、小于20%、小于15%、小于10%或小于5%ο术语“治疗”或“医治”或“减轻”或“改善”表示，治疗性处理和预防性或防止性措施，其中目的是阻止或减慢(减轻)被靶向的病理学状况或障碍。术语“IL-17受体”是指，结合IL-17细胞因子的蛋白，诸如IL-17RA、IL-17RB、IL-17RC、IL-17RD和IL-17RE受体，特别是这些受体的人同种型和这些受体的胞外结构域。如下计算2个序列之间的“同源性”或“序列同一性”(这2个术语在本文中可互换地使用)。为了最佳比较的目的，比对序列(例如，为了最佳比对，可以在第一个和第二个氨基酸或核酸序列之一或二者中引入缺口)。将最佳比对确定为使用Needleman和Wunsch算法获得的最佳评分，所述算法在EMBOSS包的Needle算法中实现，其使用Blossum62评分矩阵，缺口罚分为10，缺口延伸罚分为I。参见Needleman, S. B.和Wunsch, C. D. (1970)J. Mol. Biol. 48, 443-453; Kruskal, J. B. (1983)An overview of sequence comparison,见D. Sankoff 和 J. B. Kruskal,(编),Time warps, string edits and macromolecules: thetheory and practice of sequence comparison,第 1-44 页 Addison Wesley,工具可来自欧洲生物信息学研究所(European Bioinformatics Institute,英国剑桥)EMBOSS:欧洲分子生物学开放软件包(2000), Rice, P.等人，A.，Trends in Genetics 16，(6)第 276—277页，且可在下述位置在线得到http://www. ebi. ac. uk/Tools/emboss/align/index, html和 http://emboss, open-bio. org/wiki/Appdoc:Needle0 然后比较在对应的氨基酸位置或核苷酸位置处的氨基酸残基或核苷酸，且2个序列之间的同一性百分比是所述序列共有的相同位置的数目的函数。免疫调节多肽稚T细胞(MtfveT cells)受到刺激后会分化成专门的效应细胞，这主要是通过分泌的细胞因子的作用。通常，基于它们的细胞因子表达特性，已经认为T辅助(TH)细胞属于2个效应细胞谱系之一 TH1和TH2细胞，它们分别调节细胞和体液T细胞免疫(I)。更近的工作描述了 Thl7细胞，即效应TH细胞的第三谱系，其不同于Thl和Th2谱系，且事实上受到Thl和Th2谱系的产物的拮抗(2，3)。以它们的特征性细胞因子白介素17 (IL-17)命名的该Th细胞子集似乎已经进化成适应性免疫系统的一个分支，其专门增强对抗胞外细菌和某些真菌的宿主保护，因为Thl或Th2应答可能不能有效地控制这些微生物(4，5)。诱导分化和调节Thl7细胞的体内稳态的细胞因子(S卩IL-23、IL-6和转化生长因子-β(TGF-β ))的不同组织来源，与IL-17受体在造血细胞和非造血细胞上的存在一起，已经凸显了在适应性和先天性免疫细胞之间存在的复杂关系。尽管Thl7细胞效应子功能的完整范围仍然在开发中，但已经将Thl7细胞促进的强炎性应答与许多以前归因于Thl或Th2细胞的自身免疫和炎性障碍(包括类风湿性关节炎、多发性硬化和银屑病)的发病机制相关联(4)。除了IL-17A 以外，IL-17 家族的成员包括 IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E (也称作IL-25)和IL-17F。IL-17家族的所有成员具有类似的蛋白结构，包括4个高度保守的半胱氨酸残基。IL-17A 和 F 最密切相关，其次是 IL-17B (29%)、IL_17D (25%)、IL_17C (23%)，IL-17E与IL-17A的相关性最低(17%)。这些细胞因子在哺乳动物中都是相当保守的，在人和小鼠同系物之间保守的氨基酸多达62-88%。与其它细胞因子没有序列相似性。基于IL-17F的晶体结构，预测6种结构上相关的IL-17细胞因子(IL-17A —一 IL-17F)形成同二聚折叠(或异二聚折叠，在IL-17A-F的情况下)，其与半胱氨酸-结生长因子诸如神经生长因子(NGF)的折叠具有同源性(7，8)。Thl7细胞-衍生的IL-17A和IL-17F在该家族内具有最大同源性，并且需要IL-17RA和IL-17RC来进行信号传递(9，10)。尽管已经证实，成纤维细胞、上皮和内皮细胞共表达IL-17RA和IL-17RC，但T细胞未被证实会表达IL-17RC，而仅表达IL-17RA (11)。之前认为，淋巴细胞不会对IL-17做出响应；但是，Flavell和同事报道，T细胞实际上可以直接地对IL-17做出响应(12)。部分地通过它们作为Thl7谱系的效应细胞因子的作用，IL-17家族的细胞因子提 供操纵免疫和炎性应答的创新方案。由此，IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E、IL-17F和它们的受体的拮抗剂(单独地或一起地，诸如本文所述的拮抗剂)，可用于治疗性地处理炎性疾病，诸如多发性硬化、炎性肠病(IBD)、类风湿性关节炎、银屑病和癌症。此外，IL-17家族成员活性的拮抗剂，诸如本文所述的拮抗剂，可用于治疗性地处理其它炎性疾病。人IL-17细胞因子的一些示例性的序列如下。IL-17A。一个示例性的人IL-17A细胞因子序列如下，且被描述于Uniprot 标识符 Q16552 (参见网络资源 uniprot. org 和 The UniProt Consortium,Nucleic Acids Res.D142-D148 (2010)) MTPGKTSLVSLLLLLSLEAI VKAGITIPRNPGCPNSEDKN FPRTVMVNLNIHNRNTNTNPKRSSDYYNRS TSPffNLHRNE DPERYPSVIffEAKCRHLGCINADGNVDYHMNSVPIQQEIL VLRREPPHCP NSFRLEKILV SVGCTCVTPIVHHVA(SEQ IDNO I)另一个示例性的序列包括上述序列的氨基酸24-155 (缺少IL-17A信号序列的形式)，或在图4D中所示的序列ITIPRNPGCPNSEDKNFPRTVMVNLNIHNRNTNTNPKRSSDYYNRSTSPWNLHRNEDPERYPSVIWEAKCRHLGCINADGNVDYHMNSVPIQQEILVLRREPPHCPNSFRLEKILVSVGCTCVTPIVHHVA(SEQ ID NO 2).所述序列还可以包括在SEQ ID NO:2的第一个残基之前的甘氨酸。本文参照SEQID NO: 2描述的每个IL-17A序列也都可以包括在异亮氨酸之前的该甘氨酸，所述异亮氨酸是在SEQ ID N0:2中的第一个列出的氨基酸。也可以使用其它残基。其它示例性的IL-17A序列包括鼠(Q62386 )、大鼠(Q61453 )和牛序列(Q687Y7 )。可以在来自任何物种(例如，如本文所述)的IL-17A序列中产生本文所述的突变和修饰。IL-17B。一个示例性的人IL-17B细胞因子序列如下，且被描述于Uniprot标识符Q9UHF5:MDffPHNLLFLLTISIFLGLGQPRSPKSKRKGQGRPGPLAPGPHQVPLDLVSRMKPYARMEEYERNIEEMVAQLRNSSELAQRKCEVNLQLWMSNKRSLSPWGYSINHDPSRIPVDLPEARCLCLGCVNPFTMQEDRSMVSVPVFSQVPVRRRLCPPPPRTGPCRQRAVMETIAVGCTCIF(SEQ ID NO 3).另一个示例性的序列包括上述序列的氨基酸21-180 (缺少IL-17B信号序列的形式)，或在图4D中所示的序列RSPKSKRKGQGRPGPLAPGPHQVPLDLVSRMKPYARMEEYERNIEEMVAQLRNSSELAQRKCEVNLQLWMSNKRSLSPWGYSINHDPSRIPVDLPEARCLCLGCVNPFTMQEDRSMVSVPVFSQVPVRRRLCPPPPRTGPCRQRAVMETIAVGCTCIF(SEQ ID NO 4).IL-17C。一个示例性的IL-17C细胞因子序列如下，且被描述在Uniprot标识符Q9P0M4:MTLLPGLLFLTWLHTCLAHHDPSLRGHPHSHGTPHCYSAEELPLGQAPPHLLARGAKWGQALPVALVSSLEAASHRGRHERPSATTQCPVLRPEEVLEADTHQRSISPWRYRVDTDEDRYPQKLAFAECLCRGCIDARTGRETAALNSVRLLQSLLVLRRRPCSRDGSGLPTPGAFAFHTEFIHVPVGCTCVLPRSV(SEQ ID NO 5).另一个示例性的序列包括上述序列的氨基酸19-197 (缺少IL-17C信号序列的形式)，或在图4D中所示的序列 HHDPSLRGHPHSHGTPHCYSAEELPLGQAPPHLLARGAKWGQALPVALVSSLEAASHRGRHERPSATTQCPVLRPEEVLEADTHQRSISPWRYRVDTDEDRYPQKLAFAECLCRGCIDARTGRETAALNSVRLLQSLLVLRRRPCSRDGSGLPTPGAFAFHTEFIHVPVGCTCVLPRSV(SEQ ID NO 6).IL-17D。一个示例性的IL-17D细胞因子序列如下，且被描述在Uniprot标识符Q8TAD2:MLVAGFLLALPPSWAAGAPRAGRRPARPRGCADRPEELLEQLYGRLAAGVLSAFHHTLQLGPREQARNASCPAGGRPADRRFRPPTNLRSVSPWAYRISYDPARYPRYLPEAYCLCRGCLTGLFGEEDVRFRSAPVYMPTVVLRRTPACAGGRSVYTEAYVTIPVGCTCVPEPEKDADSINSSIDKQGAKLLLGPNDAPAGP(SEQ IDN0:7)。另一个示例性的序列包括上述序列的氨基酸16-202 (缺少IL-17D信号序列的形式)，或在图4D中所不的序列AGAPRAGRRPARPRGCADRPEELLEQLYGRLAAGVLSAFHHTLQLGPREQARNASCPAGGRPADRRFRPPTNLRSVSPWAYRISYDPARYPRYLPEAYCLCRGCLTGLFGEEDVRFRSAPVYMPTVVLRRTPACAGGRSVYTEAYVTIPVGCTCVPEPEKDADSINSSIDKQGAKLLLGPNDAPAGP(SEQ ID NO 8).IL-17E。一个示例性的IL-17E细胞因子序列(也称作IL-25)如下且被描述在Uniprot 标识符 Q9H293:MRERPRLGEDSSLISLFLQVVAFLAMVMGTHTYSHWPSCCPSKGQDTSEELLRWSTVPVPPLEPARPNRHPESCRASEDGPLNSRAISPWRYELDRDLNRLPQDLYHARCLCPHCVSLQTGSHMDPRGNSELLYHNQTVFYRRPCHGEKGTHKGYCLERRLYRVSLACVCVRPRVMG(SEQ ID NO 9).另一个示例性的序列包括上述序列的氨基酸33-177 (缺少IL-17E信号序列的形式)，或在图4D中所示的序列THTYSHWPSCCPSKGQDTSEELLRWSTVPVPPLEPARPNRHPESCRASEDGPLNSRAISPWRYELDRDLNRLPQDLYHARCLCPHCVSLQTGSHMDPRGNSELLYHNQTVFYRRPCHGEKGTHKGYCLERRLYRVSLACVCVRPRVMG(SEQ IDNO 10).IL-17F。一个示例性的IL-17F细胞因子序列如下，且被描述在Uniprot标识符Q96PD4:MTVKTLHGPAMVKYLLLSILGLAFLSEAAARKIPKVGHTFFQKPESCPPVPGGSMKLDIGIINENQRVSMSRNIESRSTSPWNYTVTWDPNRYPSEVVQAQCRNLGCINAQGKEDISMNSVPIQQETLVVRRKHQGCSVSFQLEKVLVTVGCTCVTPVIHHVQ (SEQ ID N0:11)。所述细胞因子的翻译可以在前述序列的METl或METll处开始。另一个示例性的序列包括上述序列的氨基酸31-163 (缺少IL-17F信号序列的形式)，或在图4D中所示的序列RKIPKVGHTFFQKPESCPPVPGGSMKLDIGIINENQRVSMSRNIESRSTSPWNYTVTWDPNRYPSEVVQAQCRNLGCINAQGKEDISMNSVPIQQETLVVRRKHQGCSVSFQLEKVLVTVGCTCVTPVIHHVQ(SEQ ID NO 12).所述序列与图4D—起提供了用于鉴别IL-17家族成员中的残基的位置的有用的默认参照。其它示例性的IL-17F序列包括鼠(Q7TNI7)、大鼠(Q5BJ95)和猪序列(Q5BJ95)。几种其它的哺乳动物IL-17细胞因子的序列也是已知的。参见，例如，Uni pro t条目:Q62386 (鼠 IL-17A)、Q61453 (大鼠 IL_17A)、Q687Y7 (牛 IL_17A)、Q7TNI 7 (鼠 IL-17F)、Q5BJ95 (大鼠 IL-17F)、Q9QXT6 (鼠 IL_17B)、Q9EQI 6 (仓鼠 IL_17B)、Q8K4C5 (鼠 IL-17C)、 Q8K4C4 (鼠 IL-17D)和 Q9VHH8 (鼠 IL-17E)。IL-17RA。一个示例性的人IL-17RA受体序列如下，且被描述在Uniprot标识符Q96F46 MGAARSPPSAVPGPLLGLLLLLLGVLAPGGASLRLLDHRALVCSQPGLNCTVKNSTCLDDSWIHPRNLTPSSPKDLQIQLHFAHTQQGDLFPVAHIEffTLQTDASILYLEGAELSVLQLNTNERLCVRFEFLSKLRHHHRRffRFTFSHFVVDPDQEYEVTVHHLPKPIPDGDPNHQSKNFLVPDCEHARMKVTTPCMSSGSLWDPNITVETLEAHQLRVSFTLWNESTHYQILLTSFPHMENHSCFEHMHHIPAPRPEEFHQRSNVTLTLRNLKGCCRHQVQIQPFFSSCLNDCLRHSATVSCPEMPDTPEPIPDYMPLWVYWFITGISILLVGSVILLIVCMTWRLAGPGSEKYSDDTKYTDGLPAADLIPPPLKPRKVffIIYSADHPLYVDVVLKFAQFLLTACGTEVALDLLEEQAISEAGVMTffVGRQKQEMVESNSKIIVLCSRGTRAKWQALLGRGAPVRLRCDHGKPVGDLFTAAMNMILPDFKRPACFGTYWCYFSEVSCD⑶VPDLFGAAPRYPLMDRFEL·VYFRIQDLEMFQPGRMHRVGELS ⑶NYLRSPGGRQLRAALDRFRDWQVRCPDWFECENLYSADDQDAPSLDEEVFEEPLLPPGTGIVKRAPLVREPGSQACLAIDPLVGEEGGAAVAKLEPHLQPRGQPAPQPLHTLVLAAEEGALVAAVEPGPLADGAAVRLALAGEGEACPLLGSPGAGRNSVLFLPVDPEDSPLGSSTPMASPDLLPEDVREHLEGLMLSLFEQSLSCQAQGGCSRPAMVLTDPHTPYEEEQRQSVQSDQGYISRSSPQPPEGLTEMEEEEEEEQDPGKPALPLSPEDLESLRSLQRQLLFRQLQKNSGffDTMGSESEGPSA(SEQ ID NO 13)还提供了一种IL-17RA多肽，其中信号序列被去除(例如，被加工)，或其中氨基酸1-31或1-32被删除，并任选地存在其它删除、插入和置换。一种示例性的IL-17RA多肽如下SLRLLDHRALVCSQPGLNCTVKNSTCLDDSWIHPRNLTPSSPKDLQIQLHFAHTQQGDLFPVAHIEWTLQTDASILYLEGAELSVLQLNTNERLCVRFEFLSKLRHHHRRWRFTFSHFVVDPDQEYEVTVHHLPKPIPD⑶PNHQSKNFLVPDCEHARMKVTTPCMSSGSLWDPNITVETLEAHQLRVSFTLWNESTHYQILLTSFPHMENHSCFEHMHHIPAPRPEEFHQRSNVTLTLRNLKGCCRHQVQIQPFFSSCLNDCLRHSATVSCPEMPDTPEPIPDYMPLWVYWFITGISILLVGSVILLIVCMTWRLAGPGSEKYSDDTKYTDGLPAADLIPPPLKPRKVWIIYSADHPLYVDVVLKFAQFLLTACGTEVALDLLEEQAISEAGVMTWVGRQKQEMVESNSKIIVLCSRGTRAKWQALLGRGAPVRLRCDHGKPVGDLFTAAMNMILPDFKRPACFGTYWCYFSEVSCD⑶VPDLFGAAPRY PLM DRFEEVYFRIQDLEMFQPGRMHRVGELS⑶NYLRSPGGRQLRAALDRFRDWQVRCPDWFECENLYSADDQDAPSLDEEVFEEPLLPPGTGIVKRAPLVREPGSQACLAIDPLVGEEGGAAVAKLEPHLQPRGQPAPQPLHTLVLAAEEGALVAAVEPGPLADGAAVRLALAGEGEACPLLGSPGAGRNSVLFLPVDPEDSPLGSSTPMASPDLLPEDVREHLEGLMLSLFEQSLSCQAQGGCSRPAMVLTDPHTPYEEEQRQSVQSDQGYISRSSPQPPEGLTEMEEEEEEEQDPGKPALPLSPEDLESLRSLQRQLLFRQLQKNSGWDTMGSESEGPSA(SEQ ID NO: 14)，并代表下文实施例1_3中使用的编号。另一种示例性的IL-17RA多肽包括IL-17RA的胞外结构域，例如，SEQ ID NO: 13的大约氨基酸33-320。其它示例性的IL-17RA序列包括鼠(Q60943)、大鼠(NP_001101353. 2，GenBank)和牛序列(ΧΡ_603383· 5, GenBank)。IL-17RB。一个示例性的人IL-17RB受体序列如下，且具有Q9NRM6UniProt标识
付MSLVLLSLAALCRSAVPREPTVQCGSETGPSPEWMLQHDLIPGDLRDLRVEPVTTSVATCDYSILMNVSWVLRADASIRLLKATKICVTGKSNFQSY SCVRCNYTEAFQTQTRPSGGKWTFSYIGFPVELNTVYFIGAHNIPNANMNEDGPSMSVNFTSPGCLDHIMKYKKKCVKAGSLWDPNITACKKNEETVEVNFTTTPLGNRYMALIQHSTIIGFSQVFEPHQKKQTRASVVIPVTCDSEGATVQLTPYFPTCGSDCIRHKGTVVLCPQTGVPFPLDNNKSKPGGWLPLLLLSLLVATWVLVAGIYLMWRHERIKKTSFSTTTLLPPIKVLVVYPSEICFHHTICYFTEFLQNHCRSEVILEKffQKKKIAEMGPVQWLATQKKAADKWFLLSNDVNSVCDGTCGKSEGSPSENSQDLFPLAFNLFCSDLRSQIHLHKYVWYFREIDTKDDYNALSVCPKYHLMKDATAFCAELLHVKQQVSAGKRSQACHDGCCSL(SEQ ID NO 15)也参见Tian 等人，Oncogene 19:2098-2109 (2000)和 Shi 等人，J. Biol.Chem. 275:19167-19176 (2000)。还提供了一种IL-17RB多肽，其中信号序列被去除(例如，被加工)，或其中氨基酸1-17被删除，并任选地存在其它删除、插入和置换。另一种示例性的IL-17RB多肽包括IL-17RB的胞外结构域，例如，Q9NRM6的大约氨基酸18-292。IL-17RC。一个示例性的人IL-17RC受体序列如下，且具有Q8NAC3UniProt标识
付MPVPWFLLSLALGRSPVVLSLERLVGPQDATHCSPVSLEPWGDEERLRVQFLAQQSLSLAPVTAATARTALSGLSGADGRREERGRGKSWVCLSLGGSGNTEPQKKGLSCRLWDSDILCLP⑶IVPAPGPVLAPTHLQTELVLRCQKETDCDLCLRVAVHLAVHGHWEEPEDEEKFGGAADSGVEEPRNAS LQAQVVLSFQAYPTARCVLLEVQVPAALVQFGQSVGSVVYDCFEAALGSEVRIffSYTQPRYEKELNHTQQLPDCRGLEVWNSIPSCWALPffLN VSADiiDNVHLVLNVSEEQHFGLSLYWNQVQGPPKPRWHKNLTGPQIITLN HTDLVPCLCIQVWPLEPDSVRTNICPFREDPRAHQNLWQAARLQLLTLQSWLLDAPCSLPAEAALCWRAPGGDPCQPLVPPLSWENVTVDKVLEFPLLKGHPNLCVQVNSSEKLQLQECLWADSLGPLKDDVLLLETRGPQDNRSLCALEPSGCTSLPSKASTRAARLGEYLLQDLQSGQCLQLWDDDLGALWACPMDKYIHKRffALVffLACLLFAAALSLILLLKKDHAKGffLRLLKQDVRSGAAARGRAALLLYSADDSGFERLVGALASALCQLPLRVAVDLWSRRELSAQGPVAWFHAQRRQTLQEGGVVVLLFSPGAVALCSEWLQDGVSGPGAHGPHDAFRASLSCVLPDFLQGRAPGSYVGACFDRLLHPDAVPALFRTVPVFTLPSQLPDFLGALQQPRAPRSGRLQERAEQVSRALQPALDSYFHPPGTPAPGRGVGPGAGPGAGDGT(SEQ ID NO 16).还提供了一种IL-17RC多肽，其中信号序列被去除(例如，被加工)，或其中氨基酸1-20被删除，并任选地存在其它删除、插入和置换。另一种示例性的IL-17RC多肽包括IL-17RC的胞外结构域，例如，SEQ ID NO: 14的大约氨基酸21-538。其它示例性的IL-17RC 序列包括鼠(Q8K4C2)、大鼠(ΧΡ_216240· 5，GenBank)和牛序列(ΝΡ_001068646· 1，GenBankXIL-17RD。一个示例性的人IL-17RD受体序列被描述在Uniprot标识符Q8NFM7。 也参见 Xiong 等人，J. Biol. Chem. 278:50273-50282(2003)。还提供了一种 IL-17RD 多肽，其中号序列被去除(例如，被加工)，或其中氨基酸1_16被删除，并任选地存在其它删除、插入和置换。另一种示例性的IL-17RD多肽包括IL-17RD的胞外结构域，例如，Q8NFM7的大约氨基酸17-299。IL-17RE。一个示例性的人IL-17RE受体序列被描述在Uniprot标识符Q8NFR9。还提供了一种IL-17RE多肽，其中信号序列被去除(例如，被加工)，或其中氨基酸1-23被删除，并任选地存在其它删除、插入和置换。另一个示例性的IL-17RE多肽包括IL-17RE的胞外结构域，例如，Q8NFR9的大约氨基酸24-454。本发明提供了 IL-17受体信号传递的新拮抗剂，例如，IL-17RA、IL-17RB、IL-17RC、IL-17RD和IL-17RE信号传递中的一种或多种的拮抗剂，以及这类拮抗剂在治疗炎性疾病和自身免疫疾病中的应用。本发明还提供了 IL-17细胞因子信号传递(例如，IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E和IL-17F信号传递)的新拮抗剂，以及它们在治疗炎性疾病和自身免疫疾病中的应用。本发明的拮抗剂(其示例性的成员是针对IL-17RA的拮抗剂，且包括本发明的中 和抗-IL-17RA设计者细胞因子拮抗剂)可以用于阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17A、IL-17F或IL-17A/F或其任何组合的活性，从而用于治疗炎症和炎性疾病，诸如多发性硬化、癌症(特别是特征在于IL-17和/或IL-23的表达的癌症)、银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎、自身免疫眼疾病、内毒素血症、IBS和炎性肠病(IBD)、结肠炎、哮喘、C0PD、囊性纤维化、同种异体移植物排斥、免疫介导的肾疾病、肝胆疾病、动脉粥样硬化、肿瘤生长的增进、或变性关节病、动脉粥样硬化和本文公开的其它炎性病症。本发明提供了分离的多肽，其结合IL-17配体和/或受体的接触表面，从而阻止它们的生产性相互作用。更具体地，本发明提供了这样的多肽其结合IL-17配体和/或受体，并抑制炎性介质在表达IL-17受体的细胞中的产生。5种IL-17受体(IL-17RA—IL-17RE)与任何已知的受体不具有同源性，并表现出相当大的序列差异。它们全都包含含有纤连蛋白III型(FnIII)结构域的胞外结构域，以及细胞质SEF/IL-17R (SEFIR)结构域，后者表现出与Toll/IL_lR (TLR)结构域的松散同源性(13，14)。IL-17受体介导的信号传递事件不同于由I型四螺旋细胞因子的更广泛已知的受体触发的那些信号传递事件(15，16)。象TLR刺激一样，IL-17受体刺激导致NF- κ B和促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)的活化。但是，IL-17受体信号传递不利用相同的膜近端接头分子集合进行TLR信号传递；IL-17R需要接头Actl，后者也含有SEFIR结构域(17-19)。IL-17受体的这些独特的信号传递性质使得TH-17细胞能够充当先天性和适应性免疫细胞之间的桥梁。在机理上，荧光共振能量转移(FRET)研究已经提示，IL-17RA可以作为预先形成的二聚体存在于细胞表面上，其在IL-17结合后发生构象变化，以与IL-17RC形成异二聚信号传递复合物。但是，同二聚的IL-17细胞因子如何与2种不同受体配对的分子基础仍然未知(14，20)。本文提供的结构和生物化学分析首次实现了 IL-17系统的特异性拮抗剂的合理设计。基于该分析，我们提供了一系列拮抗剂，所述拮抗剂可用于阻止IL-17信号传递和用于治疗具有多种疾病的哺乳动物。本发明的优选实施方案包括结合IL-17R或IL-17细胞因子的结合肽、蛋白和它们的任何片段或变换，它们可互换地称作“ IL-17R拮抗剂”、“ IL-17拮抗剂”、“ IL-17R中和实体”、“IL-17R设计者细胞因子拮抗剂”和“IL-17设计者细胞因子拮抗剂”。特别地，在一些实施方案中，这样的结合肽或蛋白能够特异性地结合人IL-17R，并被称作“IL-17R结合蛋白”。此外，这些结合肽或蛋白能够调节与IL-17有关的生物学活性，例如，拮抗IL-17受体的IL-17活化，因而可用于治疗不同的疾病和病理学状况，诸如炎症和免疫相关的疾病。示例性的拮抗剂具有小于200、50、20或IOnM的IC50。在另一个实施方案中，本发明涉及一种分离的多核苷酸，其编码本发明的多肽，其中所述多肽能够结合 IL-17R (例如，IL-17RA、IL-17RB、IL-17RC、IL-17RD 或 IL-17RE)，并减少它的信号传递能力。本发明也提供了融合蛋白，其包含本发明的拮抗剂和免疫球蛋白部分，例如，免疫球蛋白结构域或区域。在这样的融合蛋白中，所述免疫球蛋白部分可以是免疫球蛋白重链恒定区，诸如人F。片段。本发明还包括编码这样的融合蛋白的分离的核酸分子。
本发明也提供了蛋白缀合物，其包含与聚乙二醇聚合物缀合的本发明的拮抗剂。 本发明还包括药物组合物，其包含药学上可接受的载体和本文所述的IL-17R拮抗剂。在另一个方面，本发明涉及一种用于治疗炎性疾病的方法，所述炎性疾病的特征在于IL-17和/或IL-23和/或IFN- Y在哺乳动物受试者中升高的表达，所述方法包括给所述受试者施用有效量的IL-17信号传递拮抗剂。 在另一个实施方案中，本发明涉及一种用于抑制炎性介质在哺乳动物细胞中的产生的方法，其中用IL-17R的拮抗剂处理所述细胞或它的培养基。在另一个方面，本发明涉及一种用于治疗炎性疾病的方法，所述炎性疾病的特征在于IL-17和/或IL-23和/或IFN- Y在哺乳动物受试者中升高的表达，所述方法包括给所述受试者施用有效量的IL-17信号传递拮抗剂。本发明的典型方法包括，治疗哺乳动物的病理学状况或疾病的方法，所述病理学状况或疾病源自增加的或增强的IL-17和/或IL-23和/或IFN- Y表达和/或活性或与其有关。在所述治疗方法中，可以施用本发明的拮抗剂，其优选地减少各自的受体活化。所述方法涉及IL-17R的拮抗剂的应用，所述拮抗剂通过阻断IL-17R复合物形成而减少信号传递。本发明的拮抗剂(例如，IL-17R的拮抗剂)也可用于制备药物和药剂，所述药物和药剂用于治疗免疫相关疾病和炎性疾病，包括例如，系统性红斑狼疮、关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、银屑病、中枢神经系统和周围神经系统的脱髓鞘疾病(诸如多发性硬化、特发性脱髓鞘性多神经病或格-巴二氏综合征)、炎性肠病、结肠炎、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、谷蛋白敏感性肠病、自身免疫眼疾病、癌症、肿瘤疾病、动脉粥样硬化和血管产生。在一个具体的方面，这样的药物和药剂包含治疗有效量的IL-17R拮抗剂和药学上可接受的载体。优选地，所述混合物是无菌的。在另一个实施方案中，本发明涉及一种用于抑制IL-17产生和/或维持的方法，其中用IL-17R拮抗剂处理T细胞。在另一个实施方案中，本发明提供了一种降低哺乳动物中的T-淋巴细胞的活性的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用IL-17R拮抗剂，诸如IL-17R结合蛋白，其包含与IL-17细胞因子序列同源的序列，其中哺乳动物中的T-淋巴细胞活性被降低。在另一个实施方案中，本发明提供了一种减少哺乳动物中的T-淋巴细胞的增殖的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用IL-17R拮抗剂，诸如IL-17R结合蛋白，其包含与IL-17细胞因子序列同源的序列，其中T-淋巴细胞在哺乳动物中的增殖被减少。本文也描述了用于产生它们的方法，其中这些方法包括在适合表达所述抗体的条件下，培养包含载体的宿主细胞，所述载体含有适当的编码核酸分子，并从细胞培养物回收所述抗体。IL-17R结合蛋白IL-17细胞因子可以包括至少3个在它的受体结合面之一上接触IL-17R的位点。IL-17通常包括2个亚基(本文命名为链A和B)，每个亚基为特定受体结合面贡献氨基酸。术语“链A”和“链B”的使用仅仅是为了索引。例如，在使用单链形式的实施方案中，“链A”可以置于“链B”的C-端，或者，它可以置于“链B”的N-端。结合IL-17RA的IL-17界面包括3个位点(位点I、位点2和位点3),所述位点包 括下述接触残基，如在表I中显示的(根据IL-17F和SEQ IDNO: 12的编号)表I
... 链 A链.B'
故良 I MIi I-25, LYSl 151LE29, 1LE3 L TRP58, ASN61.
TYR63, PROM. SER65, GLU66, VAL100, ARG102, HIS 104,
VAL109, PHHl! I
仗表 2 GLN94, GLN95, GLU96,GLN36, ARG37, MET40, SER41,
LYSI i 5. LEU117ASN43, GLU45. TYR54, VAL56,
GLU66，VAL68, VALl 18位点 3 I.RU75, II..R86, SBRS7, ASNS9.VlBT40, ARG42, II.R44, ARG47^
VAL91, VAL125，PRO 127,
VAL128,1LE129, HIS 130
HIS131, VALI32某些残基位于2个邻近位点的连接处，因此列于两个位点中。几个界面残基在结合IL-17RA后被埋藏，如在下面的实施例20的表中所显示的。在一个方面，本公开内容表征了一种IL-17R结合蛋白，其包含含有2个亚基的IL-17细胞因子，其中由所述2个亚基形成的二聚体的一个受体结合面包括一个或多个置换，例如，至少2个或3个置换，例如，非保守置换或本文所述的置换。例如，所述细胞因子在上面表I中鉴别的位置处具有至少1、2、3、4、5、6或7个置换(或删除)，例如2_10个、2_7个或3-10个或3-6个。在某些情况下，一个细胞因子亚基与另一个亚基的差别在于至少1、2、
3、4、5、6或7个置换(或删除)。例如，在IL-17R结合蛋白中，2个受体结合面可以包括不同的氨基酸，例如，至少1、2、3、4、5、6或7个差异，例如，在与表I中的那些相对应的位置处。
一个或两个亚基可以具有一个或多个保守置换和/或一个或多个非保守置换。通常，至少一个亚基或两个亚基与成熟的人IL-17(例如，SEQ ID NO: 2、4、6、8、10、12或20)具有至少90、92、94、95、96、97或98%同一性，但不具有100%同一性。在一个实施方案中，任一个亚基与成熟的人IL-17都不具有100%同一性，例如，它们与它们所源自的人IL-17相差至少1、2或3个氨基酸。在一个实施方案中，一个亚基不同于成熟的人IL-17,而另一个亚基与成熟的人IL-17相同。在某些实施方案中，在亚基中的置换不是至对应的鼠蛋白中的残基的置换。位点I在一个实施方案中，IL-17R结合蛋白包含含有2个亚基的IL-17细胞因子，其中一个受体结合面的位点I包括一个或多个突变，例如，至少2个或3个突变，例如，非保守突变或本文所述的突变。例如，一个或多个下述的位点I残基(基于IL-17F和SEQ ID NO: 12的编号而鉴别)被突变 M A MET25 和 LYSl 15 ;和链 B :ILE29、ILE 31、TRP58、ASN61、TYR63、PR064、SER65、GLU66、VAL100, ARG102、HI S104、VAL109 和 PHE111,和在如图 4D 所示的 IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D和IL-17E中的对应残基。在一个实施方案中，所述结合蛋白包括至少一个在位点I的前述链A残基之一中的突变和至少一个在前述链B残基之一中的突变。可以在位点I中获得的一些示例性突变包括链A中的MET25可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，MET25突变为中性亲水残基、小的脂族残基、带电荷的残基或芳族残基。例如，MET25突变为Trp或Tyr。可以突变MET25，以破坏表面附近的疏水包装，例如，通过突变为带电荷的残基或大的芳族残基。针对SEQ ID N0:2的VAL23、SEQ ID NO:4的ARG36、SEQIDN0:6的LEU48、SEQ ID NO:8的LEU36和SEQ ID NO: 10的LEU33，可以进行相应的突变或非保守的突变。链B中的ILE29可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ILE29突变为中性亲水残基、小的脂族残基、带电荷的残基或芳族残基。针对SEQID NO:2的ILE27，可以进行相应的突变或非保守的突变。链B中的ILE31可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ILE31突变为小的脂族残基、带电荷的残基或芳族残基。针对SEQ ID N0:2的ASN29，可以进行相应的突变或非保守的突变。链B中的TRP58可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，TRP58突变为小的脂族残基。针对SEQ ID NO: 2的GLU56、SEQ ID N0:4的HIS85、SEQ ID NO:6 的 THR97、SEQ ID NO:8 的 TYR85 和 SEQ ID NO: 10 的 ARG67，可以进行相应的
突变或非保守的突变。链B中的ASN61可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ASN61突变为脂族残基、带电荷的残基或芳族残基。针对SEQ ID N0:2的GLU59、SEQ ID N0:4 的 SER88、SEQ ID NO:6 的 ASP100、SEQ ID NO:8 的 ALA88 和 SEQ ID NO:10 的ASN70，可以进行相应的突变或非保守的突变。链B中的TYR63可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，TYR63突变为脂族残基、中性亲水残基或带电荷的残基。例如，TYR63突变为Ala或 Lys。针对 SEQ ID NO: 2 的 TYR61、SEQ ID NO:4 的 ILE90、SEQ ID NO:6 的 TYR102、SEQID NO:8的TYR90和SEQ ID NO: 10的LEU72，可以进行相应的突变或非保守的突变。链B中的PR064可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，PR064突变为甘氨酸、脂族残基、中性亲水残基、带电荷的残基或芳族残基。针对 SEQ ID N0:2 的 PR062、SEQ ID N0:4 的 PR091、SEQ ID NO:6 的 PR0103、SEQ ID NO:8 的PR091和SEQ ID NO: 10的PR073，可以进行相应的突变或非保守的突变。链B中的SER65可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，SER65突变为脂族残基、特别是大的脂族残基、带电荷的残基或芳族残基。例如，SER65 突变为 Lys 或 Trp。针对 SEQ ID NO: 2 的 SER63、SEQ ID NO: 4 的 VAL92、SEQ ID NO: 6的GLN104、SEQ ID NO:8的ARG92和SEQ ID NO: 10的GLN74，可以进行相应的突变或非保守的突变。链B中的VAL100可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨 基酸。例如，VAL100突变为中性亲水残基、大的脂族残基、带电荷的残基或芳族残基。针对SEQ ID NO:2 的 LEU98、SEQ ID NO:4 的 ARG128、SEQ ID NO:6 的 LEU140、SEQ ID NO:8 的LEU128和SEQ ID NO: 10的PHE111，可以进行相应的突变或非保守的突变。链B中的ARG102可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ARG102突变为脂族残基、中性亲水残基、酸性残基或芳族残基。例如，ARG102突变为 Ala、Ser、Gln 或 Asn。针对 SEQ ID NO: 2 的 ARG100、SEQ ID NO:4 的 ARG130、SEQ IDN0:6 的 ARG142、SEQ ID NO: 8 的 ARG130 和 SEQ ID NO: 10 的 ARG113，可以进行相应的突变。链B中的HIS104可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，HIS104突变为脂族残基或酸性残基。例如，HIS104突变为Glu或Asp。针对SEQ ID NO:2 的 PR0102、SEQ ID NO:4 的 PR0136、SEQ ID NO:6 的 PR0153、SEQ ID NO:8 的CYS134和SEQ ID NO: 10的GLY121，可以进行相应的突变或非保守的突变。链B中的VAL109可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，VAL109突变为中性亲水残基、大的脂族残基、带电荷的残基或芳族残基。链B中的PHElll可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，PHEl 11突变为小的脂族残基、中性亲水残基或带电荷的残基。例如，PHEl 11突变为 Ala。针对 SEQ ID NO:2 的 PHE109、SEQ ID NO:4 的 GLN143、SEQ ID N0:6 的 PHE160、SEQ ID N0:8的TYR141和SEQ ID NO: 10的LEU128，可以进行相应的突变或非保守的突变。链B中的GLU66可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，GLU66突变为脂族残基、中性亲水残基、碱性残基或芳族残基。例如，进行突变以破坏 GLU66 的氢键键合。针对 SEQID NO: 2 的 VAL64、SEQ ID NO:4 的 ASP93、SEQ ID NO:6的LYS105,SEQID NO:8的TYR93和SEQ ID NO: 10的ASP75，可以进行相应的突变或非保守的突变。链A中的LYS115可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，LYS115突变为脂族残基、中性亲水残基、酸性残基或芳族残基。例如，LYS115突变为 Ala。针对 SEQ ID NO:2 的 LYS113、SEQ ID NO:4 的 MET147、SEQ ID N0:6 的 PHE164、SEQ ID N0:8的TYR145和SEQ ID NO: 10的LEU132，可以进行相应的突变或非保守的突变。位点2在一个实施方案中，IL-17R结合蛋白包含含有2个亚基的IL-17细胞因子，其中一个受体结合面的位点2包括一个或多个突变，例如，至少2个或3个突变，例如，非保守突变或本文所述的突变。例如，一个或多个下述的位点2残基(基于IL-17F和SEQ ID NO: 12的编号而鉴别)被突变:链 A :GLN94、GLN95、GLU96、LYS115 和 LEUl 17 ;和链 B :GLN36、ARG37、MET40、SER41、ASN43、GLU45、TYR54、VAL56、GLU66、VAL68 和 VALl 18，和在如图 4D 所示的IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D和IL-17E中的对应残基。在一个实施方案中，所述结合蛋白包括至少一个在位点2的前述链A残基之一中的突变和至少一个在前述链B残基之一中的突变。可以在位点2中进行的一些示例性突变包括链B中的GLN36可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，GLN36突变为脂族残基、带电荷的残基或芳族残基。例如，突变GLN36以破坏该残基的氢键键合。针对 SEQ ID N0:2 的 THR34、SEQ ID NO:4 的 MET47、SEQ ID N0:6 的 GLY59、SEQ ID N0:8的PR047和SEQ ID NO: 10的SER44，可以进行相应的突变或非保守的突变。链B中的ARG 37可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ARG37突变为脂族残基、中性亲水残基、酸性残基或芳族残基。例如，ARG37突变 为 Ala 或 Glu。针对 SEQ ID NO: 2 的 ASN35、SEQ ID NO:4 的 VAL48、SEQ ID N0:6 的 ARG60、SEQ ID N0:8的ARG48和SEQ ID NO: 10的CYS45，可以进行相应的突变或非保守的突变。链B中的MET40可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，MET40突变为中性亲水残基、小的脂族残基、带电荷的残基或芳族残基。针对SEQID NO:2 的 ARG38、SEQ ID NO:4 的 LEU5USEQ ID NO:6 的 ARG63、SEQ ID NO:8 的 ALA51 和SEQ ID NO: 10的SER48，可以进行相应的突变或非保守的突变。例如，可以将SEQ IDNO:2的ARG 38和SEQ ID NO: 6的ARG63突变成Glu、Asp、Gln、Asn、Thr或Ser，或突变成破坏它的氢键键合或形成盐桥的能力的另一种残基。链B中的SER41可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，SER41突变为脂族残基、带电荷的残基或芳族残基。例如，SER41突变为Ala、Trp、Tyr、Arg或Lys。针对SEQ IDN0:2的SER39，可以进行相应的突变或非保守的突变。链B中的ASN43可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ASN43突变为脂族残基、带电荷的残基或芳族残基。例如，ASN43突变为Glu或Asp。针对 SEQ ID N0:2 的 ASP41、SEQ ID NO:4 的 MET70、SEQ ID NO:6 的 ASP82、SEQ IDNO:8的PR070和SEQ ID NO: 10的PR052，可以进行相应的突变或非保守的突变。例如，可以将 SEQ ID N0:2 的 ASP41 突变成 I I e、Leu、Tyr、Arg 或 Lys。链B中的GLU45可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，GLU45突变为脂族残基或芳族残基。针对SEQID NO:2的TYR43、SEQ ID NO:4的ASN72、SEQ ID N0:6 的 HI S84、SEQ IDN0:8 的 ASN72 和 SEQ ID NO: 10 的 ASN54，可以进行相应的突变或非保守的突变。链B中的TYR54可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，TYR54突变为脂族残基、中性亲水残基或带电荷的残基。针对SEQ ID N0:2的LEU52、SEQ ID N0:4 的 TYR81、SEQ IDN0:6 的 TYR93、SEQ ID NO: 8 的 TYR81 和 SEQ ID NO: 10的TYR63，可以进行相应的突变或非保守的突变。链B中的VAL56可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，VAL56突变为中性亲水残基、大的脂族残基、带电荷的残基或芳族残基。针对SEQID NO:2 的 ARG54、SEQ ID NO:4 的 ILE83、SEQ ID NO:6 的 VAL95、SEQ ID NO:8 的 ILE83 和SEQ ID NO: 10的LEU65，可以进行相应的突变或非保守的突变。链B中的VAL68可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，VAL68突变为中性亲水残基、大的脂族残基、带电荷的残基或芳族残基。例如，VAL68 突变为 Gin、Asn、Ser 或 Thr。针对 SEQ ID NO: 2 的 TRP66、SEQ ID NO:4 的 PR095、SEQ ID N0:6 的 ALA107、SEQ ID NO:8 的 PR095 和 SEQ ID NO: 10 的 TYR77，可以进行相应的
突变或非保守的突变。链A中的GLN94可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，GLN94突变为脂族残基、带电荷的残基或芳族残基。针对SEQ ID N0:2的GLN92、SEQ ID NO:4 的 PHE122、SEQ ID NO:6 的 LEU134、SEQ ID NO:8 的 TYR122 和 SEQ ID NO: 10的TYR105，可以进行相应的突变或非保守的突变。链A中的GLN95可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，GLN95突变为脂族残基、带电荷的残基或芳族残基。例如，GLN95突变为Asp、Glu、Ala 或 Trp。针对 SEQ ID NO:2 的 GLN93、SEQ ID NO:4 的 SER123、SEQ ID N0:6 的 GLN135、SEQ ID N0:8的MET123和SEQ ID N0:10的HI S106，可以进行相应的突变或非保守的突变。链A中的GLU96可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，GLU96突变为脂族残基、碱性残基或芳族残基。针对SEQ ID NO: 2的GLU94、SEQID NO:4 的 GLN124、SEQ ID NO:6 的 SER136、SEQ ID NO:8 的 PR0124 和 SEQ ID NO: 10 的ASN107，可以进行相应的突变或非保守的突变。链A中的LEU117可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，LEU117突变为中性亲水残基、小的脂族残基、带电荷的残基或芳族残基。针对SEQ ID N0:2 的 LEU115、SEQ ID NO:4 的 THR149、SEQ ID NO:6 的 HIS166、SEQ ID NO:8 的THR147和SEQ ID NO: 10的ARG134，可以进行相应的突变或非保守的突变。链B中的VAL118可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，VAL118突变为中性亲水残基、大的脂族残基、带电荷的残基或芳族残基。针对SEQ ID NO:2 的 VAL116、SEQ ID NO:4 的 ILE150、SEQ ID NO:6 的 VAL167、SEQ ID NO:8 的ILE148和SEQ ID NO: 10的VAL135，可以进行相应的突变或非保守的突变。另外，例如，SEQ ID N0:2的LYS 37可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，它可以突变成Glu、Asp、Gln、Asn、Thr或Ser,或破坏它的氢键键合或形成盐桥的能力的另一种残基。SEQ ID NO: 2的ARG30和SEQ ID NO: 10的ARG40可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，它可以突变成Glu、Asp、Gln、Asn、Thr或Ser,或破坏它的氢!键键合或形成盐桥的能力的另一种残基。位点3在一个实施方案中，IL-17R结合蛋白包含含有2个亚基的IL-17细胞因子，其中一个受体结合面的位点3包括一个或多个突变，例如，至少2个或3个突变，例如，非保守突变或本文所述的突变。例如，一个或多个下述的位点3残基(基于IL-17F和SEQ ID NO: 12的编号而鉴别)被突变链 A :LEU75、ILE86、SER87、ASN89、VAL91、VAL125、PR0127、VAL128、ILE129、HIS130、HIS131 和 VAL132 和 / 或链 A 可以在 VAL125、THRl26, PR0127、VAL128,ILE129、HIS130、HIS131 或 VAL132 之前的残基处被截短；和链 B :MET40、ARG42、ILE44 和ARG47，和在如图4D所示的IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D和IL-17E中的对应残基。在一个实施方案中，所述结合蛋白包括至少一个在位点3的前述链A残基之一中的突变和至少一个在前述链B残基之一中的突变。可以在位点3中进行的一些示例性突变包括链B中的ARG42可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ARG42突变为脂族残基、中性亲水残基、酸性残基或芳族残基。例如，ARG42突变为 Glu、Asp、Trp 或 Ala。针对 SEQ ID NO: 2 的 SER40、SEQ ID NO: 4 的 TRP69、SEQ ID NO: 6的ALA81、SEQ ID NO:8的PR069和SEQ ID NO: 10的GLY51，可以进行相应的突变或非保守
的突变。链B中的ILE44可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ILE44突变为中性亲水残基、小的脂族残基、带电荷的残基或芳族残基。针对SEQID NO:2 的 TYR42、SEQ ID NO:4 的 SER7USEQ ID NO:6 的 THR83、SEQ ID NO:8 的 THR71 和SEQ ID NO: 10的LEU53，可以进行相应的突变或非保守的突变。链B中的ARG47可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ARG47突变为脂族残基、中性亲水残基、酸性残基或芳族残基。例如，ARG47突变为 Glu、Asp、Gln 或 Asn。针对 SEQ ID NO: 2 的 ARG45、SEQ ID NO: 4 的 ARG74、SEQ ID NO: 6的ARG86、SEQ ID NO:8的ARG74和SEQ ID NO: 10的ARG56，可以进行相应的突变或非保守
的突变。链A中的LEU75可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，LEU75突变为中性亲水残基、小的脂族残基、带电荷的残基或芳族残基。针对SEQID N0:2 的 LEU73、SEQ ID NO:4 的 LEU102、SEQ ID NO:6 的ARGl14、SEQ ID N0:8 的ARG102和SEQ ID NO: 10的PR084，可以进行相应的突变或非保守的突变。链A中的ILE86可以突变成另一种氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ILE86突变为中性亲水残基、小的脂