专利名称：：人pak7基因的用途及其相关药物的制作方法技术领域：，更具体地涉及人PAK7基因的用途及其相关药物。：核糖核酸干扰(RNAinterference，RNAi)现象是指当与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA(dsRNA)导入細胞后，该mRNA发生特异性降解，而导致该基因表达的沉默。研究表明，长度为21-23nt的双链RNA能够在转录和转录后水平特异性的引起RNAi(TuschlT,ZamorePD,SharpPA,BartelDP.RNAi:double-strandedRNAdirectstheATP-dependentcleavageofmRNAat21to23nucleotideintervals.Cell2000；101:25-33.)。肿瘤是威胁人类健康的主要疾病。肿瘤患者虽经化疗、放疗和综合治疗，但五年生存率仍很低，如能对肿瘤发病和进展有关的基因进行干预，将能为肿瘤的治疗开辟新途径。近年来，RNAi已成为肿瘤的基因治疗的有效策略。利用RNAi技术可以抑制原癌基因、突变的抑癌基因、細胞周期相关基因、抗凋亡相关基因等的表达来抑制肿瘤的发生和发展(Uprichard,SusanL.ThetherapeuticpotentialofRNAinterference.FEBSLetters2005；579:5996-6007.)。p21活化激酶(p21-aCtiVatedkinase,PAK)家族是进化上高度保守的苏氨酸/丝氨酸激酶，为Mio家族小鸟苷三磷酸酶(Iiho-GTPase)Cdc42和Rac下游重要的靶蛋白，也是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径的上游调节因子。PAK家族蛋白參与许多重要的细胞活动，如細胞骨架的动力学调节、細胞运动、生存和凋亡、細胞周期、基因转录调节、細胞生长信号转导和转化等(KumarR,VadlamudiRK.EmergingFunctionsofp21_ActivatedKinasesinHumanCancerCells.JCellPhysiol.2002；193(2):133-44.SellsMA,BoydJT,ChernoffJ.p21-activatedkinase1(Pakl)regulatescellmotilityinmammalianfibroblasts.JCellBiol.1999；145(4):837-49.VadlamudiRK,KumarR.P2トactivatedkinasesinhumancancer.CancerMetastasisRev.2003；22(4):385-93.EdwardsDC,SandersLC,BokochGM,GillGN.ActivationofLIM-kinasebyPaklcouplesRac/Cdc42GTPasesignallingtoactincytoskeletaldynamics.NatCellBiol.1999；1(5)253-9.)。根据PAK家族成员的同源程度可将其分为两个亚组:A组(包括ΡΑΚΙ-；)和B组(包括PAK4-6)。PAK7是最后被克隆的PAK家族成员，定位于染色体20pl2位，编码SOkD蛋白。该蛋白含⑶C42/Racl相互作用样式和GIPase结合结构域。PAK7可被p21激活并进一步激活下游的MAPK信号通路，具有自我磷酸化和自我激活的能力。PAK7蛋白定位在线粒体膜上，于112位丝氨酸磷酸化BAD蛋白(CotteretS，JafferZM,BeeserA,ChernoffJ.p21-Activateakinase5(PaK5)localizestomitochondriaandinhibitsapoptosisbyphosphorylatingBAD.MolCellBiol.2003；23(16):55^-39.)，也能在激活蛋白激酶AKT后于136位丝氨酸磷酸化Bcl-2家族的促凋亡蛋白BAD(CotteretS，Chernoffj.NucleocvtoplasmicshuttlingofPak5regulatesitsantiapoptoticproperties.MolCellBiol.2006；26(8):3215-30.)，从而实现直接和间接对细胞凋亡的抑制(GirouxV,DagornJし，IovannaJL.AReviewofKinasesImplicatedmPancreaticLancer.Pancreatology.2009(6)；9:738-54.)。研究还发现，PAK7蛋白可在細胞核和线粒体之间穿梭，而精确的亚細胞定位对其发挥抑制凋亡作用至关重要。PAK7还參与細胞运动，通过下调MARK2蛋白保持微管稳定，引起F-肌动蛋白网络紊乱，应激纤維和粘着斑消失，使細胞形成伪足(MateniaD，GriesshaberB，LiXY,ThiessenA，JohneC，JiaoJ，MandelkowE，MandelkowEM.PAK5kinaseisaninhibitorofMARK/Par-1，whicnleadstostablemicrotubulesanddynamicactin.MolBiolCell.2005；16(9):4410-22.TimmTiMateniaD，LiXY,GriesshaberB，MandelkowEM.SignalingfromMARKtotau-regulation，cytoskeletalcrosstalk，andpathologicalphosphorylation.NeurodegenerDis.2006；3(4-5):207-17.)PAK7主要在脑中特定、持续表达(PandeyA,DanI，KristiansenTZ，WatanabeNM,VoldbyJ，KajikawaΕ，Knosravi-FarR，BlagoevB，MannΜ.CloningandcharacterizationofPAK5，anovelmemberofmammalianp21_activatedkinase—IIsubfamilythatispredominantlyexpressedinbrain.Oncogene.2002；21(24)3939-48.)，并且PAK7过表达在N1E-115細胞中促进神经突的生长和延伸，而且PAK7的突变表现出抑制神经突生长的功能，提示其在脑发育过程起着重要作用(DmC，NathN，LibertoΜ,MindenΑ.ΡΑΚ5,anewDrainspecifickinase,promotesneuriteoutgrowthinNlE-115cells.MolCellBiol.2002；22(2):567-77.)。在临床中发现PAK7在结直肠癌中高表达，且随着恶性程度増加表达水平提高，并通过调节細胞粘附和迁移促进结肠癌转不多(GongW,AnZ，WangY，PanX，FangW,JiangB，ZhangH.P21_activatedkinase5isoverexpressedduringcolorectalcancerprogressionandregulatescolorectalcarcinomaceiladhesionandmigration.IntJCancer.2009；125(3):548_55·)。*石if究发现联合抑制ΡΑΚ7、ΜΑΡ3Κ7和CK2，可获得累加的凋亡诱导效应，ΡΑΚ7有望成为胰腺癌的——个有效治ヲ了半巴^、(GirouxV,DagornJC,IovannaJL.AReviewofKinasesImplicatedinPancreaticCancer.Pancreatology.2009(6)；9:738-54.)。目前，对PAK7在月中瘤细胞中的功能的研究主要集中于调节細胞运动和侵袭功能方面。关于PAK7在肿瘤细胞存活、凋亡和細胞周期进展中的功能尚无报道。慢病毒(Ientivirus)载体是高效的基因转导工具，主要用于感染对常规方法转染效率较低的細胞，如原代細胞等。慢病毒颗粒可同时感染増殖和非増殖的細胞，且感染比较稳定、持久。运用慢病毒载体，可实现特定基因的高表达，也可以表达发夹结构RNA(shorthairpinRNA,shRNA)以RNA干扰(RNAinterference,RNAi)方式下调某基因的表达。RNAi是利用双链RNA介导的序列特异性的转录后基因沉默现象，已成为研究基因功能的ー种新兴的有效手段，并有望成为肿瘤等疾病基因治疗的工具(IzquierdoM.ShortinterferingRNAsasatoolforcancergenetherapy.CancerGeneTner.2005；12(3):217-27.)。本发明拟采用慢病毒介导的RNAi技术研究PKA7基因在肿瘤细胞恶性増殖中的功能，为恶性肿瘤的非手术临床治疗提供理论依据。
本发明的目的在于公开与人PAK7(P21(Cdc42/Rac)-activatedkinase7)基因相关的治疗方法及药物。本发明第一方面，公开了将人PAK7基因用于制备或筛选肿瘤治疗药物，或者将人PAK7基因用于制备肿瘤诊断药物。人PAK7基因用于制备或筛选肿瘤治疗药物包括两方面的内容其一，将人PAK7基因作为药物或制剂针对肿瘤細胞的作用靶标应用于制备肿瘤治疗药物或制剂；其ニ，将人PAK7基因作为药物或制剂针对肿瘤細胞的作用靶标应用于筛选肿瘤治疗药物或制剂。所述将人PAK7基因作为药物或制剂针对肿瘤細胞的作用靶标具体是指将人PAK7基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞产生RNA干扰作用的靶标，从而能降低肿瘤細胞人PAK7基因的表达水平。所述将人PAK7基因作为药物或制剂针对肿瘤細胞的作用靶标应用于筛选肿瘤治疗药物或制剂具体是指将人PAK7基因作为作用对象对药物或制剂进行筛选，以找到可以抑制或促进人PAK7基因表达的药物作为肿瘤治疗备选药物。如之后所述的人PAK7基因小分子干扰RNA即是以人PAK7基因为作用对象筛选获得的，可用作具有抑制肿瘤细胞增殖作用的药物。诸如抗体药物，小分子药物等也可将PAK7基因作为作用対象。所述将人PAK7基因用于制备肿瘤诊断药物，是指将人PAK7基因表达产物作为ー项肿瘤诊断指标应用于肿瘤诊断药物的制备。所述的肿瘤可以为其肿瘤細胞的増殖与人PAK7基因的表达相关的任ー种肿瘤，更进一歩的，为ー种恶性肿瘤，例如选自肺癌、胃癌和胶质瘤。所述肿瘤治疗药物可以为小分子化学药，抗体药，也可以为核酸类药物。进ー步的，所述肿瘤治疗药物能降低人PAK7基因的表达水平从而抑制肿瘤細胞的増殖。采用前述肿瘤治疗药物治疗肿瘤的方法，主要是通过降低人PAK7基因的表达水平抑制肿瘤细胞的增殖来达到治疗目的的。具体的，治疗时，将能有效降低人PAK7基因表达水平的物质给药于患者。进ー步的，所述的能有效降低人PAK7基因表达水平的物质，包括能够特异性沉默人PAK7基因表达的小分子干扰RNA(siRNA)。该小分子干扰RNA(siRNA)可以起到特异性沉默肿瘤細胞中内源PAK7基因的表达的作用。进ー步的，所述小分子干扰RNA以选自SEQIDNO:1_50之任一的序列作为特异性沉默人PAK7基因表达的靶点序列。所述小分子干扰RNA以选自SEQIDNO1_50之任一的序列作为特异性沉默人PAK7基因表达的靶点序列是指该小分子干扰RNA能与SEQIDNO1-50中的任ー种序列所编码的mRNA片段特异性结合，并特异性沉默人PAK7基因的表达。进ー步的，所述能够特异性沉默人PAK7基因表达的小分子干扰RNA(SiRNA)经由慢病毒载体表达。具体而言，这个过程包括将编码所述人PAK7基因小分子干扰RNA的DNA片段克隆入慢病毒载体获得人PAK7基因干扰慢病毒载体，进而利用该人PAK7基因干扰慢病毒载体经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒后，感染肿瘤細胞并最终表达所述siRNA。人PAK7基因干扰慢病毒载体为将编码所述人PAK7基因小分子干扰RNA的DNA片段克隆入慢病毒载体后获得，能产生人PAK7基因小分子干扰RNA。进ー步的，所述的慢病毒载体可选自pLK0.1-puro、pLKO.1-CMV-tGFP、pLKO.1-puro-CMV-tGFP,pLKO.I-CMV-Neo,pLKO.1-Neo,pLKO.トNeo-CMV_tGFP、pLKO.1-puro-CMV-TagCFP,pLKO.トpuro_CMV_TagYFP、pLKO.トpuro_CMV_TagRFP、pLKO.l-puro-CMV-TagFP635,pLKO.1-puro-UbC-TurboGFP,pLKO.l-puro-UbC_TagFP635、pLKO-puro-IPTG-lxLacO、pLKO-puro-IPTG_3xLacO、pLPl、pLP2、pLP/VSV-G、pENTR/U6、pLenti6/BL0CK-iT-DEST、pLenti6-GW/U6-laminshrna、pcDNAl.2/V5_GW/lacZ、pLenti6.2/N-Lumio/V5-DEST、pGCSIL-GFP或pLenti6.2/N-Lumio/V5-Gff/lacZ中的任ー种慢病毒载体，本发明实施例具体列举了以PGCSIL-GFP为载体。慢病毒载体可在慢病毒包装质粒、細胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒。本发明第二方面，公开了ー种分离的人PAK7基因小分子干扰RNA(SiRNA)靶标片段，其序列为SEQIDNO1-50中任意一条序列。所述分离的人PAK7基因小分子干扰RNA(SiRNA)靶标片段可应用于人PAK7基因小分子干扰RNA的筛选与制备。本发明第三方面，公开了ー种人PAK7基因小分子干扰RNA(SiRNA)，能够特异性沉默人PAK7基因的表达。所述人PAK7基因小分子干扰RNA以选自SEQIDNO1-50之任一的序列作为特异性沉默人PAK7基因表达的靶点序列。进ー步的，所述人PAK7基因小分子干扰RNA包含正义RNA片段和反义RNA片段，所述正义RNA片段和所述反义RNA片段互补，所述正义RNA片段含有SEQIDNO:1_50中之任一序列编码的RNA。所述正义RNA片段和反义RNA片段存在于两条不同的RNA链上或者存在于同一条RNA链上。所述正义RNA片段和反义RNA片段的长度均为15_27个核苷酸；较佳的，长度均为19-23个核苷酸；最佳的，长度均为19、20或者21个核苷酸。进ー步的，所述人PAK7基因小分子干扰RNA为发夹型单链RNA，包括正义RNA片段、茎环片段和反义RNA片段，正义RNA片段和反义RNA片段中间由茎环片段分隔；其中，正义RNA片段和反义RNA片段互补，正义RNA片段的序列选自SEQIDNO1-50之任一。所述茎环片段结构包括6个或9个碱基。进ー步的所述茎环片段的序列选自以下任一UUCAAGAGA、AUG、CCC,UUCG,CCACC,CTCGAG,AAGCUU、CCACACC。本发明具体列举了以UUCAAGAGA为茎环。如实施例列举的，所述人PAK7基因小分子干扰RNA的序列为SEQIDNO51=GAGCUCUCUCCUACCUUCAUAUUCAAGAGAUAUGAAGGUAGGAGAGAGCUC。本发明第四方面，公开了ー种人PAK7基因干扰核酸构建体，包含编码前述人PAK7基因小分子干扰RNA的基因片段，能表达前述人PAK7基因小分子干扰RNA。所述的人PAK7基因干扰核酸构建体可以是将编码前述人PAK7基因小分子干扰RNA的基因片段克隆入已知载体获得。进ー步的，所述人PAK7基因干扰核酸构建体为人PAK7基因干扰慢病毒载体，为将编码所述人PAK7基因小分子干扰RNA的基因片段克隆入慢病毒载体后获得，能产生人PAK7基因小分子干扰RNA。所述慢病毒载体可以选自pLK0.1-puro、pLKO.1-CMV-tGFP、pLKO.1-puro-CMV-tGFP,pLKO.I-CMV-Neo,pLKO.トNeo、pLKO.トNeo-CMV_tGFP、pLKO.1-puro-CMV-TagCFP,pLKO.トpuro_CMV_TagYFP、pLKO.トpuro_CMV_TagRFP、pLKO.l-puro-CMV-TagFP635,pLKO.1-puro-UbC-TurboGFP,pLKO.l-puro-UbC_TagFP635、pLKO-puro-IPTG-lxLacO、pLKO-puro-IPTG_3xLacO、ρLPUpLP2、pLP/VSV-G、pENTR/U6、pLenti6/BL0CK-iT-DEST、pLenti6-GW/U6-laminshrna、pcDNAl.2/V5_GW/lacZ、pLenti6.2/N-Lumio/V5-DEST、pGCSIL-GFP或pLenti6.2/N-Lumio/V5-Gff/lacZ中的任一。本发明实施例具体列举了以pGCSIL-GFP为载体构建的人PAK7基因干扰核酸构建体,命名为PAK7-shRNA-plasmid。进ー步的，编码所述人PAK7基因小分子干扰RNA的基因片段的序列含有SEQIDNO1-50中之任一序列及其互补序列。本发明的人PAK7基因小分子干扰RNA可用于抑制肿瘤細胞的増殖，进ー步地可以用作治疗或诊断肿瘤的药物或制剂。人PAK7基因干扰核酸构建体则可用于制备所述人PAK7基因小分子干扰RNA。当用作治疗肿瘤的药物或制剂时，是将安全有效量的人PAK7基因小分子干扰RNA施用于哺乳动物。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。本发明第五方面，公开了ー种人PAK7基因干扰慢病毒，由前述人PAK7基因干扰慢病毒载体在慢病毒包装质粒、細胞系的辅助下，经过病毒包装而成。该慢病毒可感染肿瘤细胞并产生人PAK7基因小分子干扰RNA，从而抑制肿瘤細胞的増殖。本发明第六方面，还公开了一种药物組合物，含有治疗有效量的人PAK7基因小分子干扰RNA或人PAK7基因干扰慢病毒。进ー步的，所述药物組合物含有199wt%如前所述的人PAK7基因小分子干扰RNA或人PAK7基因干扰慢病毒，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在制备这些組合物吋，通常将活性成分与赋形剂混合，或用赋形剂稀释，或包在可以胶囊或药囊形式存在的载体中。当赋形剂起稀释剂作用时，它可以是固体、半固体或液体材料作为赋形剂、载体或活性成分的介质。因此，组合物可以是片剂、丸剤、粉剂、溶液剂、糖浆剂、灭菌注射溶液等。合适的赋形剂的例子包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、等。制剂还可包括湿润剂、乳化剤、防腐剂(如羟基苯甲酸甲酯和丙酯)、甜味剂等。综上所述，本发明设计了针对人PAK7基因的50个RNAi靶点序列，构建相应的PAK7RNAi载体，其中编码序列SEQIDNO35的RNAi载体PAK7_aiRNA_pIasmid能够显著下调PAK7基因在mRNA水平和蛋白水平的表达。使用慢病毒(lentivirus，简写为Lv)作为基因操作工具携带RNAi载体pGCSIL-GFP-PAK7-siRNA能够靶向地将针对PAK7基因的RNAi序列高效导入人肺癌H1299細胞、胃癌SGC7901細胞和胶质瘤U251細胞，降低PAK7基因的表达水平，显著抑制上述肿瘤細胞的増殖能力。因此慢病毒介导的PAK7基因沉默是恶性肿瘤潜在的临床非手术治疗方式。本发明提供的SiRNA或者包含该SiRNA序列的核酸构建体、慢病毒能够特异性抑制人PAK7基因的表达，尤其是慢病毒，能够高效侵染靶細胞，高效率地抑制靶细胞中PAK7基因的表达，进而抑制肿瘤細胞的生长，促进肿瘤細胞凋亡，在肿瘤治疗中具有重要意义。图1表示pGCSIL-GFP质粒DNA图谱图2表示PAK7shRNA慢病毒侵染5天后，与对照慢病毒侵染组相比，人肺癌H1299細胞、胃癌SGC7901細胞和胶质瘤U251細胞中的PAK7mRNA的表达水平降低图3表示PAK7shRNA慢病毒浸染人肺癌H1299細胞5天后，显著抑制細胞増殖图4表示PAK7shRNA慢病毒浸染人胃癌SGC7901細胞5天后，显著抑制細胞増殖图5表示PAK7shRNA慢病毒浸染胶质瘤U251細胞5天后，显著抑制細胞増殖图6使用PAK7抗体在肿瘤组织样本上的免疫组化检测結果。a为胃癌b、c为肺癌具体实施例方式本发明基于PAK7相关的研究，认为PAK7可能參与了恶性肿瘤的发生和发展。本发明涉及了一组针对人PAK7基因的小分子干扰RNA(SiRNA)序列、RNA干扰载体和RNA干扰慢病毒。选取人PAK7mRNA编码区序列作为siRNA的靶位点，根据靶位点中连续的10-30(优选15-27，更优选19-2个碱基序列设计siRNA靶点序列。通过基因克隆，构建表达上述siRNA的核酸构建体，包装表达上述siRNA的慢病毒。細胞实验证明，上述siRNA序列能够特异性沉默人肿瘤細胞中内源PAK7基因的表达。发明人发现，采用RNAi方法下调人PAK7基因的表达后可有效地抑制肿瘤細胞的増殖，这ー研究成果表明PAK7基因是原癌基因，可作为肿瘤治疗的靶点。发明人进ー步合成和测试了多种针对PAK7基因的siRNA，筛选出了可有效抑制PAK7的表达进而抑制人肺癌H1299細胞、胃癌SGC7901細胞和胶质瘤U251細胞増殖和生长的siRNA，在此基础上完成了本发明。本发明提供了一系列干扰人PAK7基因的小干扰RNA(SiRNA)序列，构建了可特异性沉默PAK7基因表达的慢病毒。本发明研究发现，针对人PAK7基因设计的小干扰RNA及RNAi慢病毒，稳定并特异地下调PAK7基因的表达，并有效地抑制人肿瘤細胞的増殖。本发明表明PAK7基因可促进肿瘤細胞生长，有望成为肿瘤早期诊断和治疗的靶点。而且，通过RNAi方式沉默PAK7基因的表达，可作为抑制肿瘤发展的有效手段。本发明的设计思路为本发明通过如下方法来筛选获得ー种人PAK7基因RNAi慢病毒从Genbank中调取人PAK7基因序列；预测siRNA位点；合成针对PAK7基因的有效的siRNA序列，设计并合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA(序列由正义链、反义链、反向互补序列和环组成)；慢病毒载体双酶切后与双链DNAOligo连接，构建表达PAK7基因siRNA序列的RNAi质粒；将RNAi质粒和慢病毒包装需要的辅助载体(PackingMix,Sigma-aldrich公司)共转染人胚肾細胞^3T，产生重组慢病毒颗粒，即可制得高效沉默ΡΑΚ7基因的慢病毒(ΡΑΚ7shRNA)。基于上述方法，本发明提供了50个干扰PAK7基因的有效靶点(具体如SEQIDNO1-50所示)，构建了特异干扰人PAK7基因的慢病毒。同时本发明还公开ー种人PAK7基因RNAi慢病毒及其制备与应用。本研究发现，利用慢病毒介导的RNAi方法，在降低PAK7基因在肿瘤細胞中的表达后，可以有效抑制肿瘤細胞的増殖。本研究表明，PAK7基因是ー个原癌基因，可促进肿瘤细胞増殖，在肿瘤发生和发展中具有重要的生物学功能，PAK7基因可以为肿瘤治疗的靶标，慢病毒介导的PAK7基因特异性沉默可作为肿瘤治疗的ー种新手段。下面结合实施例进ー步阐述本发明。应理解，实施例仅用于说明本发明，而非限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法及未说明配方的试剂均为按照常规条件，如[美]Sambrook.J等著；黄培堂等译。分子克隆试验指南，第三版。北京科学出版社2002中所述的条件或者制造商建议的条件进行或配置。实施例1针对人PAK7基因RNAi慢病毒的制备1.筛选针对人PAK7基因的有效的SiRNA靶点从Genbank调取PAK7(NM_177990)基因信息；利用上海吉凯基因化学技术有限公司的设计软件Genechem设计针对PAK7基因的有效的siRNA靶点。在PAK7基因的编码序列(CDQ区域内，每隔ー个碱基起始获得21个碱基的序列，表1列出了其中50条针对PAK7基因的有效siRNA靶点序列；通过Genbank数据库进行进行BLAST分析，确定其不对任何其它基因产生干扰作用。表1靶向于人PAK7基因的siRNA靶点序列权利要求1.人PAK7基因在制备或筛选肿瘤治疗药物，或者在制备肿瘤诊断药物中的用途。2.如权利要求1所述的用途，其特征在干，所述的肿瘤为其肿瘤細胞的増殖与人PAK7基因的表达相关的任ー种肿瘤。3.如权利要求1所述的用途，其特征在干，所述的肿瘤选自肺癌、胃癌和胶质瘤。4.一种分离的人PAK7基因小分子干扰RNA靶标片段，其序列为SEQIDN0:l_50中任意一条序列。5.ー种人PAK7基因小分子干扰RNA，能够特异性沉默人PAK7基因的表达。6.如权利要求5所述人PAK7基因小分子干扰RNA，其特征在干，所述人PAK7基因小分子干扰RNA以选自SEQIDNO1_50之任一的序列作为特异性沉默人PAK7基因表达的靶点序列。7.如权利要求5所述人PAK7基因小分子干扰RNA，其特征在干，所述人PAK7基因小分子干扰RNA包含正义RNA片段和反义RNA片段，所述正义RNA片段和所述反义RNA片段互补，所述正义RNA片段含有SEQIDNO1-50中之任一序列编码的RNA。8.如权利要求7所述人PAK7基因小分子干扰RNA，其特征在干，所述正义RNA片段和反义RNA片段的长度均为15-27个核苷酸。9.如权利要求7所述人PAK7基因小分子干扰RNA，其特征在干，所述人PAK7基因小分子干扰RNA为发夹型单链RNA，所述正义RNA片段和所述反义RNA片段中间由茎环片段分隔。10.如权利要求9所述人PAK7基因小分子干扰RNA，其特征在干，所述茎环片段的序列选自以下任一UUCAAGAGA、AUG、CCC、UUCG、CCACC、CTCGAG、AAGCUU、CCACACC。11.如权利要求5所述人PAK7基因小分子干扰RNA，其特征在干，所述人PAK7基因小分子干扰RNA的序列为SEQIDNO:51。12.—种人PAK7基因干扰核酸构建体，包含编码权利要求5-11任ー权利要求所述人PAK7基因小分子干扰RNA的基因片段，能表达人PAK7基因小分子干扰RNA。13.如权利要求12所述人PAK7基因干扰核酸构建体，其特征在干，所述人PAK7基因干扰核酸构建体为人PAK7基因干扰慢病毒载体。14.如权利要求13所述人PAK7基因干扰核酸构建体，其特征在干，所述慢病毒载体选_:pLK0.1-pur。、pLKO.1-CMV-tGFP、pLKO.l-puro-CMV-tGFP、pLKO.I-CMV-Neo,pLKO.l-Neo、pLK0.l-Neo-CMV-tGFP、pLKO.l-puro-CMV-TagCFP、pLKO.1-puro-CMV-TagYFP、pLKO.1-puro-CMV-TagRFP,pLKO.トpuro-CMV_TagFP635、pLKO.トpuro-UbC-TurboGFP、pLKO.l-puro-UbC-TagFP635>pLKO—puro—IPTG—lxLacO、pLKO—puro—IPTG—3xLac0、pLPl、pLP2、pLP/VSV-G,pENTR/U6、pLenti6/BL0CK_iT_DEST、pLenti6-Gff/U6-laminshrna,pcDNAl.2/V5-GW/lacZ、pLenti6.2/N-Lumio/V5_DEST、pGCSIL-GFP或pLenti6.2/N-Lumio/V5-Gff/lacZ中的任一。15.ー种人PAK7基因干扰慢病毒，由权利要求12-14任ー权利要求所述人PAK7基因干扰慢病毒载体在慢病毒包装质粒、細胞系的辅助下，经过病毒包装而成。16.一种药物組合物，含有治疗有效量的权利要求5-11任ー权利要求所述人PAK7基因小分子干扰RNA或权利要求15所述人PAK7基因干扰慢病毒，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。17.如权利要求16所述药物組合物，其特征在干，所述药物組合物用于治疗肿瘤，所述的肿瘤为其肿瘤細胞的増殖与人PAK7基因的表达相关的任ー种肿瘤。18.如权利要求17所述药物組合物，其特征在干，所述肿瘤为恶性肿瘤，选自肺癌、胃癌和胶质瘤之任一。全文摘要本发明公开了人PAK7基因的用途及其相关药物。本发明公开了人PAK7基因在肿瘤治疗、肿瘤诊断及药物制备中的用途。本发明还进一步构建了人PAK7基因小分子干扰RNA、人PAK7基因干扰核酸构建体、人PAK7基因干扰慢病毒并公开了他们的用途。本发明提供的siRNA或者包含该siRNA序列的核酸构建体、慢病毒能够特异性抑制人PAK7基因的表达，尤其是慢病毒，能够高效侵染靶细胞，高效率地抑制靶细胞中PAK7基因的表达，进而抑制肿瘤细胞的生长，促进肿瘤细胞凋亡，在肿瘤治疗中具有重要意义。文档编号C12N15/113GK102552937SQ20111042587公开日2012年7月11日申请日期2011年12月19日优先权日2011年12月19日发明者孙琴,曹跃琼,朱向莹,瞿红花,翁仕强,谭畅,金杨晟申请人:上海吉凯基因化学技术有限公司